检索结果-内蒙古大学图书馆

吉林畜牧兽医 2007年第6期28卷 9-10,13页

作者：江涛何会时聂浩陈声国赵俊龙长江大学动物科学学院湖北荆州434025 荆州市畜牧局湖北荆州434100 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(... 详细信息

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。

关键词：刚地弓形虫 rMIC3 ELISA LAT

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西加毒素小鼠生物学检测法的建立

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动物医学进展 2007年第10期28卷 17-22页

作者：朱海郑露王爱辉范放郭爱珍李金峰杨晓夏赵芳深圳市出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心广东深圳518067 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

旨在建立西加毒素小鼠生物学检测法。采用19 g^21 g的昆明系雄性小鼠,将一系列不同浓度的西加毒素(P-CTX-1)标准溶液通过腹腔注入小鼠体内,观察其中毒症状,确定1个鼠单位(mu)所代表的毒素剂量,并且建立剂量-中间死亡时间曲线。结果表明... 详细信息

旨在建立西加毒素小鼠生物学检测法。采用19 g^21 g的昆明系雄性小鼠,将一系列不同浓度的西加毒素(P-CTX-1)标准溶液通过腹腔注入小鼠体内,观察其中毒症状,确定1个鼠单位(mu)所代表的毒素剂量,并且建立剂量-中间死亡时间曲线。结果表明对我国昆明系雄性小鼠腹腔注射西加毒素,1个鼠单位所对应的P-CTX-1剂量值约为9.10 ng,其95%可信限为8.67 ng^9.56 ng;剂量-中间死亡时间曲线方程为y=244.9x-1.3937;其中y代表致死时间,x表剂量;将死亡时间t变为时间倒数1/t,对CTX的毒性mu取对数即logmu,得直线回归方程y=1.2076 x-0.047,R2=0.9921,其中y代表西加毒素毒性的对数(logmu),x代表小鼠死亡时间倒数(1/t),R为相关系数。同时利用该方法在0.1、0.2、0.3 ppb 3个浓度水平进行验证试验,结果表明,方法的总体平均回收率为46.58%~50.23%,相对标准偏差范围为1.17%~2.28%。

关键词：西加毒素 P-CTX-1 小鼠生物法鼠单位(mu) LD50

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弓形虫MIC3亚单位疫苗的免疫效果观察

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湖北畜牧兽医 2007年第5期28卷 10-12页

作者：江涛赵年彪韩有元赵俊龙长江大学动物科学学院湖北荆州434025 荆州职业技术学院生物工程系湖北荆州434100 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

将重组的弓形虫微线体蛋白MIC3(rMIC3)25μg以皮下注射的方式,间隔2周3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的谷胱甘肽转移酶(GST)和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试验小鼠血清特异性抗体,并在3免后腹腔接种弓形... 详细信息

将重组的弓形虫微线体蛋白MIC3(rMIC3)25μg以皮下注射的方式,间隔2周3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的谷胱甘肽转移酶(GST)和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试验小鼠血清特异性抗体,并在3免后腹腔接种弓形虫RH株速殖子1×103个/鼠,观察其免疫保护效果。结果表明,与GST和PBS对照组小鼠相比,rMIC3组试验小鼠在3免后的ELISA抗体水平极显著提高(P<0.01),免疫小鼠的生存时间明显延长(P<0.05)。上述结果为研制弓形虫基因工程亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫(Toxoplasma gondii) rMIC3 亚单位疫苗存活率

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弓形虫与附红细胞体人工混合感染猪的临床试验

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湖北畜牧兽医 2007年第8期28卷 7-7,10页

作者：江涛赵年彪陈声国赵俊龙长江大学动物科学学院湖北荆州434025 荆州职业技术学院生物工程系湖北荆州434100 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为探讨弓形虫与附红细胞体混合感染猪的临床症状,将试验猪分为4组,分别皮下接种弓形虫RH株速殖子、附红细胞体、弓形虫+附红细胞体及生理盐水,观察其临床症状。结果表明,分别接种弓形虫和附红细胞体的试验猪出现发热、食欲减退、皮肤发... 详细信息

为探讨弓形虫与附红细胞体混合感染猪的临床症状,将试验猪分为4组,分别皮下接种弓形虫RH株速殖子、附红细胞体、弓形虫+附红细胞体及生理盐水,观察其临床症状。结果表明,分别接种弓形虫和附红细胞体的试验猪出现发热、食欲减退、皮肤发红、便秘等临床症状;混合感染弓形虫和附红细胞体的试验猪上述症状加重。该试验为弓形虫和附红细胞体混合感染猪的临床诊断提供了一定的资料。

关键词：刚地弓形虫附红细胞体猪临床症状

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人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原纯化方法的比较

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长江大学学报（自科版）（下旬） 2007年第3期4卷 217-219页

作者：江涛刘锦宏赵俊龙长江大学动物科学学院湖北荆州434025 荆州市传染病医院检验科湖北荆州434100 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

目的:探讨人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原的纯化。方法:采用SDS-PAGE和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GST亲和层析法与复性透析法对rMIC3纯化的影响。结果:2种方法纯化的rMIC3的SDS-PAGE分析显示,目的蛋白带明显,杂蛋白带少;2种方法纯化... 详细信息

目的:探讨人弓形虫病重组蛋白MIC3诊断抗原的纯化。方法:采用SDS-PAGE和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GST亲和层析法与复性透析法对rMIC3纯化的影响。结果:2种方法纯化的rMIC3的SDS-PAGE分析显示,目的蛋白带明显,杂蛋白带少;2种方法纯化的rMIC3的ELISA检测结果差异无显著性(P>0·05)。结论:大量纯化的弓形虫rMIC3为人弓形虫病诊断试剂的研制和推广应用奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫(Toxoplasma gondii) MIC3 纯化方法

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湖北省部分猪场弓形虫感染的血清学调查

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湖北畜牧兽医 2007年第6期28卷 22-22,25页

作者：江涛何会时赵年彪韩有元赵俊龙长江大学动物科学学院湖北荆州434025 湖北省荆州市畜牧局湖北荆州434020 荆州职业技术学院生物工程系湖北荆州434100 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对湖北省部分猪场的弓形虫病进行血清学调查,共检测猪血清293头份。结果表明,阳性血清103头份,平均阳性率为35.2%,其中,母猪的感染率最高(53.8%),育肥猪次之(42.6%),仔猪最低(12.8%)。

关键词：刚地弓形虫(Toxoplasma gondii) ELISA 感染率

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鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒效果研究

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生物工程学报 2006年第5期22卷 737-743页

作者：韦琴彭贵青金梅林朱裕东周红波郭红燕陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病毒室武汉430070

通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素(ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp),利用基因重组技术构建了***/pET-28a(+)-IFNα,使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6... 详细信息

通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素(ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp),利用基因重组技术构建了***/pET-28a(+)-IFNα,使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag融合。经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE,Western-blot分析证实表达出22kD左右的融合蛋白,表达的蛋白以不溶性的包涵体形式存在并且具有良好的免疫学活性。提纯的包涵体纯度可达70%以上,用镍亲和层析方法纯化蛋白则可达到95%。经透析复性后的蛋白在鸡胚成纤维细胞上能够抑制H9N2禽流感病毒的复制。鸡胚试验中重组干扰素抗病毒效果好在H9N2禽流感病毒攻毒组中,能保护鸡胚并使其孵出率达到100%的重组干扰素最小蛋白含量为2μg;重组干扰素对新城疫病毒复制也有一定的抑制能力,延迟该病毒复制时间为12h至48h;雏鸡试验表明重组干扰素也能较好地抵抗H9N2禽流感病毒对雏鸡的感染。两组试验均表明,亲和层析纯化蛋白是包涵体蛋白活性的20倍左右。

关键词： ChIFN-α基因抗病毒效果 H9N2禽流感病毒新城疫病毒

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猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型RTX毒素I的N-端表达多肽具有良好的免疫原性

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生物工程学报 2006年第1期22卷 39-45页

作者：梅岭周锐卢海松贝为成刘维红林荔雯洪文洲陈焕春农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表... 详细信息

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表达产物ApxIA和ApxIAN均以包涵体的形式存在,Westem-blot检测证实两种表达产物均具有免疫反应性.将纯化的重组蛋白(rApxIA和rApxIAN)和提取的天然毒素ApxI(nApxI)分别经腹腔免疫BALB/c小鼠,于免疫前、免疫2周和4周后分别检测了ELISA抗体和毒素中和抗体水平,结果表明,rApxIAN免疫组的ELISA抗体显著低于rApxIA免疫组和nApxI免疫组,但rApxIAN免疫组血清中和试验中测定的溶血素单位与rApxIA及天然nApxI免疫组没有显著差异.第二次免疫2周后,用1个LD50的APP血清1型J101株和2型标准菌株攻击试验动物,rApxIAN免疫组对血清1型和2型菌株的保护率分别为80%和100%.

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxI毒素 N-端多肽原核表达免疫原性

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禽流感病毒核蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 648-649,653页

作者：刘芳芳金梅林张安定但汉并陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室湖北武汉430070

目的:制备抗禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:分别用甲醛灭活的和TritonX100裂解的AIVH9N2及AIVNP基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、间接ELISA筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗AIVNPmAb的... 详细信息

目的:制备抗禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:分别用甲醛灭活的和TritonX100裂解的AIVH9N2及AIVNP基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、间接ELISA筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗AIVNPmAb的杂交瘤细胞株。mAb的效价采用间接ELISA测定,用交叉反应试验及间接免疫荧光染色法检测mAb的特异性。结果:经细胞融合、筛选及克隆化,间接ELISA法测定,mAb共得到6株能稳定分泌抗禽流感病毒NPmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4F4、1C3、1G11、1C2、1D10及2E7。1G11、1D10腹水的ELISA效价最高,分别为2-13和2-14。交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,两株mAb的特异性良好。结论:共获得6株抗AIVNP的mAb,其中2株mAb1C11和1D10的效价最高,特异性良好,为AIV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：禽流感病毒单克隆抗体特性鉴定

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一株猪源鼠伤寒沙门氏菌的耐药性鉴定及其消除

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微生物学报 2006年第5期46卷 789-795页

作者：贾爱卿刘维红郭爱珍陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着... 详细信息

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着质粒的消除而被消除。所鉴定的耐药基因有blaTEM、blaOXA-1、cat1、tet(B)、aacC2、aadA8b、dhfrXⅡ和sul1等。喹诺酮类药物的靶基因gyrA与parC位于染色体上。GyrA在耐药决定区第87位氨基酸突变(N78D),导致了喹诺酮类药物的耐药性逆转。敏感菌中扩增不到质粒毒力基因spv与rck。耐药性消除后的菌株17S1对小鼠的毒力降低(LD50增加10倍),在小鼠体内的增长与散速度也显著降低(P<0.05)。以上证据表明,鼠伤寒沙门氏菌的多重耐药性主要由质粒决定,研究开发新型质粒消除剂将对克服鼠伤寒沙门氏菌多重耐药性具有重要意义。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌耐药性质粒消除细菌毒力整合子

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