检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2012年第2期43卷 275-281页

作者：库旭钢张坤刘羽茜何启盖农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行... 详细信息

目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行病毒分离传代。再对分离毒株进行常规RT-PCR鉴定和电镜观察,并对分离毒株的VP6、VP7和VP8基因进行测序及序列分析。结果成功分离猪A群轮状病毒TM-a株,经序列同源性分析发现,与TM-a株VP6、VP7和VP8基因同源性最高的毒株分别为中国北京人源LL3354株、印度人源RMC321株和日本野猪源GUB-71株,其相似性为96.0%、95.1%和97.0%。该TM-a株轮状病毒不同基因表现出与人源轮状病毒和猪源轮状病毒的高度同源性,推测猪A群轮状病毒可能在人畜间传播,发生基因重组现象。

关键词：猪A群轮状病毒分离鉴定

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N-糖基化对乙型脑炎病毒感染与增殖的影响

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农业生物技术学报 2012年第3期20卷 316-320页

作者：张子重汪雪宋云峰陈焕春华中农业大学动物医学院动物传染病室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

N-糖基化对于病毒的感染与增殖中均具有重要作用,切除病毒表面糖链或抑制病毒糖基化修饰的方法已成为登革热病毒等的潜在治疗方法。为阐明日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)表面的糖链在其感染和增殖过程中的作用,本... 详细信息

N-糖基化对于病毒的感染与增殖中均具有重要作用,切除病毒表面糖链或抑制病毒糖基化修饰的方法已成为登革热病毒等的潜在治疗方法。为阐明日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)表面的糖链在其感染和增殖过程中的作用,本研究用肽N-糖苷酶F(peptide N-glycosidase F,PNGase F)和内切糖苷酶H(endoglycosidase H,Endo H)处理乙型脑炎病毒,将酶切后的病毒用Western blot验证糖基化酶切的效果,将酶切的JEV接种BHK-21细胞进行蚀斑试验,观察蚀斑的大小及病毒滴度的变化情况。同时用衣霉素处理BHK-21细胞并同步接种JEV,进行蚀斑试验,观察蚀斑大小的变化与病毒增殖情况。结果显示,用Endo H和PNGase F处理JEV后,病毒形成的蚀斑均显著小于未处理的病毒对照,且病毒增殖滴度显著降低,说明病毒粒子表面的糖基化修饰对于病毒的侵染具有重要作用。衣霉素处理细胞后,病毒产生的蚀斑大小没有明显差异,但增殖滴度却显著降低,说明糖基化在JEV增殖过程中也具有重要的功能。本研究说明JEV的糖基化对于其感染和增殖均具有重要的作用,为开发抑制乙型脑炎病毒药物研究提供一个新的思路。

关键词：日本乙型脑炎病毒糖苷酶 N-糖基化感染增殖

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表达T^+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学特性

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微生物学报 2010年第1期50卷 91-97页

作者：赵战勤王臣丁轲李晓峰吴斌卢顺张春杰程相朝河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南农业大学牧医工程学院郑州450002

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其... 详细信息

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501,构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。研究结果表明重组菌株C501(pYA-PmtC)的生化特性、血清型和生长速度与亲本菌株C500一致;在没有选择压力的条件下,C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达30.5kDa的外源保护性抗原rPmtC。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106CFU,毒力稍低于C500(LD50为4.4×106CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别。【结论】本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC),为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。

关键词：猪霍乱沙门氏菌C500株产毒巴氏杆菌 Asd+平衡致死系统重组疫苗

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弓形虫SAGⅠ基因的克隆与原核表达

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华中农业大学学报 2006年第1期25卷 9-12页

作者：王金苹赵俊龙江涛周艳琴刘琴付媛姚宝安华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

利用PCR技术从弓形虫RH株基因组中扩增出SAGⅠ部分基因片段,亚克隆入表达载体pGEX-KG,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳显示表达的重组蛋白的分子量为56ku。免疫印记分析显示此表达产物能被猪抗弓形虫阳性血清... 详细信息

利用PCR技术从弓形虫RH株基因组中扩增出SAGⅠ部分基因片段,亚克隆入表达载体pGEX-KG,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳显示表达的重组蛋白的分子量为56ku。免疫印记分析显示此表达产物能被猪抗弓形虫阳性血清所识别,表明该重组蛋白具有免疫反应活性。为进一步进行弓形虫病的免疫预防和诊断研究奠定了基础。

关键词：弓形虫 SAGⅠ基因基因表达基因克隆弓形虫病

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弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达

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畜牧兽医学报 2006年第6期37卷 587-591页

作者：江涛周艳琴刘琴聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入***5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。... 详细信息

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入***5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。然后阳性重组质粒转化入***21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AJ132530)的同源性达99.6%,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别。说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：龚地弓形虫 MIC3 基因克隆表达

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长角血蜱成蜱的毛细管和生物膜2种人工饲喂技术的建立与初步应用

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中国农业大学学报 2024年第11期29卷 131-140页

作者：陈方维郑亚鑫董子榕王冰洁王健瑜陈倩关兴艾缪娟娟黄彬王佳璐赵俊龙贺兰华中农业大学动物科学技术学院动物医学院/农业微生物学国家重点实验室

为开发硬蜱人工感染技术以便于探索其与病原体之间的共生机制及传播机制，本研究将长角血蜱成蜱分为3组，分别为经毛细管饲喂后叮咬小鼠、小鼠体表叮咬后进行生物膜饲喂和小鼠体表叮咬至饱血3种方式，其中小鼠体表叮咬至饱血为对照组。... 详细信息

为开发硬蜱人工感染技术以便于探索其与病原体之间的共生机制及传播机制，本研究将长角血蜱成蜱分为3组，分别为经毛细管饲喂后叮咬小鼠、小鼠体表叮咬后进行生物膜饲喂和小鼠体表叮咬至饱血3种方式，其中小鼠体表叮咬至饱血为对照组。对饱血蜱体重、孕卵期和产卵量，以及3种饱血方式下蜱的存活率、饱血率和产卵率进行分析，最终建立了针对长角血蜱成蜱的毛细管饲喂和生物膜饲喂技术。同时，通过该技术为长角血蜱饲喂吉氏巴贝斯虫，完成了两种长角血蜱饲喂方式在吉氏巴贝斯虫蜱传性评价的初步应用。结果表明：1）毛细管饲喂后接小鼠体表叮咬的饱血方式在饱血成蜱体重、孕卵期和产卵重量3个指标上与对照组相比差异不显著（P>0.05），但在饱血率上低于小鼠生物膜饲喂和小鼠饲喂两种饱血方式。2）生物膜饲喂在产卵率和产卵重量方面略逊于对照组（P<0.05），但是在成蜱饱血后体重和孕卵期上与对照组相比差异不显著（P>0.05），饲喂成活率也与对照组一致。3）吉氏巴贝斯虫在长角血蜱成蜱吸血初期和后期均能够入侵卵巢并进入子代虫卵内。综上，本研究建立了长角血蜱毛细管和小鼠生物膜2种饲喂方式，并初步应用于吉氏巴贝斯虫的蜱传性研究。2种人工饲喂方式为探索蜱传病原体与媒介蜱的互作关系，开发杀蜱疫苗和药物筛选提供了技术平台。

关键词：长角血蜱人工饲喂蜱传病吉氏巴贝斯虫

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支气管败血波氏杆菌PRN黏附素R1区蛋白的免疫原性

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畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1370-1375页

作者：吴庭才赵战勤王臣张春杰吴斌程相朝何启盖河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS... 详细信息

百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实2种表达产物GST-R1和GST-PRN均具有良好的免疫学反应活性。在主动免疫保护试验中,GST-R1和GST-PRN免疫组小鼠均能产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的Bb强毒株HH0809进行鼻腔攻毒后,其保护率均为100%(9/9);当使用10 LD50HH0809攻毒时,其保护率分别为33.3%(3/9)和77.8%(7/9)。在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-R1和GST-PRN兔抗血清均能100%(10/10)保护小鼠抵抗10 LD50HH0809的腹腔攻击,但经PRN吸附后的2种兔抗血清均失去了保护力(0/5)。这些研究结果表明,重组PRN的N端R1区多肽具有良好的免疫原性。

关键词：支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素免疫原性

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多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌

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畜牧兽医学报 2009年第8期40卷 1222-1228页

作者：薛云赵战勤陈杨邹浩勇何启盖李文洁熊金凤陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一... 详细信息

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一PCR条件进行系统优化后建立5重PCR方法。该多重PCR方法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板进行扩增,且在5种病原菌之间没有交叉反应;对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的检测结果均为阴性;对5种病原菌DNA模板检出的最小量均低于160 pg,且能从攻毒小鼠(App、Hps、Bb和T+Pm)肺脏组织8 h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌。对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明,5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在,且混合感染情况十分严重。这些试验结果表明该多重PCR方法可用于猪呼吸道病原菌App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查。

关键词：猪呼吸道病原多重PCR 检测

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神农架川金丝猴源肠道粪肠球菌的分离与鉴定

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兽类学报 2017年第4期37卷 389-398页

作者：呙会会白文妹李翔杨敬元姚辉肖运才华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北神农架金丝猴保育生物学湖北省重点实验室

通过培养特征、形态观察、抑菌性实验,从神农架健康野生金丝猴肠道分离到8株抑菌效果明显的菌株;生理生化鉴定和16S rRNA基因序列同源性分析,该8株菌为粪肠球菌。毒力因子检测和动物急性毒性实验筛选出2株安全性良好的菌株,研究两菌株... 详细信息

通过培养特征、形态观察、抑菌性实验,从神农架健康野生金丝猴肠道分离到8株抑菌效果明显的菌株;生理生化鉴定和16S rRNA基因序列同源性分析,该8株菌为粪肠球菌。毒力因子检测和动物急性毒性实验筛选出2株安全性良好的菌株,研究两菌株对胃肠道环境(低pH值、高胆盐)的耐受特性和生长情况。结果表明,粪肠球菌dlt7a和dlt7b株繁殖能力很强,无迟缓期,具有较强的耐受胃酸及肠道高胆盐环境的能力,且安全性好,具有较好的益生特性,可作为金丝猴微生态制剂的候选菌株。

关键词：金丝猴粪肠球菌分离鉴定益生菌

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检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争ELISA方法的建立

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农业生物技术学报 2008年第4期16卷 555-561页

作者：卢顺向敏吴斌赵战勤汤细彪但汉并张建民何华陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗... 详细信息

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体。经实验确定抗原包被浓度223 ng/mL,待检血清最佳稀释度1∶2,酶标单抗AH12工作浓度1∶3 200,血清抑制率大于50%为阳性。稳定性试验表明,批间和批内变异系数均小于10%。应用竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时检测50份已知血清和82份未知血清,已知血清检测结果显示两者阳性符合率为90%,阴性符合率为100%;未知血清检测结果显示竞争ELISA的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%。表明所建立的单抗竞争ELISA方法具有敏感、特异、稳定和简便等特点,在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值。

关键词：多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体单抗竞争ELISA 抗体检测

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