检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2010年第10期41卷 1268-1273页

作者：张厚勇陈东升张懿伍宜权何启盖刘正飞华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为调查规模化猪场中戊型肝炎病毒（HEV）感染和流行特征，首先在4个猪场采集血样80份，用酶联免疫吸附试验（EusA）检测抗-HEVIgG抗体。在此基础上，作者于2007—2009年采集规模化猪场肛拭子样品415份，及规模化猪场送检的临床病猪肝脏... 详细信息

为调查规模化猪场中戊型肝炎病毒（HEV）感染和流行特征，首先在4个猪场采集血样80份，用酶联免疫吸附试验（EusA）检测抗-HEVIgG抗体。在此基础上，作者于2007—2009年采集规模化猪场肛拭子样品415份，及规模化猪场送检的临床病猪肝脏样品135份，应用巢式PCR（RT—nPCR）方法进行HEVRNA检测，将PCR扩增产物测序，利用Neighbour—joining法进行进化分析。结果：4个猪场80份血清中HEV阳性血清56份，抗一HEV抗体阳性率高达60．0％以上。8个规模化猪场中有5个猪场的肛拭子检测到HEV，肛拭子阳性率8．43％（35／415）；从临床送检的发病猪采集的肝脏样品中HEV阳性率为15．55％（21／135）；HEVRNA最早检出日龄为7d，最晚检出日龄为84d。遗传进化分析表明：测序的38株阳性毒株之间同源性为92％～100％，均属于HEV基因4型。其中，从肛拭子中分离的毒株（FJ445406）与猪源毒株DQ279091株处在同一分支上；而肝脏中分离的毒株（GQ202266．1）和人源毒株处在一个亚支，属于4型中的同一亚型，表明该毒株与人源毒株亲缘关系较近。本研究表明华中地区猪群中普遍存在HEV感染，阳性率较高。本研究为规模化猪场HEV的防控提供了依据。

关键词：规模化猪场 HEV 流行病学

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猪链球菌2型PCR快速检测试剂盒的研制及初步应用

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中国兽医学报 2008年第7期28卷 787-790页

作者：赵战勤向敏薛云吴斌胡睿铭汤细彪金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和... 详细信息

根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和稳定性。试剂盒能从病料8 h增菌的混合菌群中快速检测出猪链球菌2型菌株。试剂盒对临床样本的检测结果表明,猪链球菌2型在我国猪群发生的链球菌病例中不占主导地位。

关键词：猪链球菌2型 PCR 试剂盒特异性敏感性

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黄病毒入侵中枢神经系统的分子机制研究进展

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华中农业大学学报 2021年第4期40卷 85-93页

作者：陈浩威崔旻华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

临床上黄病毒可以引起中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病,易造成神经系统的后遗症。黄病毒可以通过血源性途径、特洛伊木马途径和神经轴突转运的方式跨越血脑屏障(blood brain barrier,BBB)。病毒穿越BBB进入CNS后,被病毒... 详细信息

临床上黄病毒可以引起中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病,易造成神经系统的后遗症。黄病毒可以通过血源性途径、特洛伊木马途径和神经轴突转运的方式跨越血脑屏障(blood brain barrier,BBB)。病毒穿越BBB进入CNS后,被病毒激活的内皮细胞、胶质细胞和神经细胞会释放大量的炎性因子和上调表达黏附分子,将白细胞募集到CNS,白细胞浸润携带更多病毒进入CNS。普遍认为胶质细胞和神经细胞产生的炎性因子是导致BBB通透性增大的主要诱因。本文对黄病毒破坏BBB入侵CNS的分子机制研究进展进行综述,以便更好地了解黄病毒的致病机制,更有效地防范黄病毒的蔓延。

关键词：黄病毒血脑屏障内皮细胞血液途径特洛伊木马途径神经炎症嗜神经性病毒虫媒传播疾病

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特异性抑制伪狂犬病毒EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选

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中国病毒学 2006年第6期21卷 565-570页

作者：习杨周锐郭洪胡勤芹方六荣陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP0... 详细信息

EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5’端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP。将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EP0基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。

关键词： siRNA 伪狂犬病毒 EPO

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猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达

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中国兽医学报 2006年第3期26卷 271-274页

作者：王大鹏吴斌周锐唐先春陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病分室湖北武汉430070

皮肤坏死毒素(Dermonecrotictoxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克隆到pMD18-T载体并测序,结果表明,toxA基因序列与GenBank已报道的5个toxA基因序列的同源性达99.8%以上。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG的GST基因下游,转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,获得大小约173000的融合蛋白。Westernblot结果表明,该融合蛋白具有良好的反应原性。动物试验表明,该重组蛋白可以诱导小鼠产生高水平的抗体,并可抵抗致死剂量的天然DNT毒素攻击。

关键词：猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌 toxA基因克隆表达

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支原体分泌蛋白研究进展

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畜牧兽医学报 2017年第9期48卷 1572-1578页

作者：胡古月赵刚陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作为药... 详细信息

支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作为药物和疫苗的潜在靶标。然而支原体分泌蛋白研究尚处于初级阶段,已鉴定的支原体分泌蛋白很少,其在致病与免疫中的作用有待研究。笔者介绍了已发现的支原体分泌蛋白、分泌方式以及其研究方法,以期为支原体分泌蛋白相关研究提供参考。

关键词：支原体分泌蛋白靶标疫苗致病性免疫

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6-溴-靛玉红-3'-肟抑制脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞凋亡

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畜牧兽医学报 2018年第12期49卷 2753-2761页

作者：刘畅唐鑫张文劲赵春阳郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

研究6-溴-靛玉红-3'-肟(BIO)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠乳腺上皮细胞(mouse mammary epithelial cell,MMEC)凋亡的作用及机制。收集空白对照组、DMSO组、BIO单独处理组及不同浓度BIO(5、25、50nmol·L^(-1))+LPS共同处理组细胞,分别用流式细胞术检测凋亡率,利用qRT-PCR检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3和Caspase-8 mRNA的变化,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3和Caspase-8蛋白水平的变化。结果显示:BIO能够降低LPS诱导的MMECs的凋亡率,抑制凋亡基因Bak和Bax及凋亡通路蛋白Caspase-3和Caspase-8活性(P <0. 001),促进抑凋亡基因Bcl-2及Bcl-xl的活性。BIO通过调节Bax、Bak、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3和Caspase-8活性抑制LPS诱导的鼠乳腺上皮细胞凋亡。

关键词： BIO LPS 乳腺炎凋亡凋亡因子

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ALG5对猪流感病毒复制的影响

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畜牧兽医学报 2020年第7期51卷 1719-1727页

作者：杨帅科邹佳辉蒋美君赵亚馨操继跃周红波华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

在实验室前期利用猪肾细胞(PK-15)CRISPR/Cas9全基因组敲除文库(PK-15-GeCKO)筛选到猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)复制相关的宿主因子磷酸十二烷基磷酸酯-葡萄糖基转移酶(ALG5)的前提下,深入研究ALG5与SIV复制的关系。本研究利... 详细信息

在实验室前期利用猪肾细胞(PK-15)CRISPR/Cas9全基因组敲除文库(PK-15-GeCKO)筛选到猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)复制相关的宿主因子磷酸十二烷基磷酸酯-葡萄糖基转移酶(ALG5)的前提下,深入研究ALG5与SIV复制的关系。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了包含ALG5基因向导RNA(gRNA)的质粒LentiGuide-puro-ALG5,并通过慢病毒包装感染稳定表达Cas9蛋白的新生猪气管上皮(NPTr)细胞系,采用有限稀释法筛选ALG5基因敲除的单克隆细胞株,通过靶基因组测序及Western blot验证了ALG5基因在NPTr细胞上的敲除水平,通过CCK-8试验验证基因敲除细胞和野生型细胞的细胞活性。结合TCID50和Western blot试验检测了ALG5敲除和过表达对SIV复制的影响。同时,检测了SIV感染NPTr细胞后内源性ALG5蛋白表达量的变化。最后检测了ALG5敲除对猪流感毒株F26复制的影响。结果显示:获得了ALG5敲除的NPTr单克隆细胞系(ΔALG5),ALG5基因敲除细胞与野生型细胞的细胞活性无显著差异。ALG5基因敲除显著抑制SIV的增殖,过表达促进SIV的增殖。在病毒感染条件下,随着病毒的增殖,ALG5的蛋白表达量上调。ALG5基因敲除后,也可以抑制猪流感毒株F26的复制,无毒株特异性。本研究表明,ALG5是影响猪流感病毒复制过程的一个重要宿主因子,为研究猪流感病毒的复制和致病机制奠定了基础。

关键词： ALG5 CRISPR/Cas9 基因敲除猪流感病毒

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猪圆环病毒2型感染PK-15细胞差异表达miRNA和mRNA互作网络

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畜牧兽医学报 2019年第1期50卷 115-125页

作者：李畅李静何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

旨在筛选猪圆环病毒2型感染猪肾上皮细胞(PK-15)后差异表达miRNA和mRNA,并探究miRNA和mRNA之间的互作关系。使用茎环定量PCR检测多个热点miRNA在PCV2感染组和未接种病毒组之间的差异表达水平以发现差异表达miRNA,分析PCV2感染后第12小... 详细信息

旨在筛选猪圆环病毒2型感染猪肾上皮细胞(PK-15)后差异表达miRNA和mRNA,并探究miRNA和mRNA之间的互作关系。使用茎环定量PCR检测多个热点miRNA在PCV2感染组和未接种病毒组之间的差异表达水平以发现差异表达miRNA,分析PCV2感染后第12小时的蛋白质组学研究结果(GEO登录号:GSE71945)以获得差异表达mRNA,并分析差异表达miRNA和mRNA之间的互相作用关系。结果显示,在PCV2感染后第12小时miR-10b、miR-128、miR-155-5p、miR-21、miR-29b、miR-361-3p等表达量显著性变化,使用miRecords预测其靶基因,分别发现7 105、9 741、7 451、7 183、7 971、8 793个靶基因;PCV2感染后第12小时共有158个差异表达mRNA,分属于多种细胞结构成分并参与多条重要的细胞生物途径,且差异miRNA的靶基因和差异mRNA之间有大量的交集基因。上述结果表明,PCV2感染能导致细胞内多种miRNA差异表达,造成miRNA的靶基因表达紊乱,进而影响细胞正常的生命进程。

关键词：猪圆环病毒2型 PK-15细胞 miRNA mRNA 互作关系

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猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1320-1326页

作者：李畅库旭钢王俊伟李静朱玲何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应... 详细信息

为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,SYBR染料法和TaqMan探针法均能有效地扩增PCV3标准质粒以及其他阳性样品,并且对1.29×10~2~1.29×10~9拷贝·μL^(-1)的PCV3标准质粒(Pmd18-t-Cap)呈现良好的线性关系,该方法的检测灵敏度为1.29×10~2拷贝·μL^(-1),比常规PCR的灵敏度高100倍,该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应,具有良好的特异性;批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数(CV)均小于1.5%,呈良好的可重复性。用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测,结果显示本地区PCV3阳性率为8.06%(10/124),PCV2和PCV3共感染率为8.06%(10/124)。上述结果表明,本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型,为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段。

关键词：圆环病毒3型 SYBR荧光定量PCR TaqMan荧光定量PCR 检测

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