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牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株Fnbp配基结合区基因的原核表达及其免疫原性

中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：胡长敏龚瑞郑露郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

PCR扩增牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株纤粘蛋白结合蛋白(Fnbp)配基结合区基因,纯化后的扩增产物克隆到表达载体pET-28a(+)构建重组表达质粒pET-28a-Fnb,酶切鉴定和测序证明重组质粒构建成功。将pET-28a-Fnb转化大肠杆菌BL21经诱导表达... 详细信息

PCR扩增牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株纤粘蛋白结合蛋白(Fnbp)配基结合区基因,纯化后的扩增产物克隆到表达载体pET-28a(+)构建重组表达质粒pET-28a-Fnb,酶切鉴定和测序证明重组质粒构建成功。将pET-28a-Fnb转化大肠杆菌BL21经诱导表达得到重组蛋白,Western blot分析证实该蛋白具有良好的免疫学活性。重组蛋白分别与弗氏佐剂、白油佐剂、Seppic佐剂乳化后制备亚单位疫苗,间隔2周共3次腹腔注射免疫小鼠。选取三免后血清抗体效价最高的免疫组血清和小鼠分别进行粘附实验、中性粒细胞吞噬实验和乳腺内金黄色葡萄球菌灌注攻毒实验。结果:三种不同佐剂重组蛋白免疫组中白油佐剂组小鼠血清抗体效价显著高于弗氏佐剂组和Seppic佐剂组(p<0.01)。与对照组相比,重组蛋白免疫组小鼠血清粘附能力和调理中性粒细吞噬能力显著增强(p<0.05)。攻毒后24h重组蛋白免疫组小鼠乳腺金黄色葡萄球菌CFU显著低于对照组(p<0.05)。研究结果表明重组Fnbp配基结合区蛋白有良好的生物学活性和免疫原性,可以作为奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎候选亚单位疫苗。

关键词：乳腺炎金黄色葡萄球菌 Fnbp配基结合区免疫原性r

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国内外牛结核病的防控历史与现状

国内外牛结核病的防控历史与现状

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中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

牛结核病是主要由牛分枝杆菌引起的、慢性消耗性人兽共患传染病,对养牛业发展、食品安全与人类健康具有重大威胁。由于牛分枝杆菌宿主范围广,牛结核病无特异性疫苗,和快速诊断方法等原因,控制或根除牛结核病非常困难。目前已有许多发达... 详细信息

牛结核病是主要由牛分枝杆菌引起的、慢性消耗性人兽共患传染病,对养牛业发展、食品安全与人类健康具有重大威胁。由于牛分枝杆菌宿主范围广,牛结核病无特异性疫苗,和快速诊断方法等原因,控制或根除牛结核病非常困难。目前已有许多发达国家成功控制或根除了牛结核,但多耗时在二十年以上,耗资巨大。发展中国家受财力限制等多方面原因,有效控制牛结核病任重道远,发达国家控制牛结核的经验对发展中国家无疑具有借鉴意义。

关键词：牛结核病牛分枝杆菌特异性结核菌素皮内变态反应历史与现状

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融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

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中国奶业协会2009年会

作者：刘冬光廖娟红于清龙陈颖钰陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6.以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法.克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因... 详细信息

本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6.以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法.克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG 0.4mmol L-1诱导3h,目的蛋白经SDS-PAGE证实表达在上清中.Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA.检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份.检测灵敏度为69%,而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中,两种ELISA均检出17份阴性血清,特异性都为94(17/18)。因此,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下.敏感性获得了显著提高.这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。

关键词：牛结核 Rv3872 CFP-10 ESAT-6 诊断

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H1亚型猪流感病毒HA蛋白在猪血清中的抗原性比较

H1亚型猪流感病毒HA蛋白在猪血清中的抗原性比较

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：赵刚康超郭学波张安定徐卓菲周红波金梅林华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

猪流感(swine Influenza,SI)是由A型流感病毒所引起的猪的一种急性、高度传染性呼吸道疾病。临床特点为急性发热,传播迅速,发病率高,死亡率低,并且易继发感染其他病症,导致病情加剧和死亡,是危害养猪业的重要疾病之一。中国是世界上最... 详细信息

猪流感(swine Influenza,SI)是由A型流感病毒所引起的猪的一种急性、高度传染性呼吸道疾病。临床特点为急性发热,传播迅速,发病率高,死亡率低,并且易继发感染其他病症,导致病情加剧和死亡,是危害养猪业的重要疾病之一。中国是世界上最大的养猪国家,近年来中国养猪业由过

关键词：猪流感病毒猪血清抗原性

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猪β-防御素(pBD)的研究进展

猪β-防御素(pBD)的研究进展

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格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会

作者：于宾宾何启盖华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

防御素(Defensins)是抗菌肽中一类阳离子抗菌活性肽,广泛存在于动物和植物体内。它们通常都是由29-35个氨基酸组成,分子内富含精氨酸和由半胱氨酸形成的分子内二硫键。猪β防御素可抑制或杀死猪体内革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、某些真... 详细信息

防御素(Defensins)是抗菌肽中一类阳离子抗菌活性肽,广泛存在于动物和植物体内。它们通常都是由29-35个氨基酸组成,分子内富含精氨酸和由半胱氨酸形成的分子内二硫键。猪β防御素可抑制或杀死猪体内革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、某些真菌、螺旋体、被膜病毒等微生物,从而在天然免疫方面起到有效抵御外界病原微生物入侵的重要作用。由抗生素的滥用所引起的抗药性给养猪业甚至是食品工业造成了严重的影响,需要寻找其它不易使病原微生物对其产生抗药性的新的抗微生物药物。由于猪防御素独特的作用机制,它几乎无耐药性并可作为食品保鲜剂和饲料添加剂。因此,猪防御素的研究有很大的理论和实际意义。本文就猪防御素的分类、结构特征、活性与作用机理、克隆表达作此综述,并对其应用前景进行概括说明。

关键词：防御素抗菌肽

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌免疫蛋白质组学研究

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌免疫蛋白质组学研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：廖永洪张安定周明光金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种高度致死性呼吸道传染病。该病已成为集约化猪场的主要传染病之一,给我国养猪业的发展带来了巨大的经... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种高度致死性呼吸道传染病。该病已成为集约化猪场的主要传染病之一,给我国养猪业的发展带来了巨大的经济损失。APP血清型复杂,共有15个血清型,各地流行的血清型不尽相同,在我国已分离到的血清型有1、2、3、4、5、7、8、9和10型。血清型的复杂性给本病的预防和控制提出了严峻的挑战。目前商品化的疫苗包括全菌灭活疫苗以及亚单位疫苗均不能完全保护所有血清型的攻击。因此有必要鉴定更多的保守性抗原为新型高效疫苗的研制提供参考数据。

关键词：免疫原性蛋白 APP 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌免疫蛋白质组学

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应用细胞培养方法分离猪源弓形虫虫株

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河南农业科学 2009年第3期38卷 103-105页

作者：张东林惠煜周艳琴王玉海董海岚王正松赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 南阳师范学院生命科学与技术学院河南南阳473061 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 南阳市动物疫病防控中心河南南阳473010

为获得猪源弓形虫野生虫株,对细胞培养过程中的培养基种类、血清用量及培养佐剂等条件进行优化,选择最佳分离条件。对临床血清学检测呈阳性猪场的19份血液样品进行弓形虫虫株的培养检测,共获得野生虫株10株。运用PCR方法进行初步鉴定,... 详细信息

为获得猪源弓形虫野生虫株,对细胞培养过程中的培养基种类、血清用量及培养佐剂等条件进行优化,选择最佳分离条件。对临床血清学检测呈阳性猪场的19份血液样品进行弓形虫虫株的培养检测,共获得野生虫株10株。运用PCR方法进行初步鉴定,证实分离虫株为弓形虫野生虫株。结果表明,细胞培养方法是一种分离弓形虫虫株较为理想的方法。

关键词：弓形虫虫株分离细胞培养

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猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG的制备

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黑龙江畜牧兽医 2009年第8期 74-76页

作者：陆英杰钱君娣何启盖马春全邓桦佛山科学技术学院生命科学学院动物医学系广东佛山528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室/农业部微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定。结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和... 详细信息

应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定。结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和Western-blot的鉴定显示该特异性抗体IgG具有很好的免疫原性,特异性强,仅与该病毒毒株的ORF5发生特异性结合。说明兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体具有良好的免疫原性和特异性,可与猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5特异性结合,可以作为诊断试剂和诊断试剂盒的一抗。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG 制备

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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR检测方法的建立与应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR检测方法的建立与应用

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第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：李彬刘苏燕高建峰赵付伟方六荣江云波肖少波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉 430070

2006年，我国暴发的“猪高热综合征”给我国养猪业带来了巨大的经济损失，经研究表明，其致病因子为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2缺失变异株。本研究根据PRRSV变异株的序列特征，以发生缺失的Nsp2为靶基因，设计一对... 详细信息

2006年，我国暴发的“猪高热综合征”给我国养猪业带来了巨大的经济损失，经研究表明，其致病因子为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2缺失变异株。本研究根据PRRSV变异株的序列特征，以发生缺失的Nsp2为靶基因，设计一对特异性引物，建立了能够同时检测PRRSVNsp2缺失变异株和经典PRRSV的RT-PCR鉴别诊断方法。研究表明，该方法特异性好，敏感性较高。通过对华中地区大量临床病料的检测，揭示华中地区目前流行的主要是PRRSV变异株，同时表明该方法简便、可靠，可以鉴别高致病性PRRSV，为PRRSV的鉴别诊断、流行病学研究及其预防和控制提供了很好的工具。

关键词：生猪养殖猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 RT-PCR检测方法

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免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病

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四川农业大学学报 2009年第4期27卷 475-478页

作者：林涛汪开毓邓桦何启盖马春全四川农业大学动物医学院四川雅安625014 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织... 详细信息

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织切片进行检测。试验结果证明,该免疫组织化学方法具有良好的特异性、直观性,简单易行,可以对猪肺巨噬细胞中的存在的PCV2病毒抗原进行准确的定性和定位诊断。

关键词：免疫组织化学猪圆环病毒Ⅱ型诊断定位

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