检索结果-内蒙古大学图书馆

华中农业大学学报 2007年第4期26卷 439-442页

作者：马立安江涛张忠明长江大学生命科学学院荆州434025 长江大学动物科学学院荆州434025 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的... 详细信息

将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。

关键词： Ran2小GTP结合蛋白抗血清免疫印迹 FITC荧光标记

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血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

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湖北农业科学 2007年第3期46卷 427-430页

作者：江涛何会时龚大春陈声国聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学动物医学院荆州市畜牧局湖北荆州434100 长江大学动物科学学院湖北荆州434025 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第... 详细信息

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第14d)和IHA(第20d);检出持续时间方面,LAT(54d)长于ELISA(44d)和IHA(19d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8)。试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测。

关键词：龚地弓形虫 rMIC3 ELISA LAT IHA

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西加毒素细胞毒性检测方法的建立

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华中农业大学学报 2007年第4期26卷 502-506页

作者：郑露朱海郭爱珍范放李金峰赵芳杨小夏洪小柳马淑棉司徒翠华深圳市出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心深圳518067 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070

小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细... 详细信息

小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细胞与毒素作用不同时间,西加毒素剂量(x)与光密度值(y)之间的线性关系呈现差异。在10 h、15 h及20 h等不同时间,其线性方程分别为y=-0.082 6x+0.923 0(R2=0.978 9)、y=-0.044 3x+0.601 5(R2=0.962 1)、y=-0.020 4x+0.323 7(R2=0.928 1)。以10 h的检测效率最高及检测结果最准确,因此将其定为最佳检测时间。细胞病变观察也证实了以上结果。

关键词：西加毒素(P-CTX-1) 细胞毒性试验四甲基偶氮唑蓝(MTT)

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牛传染性鼻气管炎病毒gG蛋白的表达及gG-ELISA的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 806-811页

作者：颜邦芬陈锃张书环林祥梅陈颖钰晁彦杰李德学宋念华陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100029 湖北省动物疫病诊断中心武汉430064

以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可... 详细信息

以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性。包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法。应用该方法与进口试剂盒（IDEXX）平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%（351/380）。对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRVgG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性。对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%-41.5%。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gG基因 ELISA 原核表达

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AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究

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动物医学进展 2007年第4期28卷 5-8页

作者：伍海芽喻正军陈剑锋宋云峰周明光杨俊兴周红波金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物研究室湖北武汉430070

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY)。在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY。同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验。结果表明,纯化... 详细信息

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY)。在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY。同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验。结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1∶640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力。以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗。

关键词： AIV H5N1 高免卵黄抗体理化特性

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血清7型胸膜肺炎放线杆菌apxIIC-/apxIA+基因缺失重组菌株的构建与鉴定

血清7型胸膜肺炎放线杆菌apxIIC-/apxIA+基因缺失重组菌株的构建...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：刘金林林荔雯贝为成陈焕春华中农业大学动物医学院动物传染病研究室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病原分室

通过接合转移和SacB负向筛选的方法,我们构建了一株apxIIC缺失的血清7型胸膜肺炎放线杆菌重组菌株。首先构建重组转移质粒pEHA1。将pEHA1转化供体大肠杆菌β2155,并将其与野生型APP血清7型亲本菌混合培养5小时,然后涂到含霉素抗性的培... 详细信息

通过接合转移和SacB负向筛选的方法,我们构建了一株apxIIC缺失的血清7型胸膜肺炎放线杆菌重组菌株。首先构建重组转移质粒pEHA1。将pEHA1转化供体大肠杆菌β2155,并将其与野生型APP血清7型亲本菌混合培养5小时,然后涂到含霉素抗性的培养基上培养,挑取阳性克隆,接种到无抗性液体培养基,培养后涂于含有蔗糖的的培养基,培养一定时间后挑取蔗糖抗性的克隆,即可得到目的突变株。通过PCR、遗传稳定性、外毒素分泌、重组位点序列分析验证了重组菌构建成功。我们对重组菌生物学特性进行了初步研究,发现其增殖能力未受影响,对小鼠毒力显著降低。该突变株构建体系的建立为猪传染性胸膜肺炎减毒活疫苗的开发以及对胸膜肺炎放线杆菌特定基因的功能研究奠定了良好基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌接合转移负向筛选重组菌株构建鉴定

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大肠杆菌Ee株SLT-ⅡeB与FedF基因在大肠杆菌中融合表达\及抗血清的中和特性

大肠杆菌Ee株SLT-ⅡeB与FedF基因在大肠杆菌中融合表达\及抗血清...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：刘国平吴斌林艺远胡长敏郭爱珍金梅林陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 长江大学动物科学学院荆州434025 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

根据猪水肿病大肠杆菌Ee株主要免疫原性片段SLT-IIeB和FedF的基因序列,利用PCR技术克隆目的片段,并将SLT-IIeB和FedF基因依序串联于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统的GST下游,在大肠杆菌中成功获得了大小约为63ku融合蛋白GST-SF,Western... 详细信息

根据猪水肿病大肠杆菌Ee株主要免疫原性片段SLT-IIeB和FedF的基因序列,利用PCR技术克隆目的片段,并将SLT-IIeB和FedF基因依序串联于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统的GST下游,在大肠杆菌中成功获得了大小约为63ku融合蛋白GST-SF,Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原免疫新西兰兔制备血清,体外活性试验表明,所制备的抗血清能中和Ee株水肿毒素对Vero细胞的病变效应;黏附抑制试验证实抗血清能抑制E2株对猪小肠刷状缘细胞的黏附.研究表明GST-SF融合蛋白具有SLT-IIeB及FedF的中和表位。

关键词：融合表达中和特性大肠杆菌生物学活性免疫原性猪水肿病

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猪繁殖与呼吸综合征病毒HS株结构蛋白基因的克隆与序列分析

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动物医学进展 2007年第6期28卷 1-4页

作者：马朝志肖少波宁娟江云波方六荣陈焕春华中农业大学动物医学院动物病毒室农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株（VR-2332）基因序列，设计合成了ORF2a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的引物。利用RT-PCR扩增出PRRSV HS株各基因的cDNA片段，将扩增的各cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序。应... 详细信息

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株（VR-2332）基因序列，设计合成了ORF2a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的引物。利用RT-PCR扩增出PRRSV HS株各基因的cDNA片段，将扩增的各cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序。应用DNAMan软件，将测序结果与国内外已发表野毒株和疫苗株（VR-2332、Resp MLV、16244B、HN1、BJ-4、CH1-a、HB-1、HB-2、LV）的相应基因进行序列比较，并绘制系统进化树。结果表明，PRRSV HS株与美洲型的相应基因核苷酸同源性为83．6％～99．79／6，与LV株的相应基因核苷酸同源性为38．9％～49％；推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为86．6％～99．6％，与LV株的同源性为54．2％～78．2％。系统进化树表明，PRRSV HS株属于美洲型，与HN1、VR-2332、RespMLV、16244B、BJ-4亲缘关系较近。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白基因 RT—PCR 序列分析

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利用S-层蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白

利用S-层蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：刘梅郭素霞胡思顺肖运才许青荣毕丁仁孙明华中农业大学动物医学院武汉 430070 农业微生物学国家重点实验室武汉 430070 农业微生物学国家重点实验室武汉 430070 华中农业大学动物医学院武汉 430070 华中农业大学动物医学院武汉 430070 农业微生物学国家重点实验室武汉 430070

利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统研究在细胞表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白PMGA1.2的可行性及其免疫原性，为研制能常温长期保藏和运输的禽用口服疫苗奠定基础。用部分pmga1.2基因(pmga1.2p)代替S-层蛋白ctc基因中部且位于表... 详细信息

利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统研究在细胞表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白PMGA1.2的可行性及其免疫原性，为研制能常温长期保藏和运输的禽用口服疫苗奠定基础。用部分pmga1.2基因(pmga1.2p)代替S-层蛋白ctc基因中部且位于表面锚定序列sIh下游的片段，构建了2个融合基因ctc-pmga1.2p和csa-ctc-pmga1.2p(csa表csaAB操纵元，其与S-层蛋白牢固地锚定到细胞表面密切相关);将含融合基因的重组质粒电转化入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株BMB171中，获得了2个重组菌株BCCG(含ctc-pmga1.2p和携带csaAB操纵元的质粒)和CG(含csa-ctc-pmga1.2p)。血凝和血凝抑制试验结果显示，2个重组菌株均成功地在细胞表面展示了重组蛋白PMGA1.2P;小鼠免疫学实验证实，2个重组菌株所展示的重组蛋白均具有免疫原性，其中，重组菌株CG的免疫效果优于BCCG。结果表明，苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统可被用来研制热稳定性禽用口服疫苗。

关键词：苏云金芽胞杆菌鸡毒霉形体粘附素蛋白口服疫苗融合基因免疫原性

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RNA干扰抗A型流感病毒的研究

RNA干扰抗A型流感病毒的研究

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：周红波金梅林喻正军徐晓娟彭亚平伍海芽刘金林刘虎曹胜波陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院动物病毒实验室

RNA 干扰是抑制基因表达的强有力工具。近年来,利用小 RNA 诱导 RNA 降解已被广泛应用来研究抗病毒制剂。本研究中,我们以流感病毒中高度保守基因 NP 和 M2为靶序列设计了5对 siRNA(pS-M48,pS-M754,pS-M949,pS-NP749

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