检索结果-内蒙古大学图书馆

猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型RTX毒素I的N-端表达多肽具有良好的免疫原性

生物工程学报 2006年第1期22卷 39-45页

作者：梅岭周锐卢海松贝为成刘维红林荔雯洪文洲陈焕春农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表... 详细信息

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表达产物ApxIA和ApxIAN均以包涵体的形式存在,Westem-blot检测证实两种表达产物均具有免疫反应性.将纯化的重组蛋白(rApxIA和rApxIAN)和提取的天然毒素ApxI(nApxI)分别经腹腔免疫BALB/c小鼠,于免疫前、免疫2周和4周后分别检测了ELISA抗体和毒素中和抗体水平,结果表明,rApxIAN免疫组的ELISA抗体显著低于rApxIA免疫组和nApxI免疫组,但rApxIAN免疫组血清中和试验中测定的溶血素单位与rApxIA及天然nApxI免疫组没有显著差异.第二次免疫2周后,用1个LD50的APP血清1型J101株和2型标准菌株攻击试验动物,rApxIAN免疫组对血清1型和2型菌株的保护率分别为80%和100%.

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxI毒素 N-端多肽原核表达免疫原性

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禽流感病毒核蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 648-649,653页

作者：刘芳芳金梅林张安定但汉并陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室湖北武汉430070

目的:制备抗禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:分别用甲醛灭活的和TritonX100裂解的AIVH9N2及AIVNP基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、间接ELISA筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗AIVNPmAb的... 详细信息

目的:制备抗禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:分别用甲醛灭活的和TritonX100裂解的AIVH9N2及AIVNP基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、间接ELISA筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗AIVNPmAb的杂交瘤细胞株。mAb的效价采用间接ELISA测定,用交叉反应试验及间接免疫荧光染色法检测mAb的特异性。结果:经细胞融合、筛选及克隆化,间接ELISA法测定,mAb共得到6株能稳定分泌抗禽流感病毒NPmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4F4、1C3、1G11、1C2、1D10及2E7。1G11、1D10腹水的ELISA效价最高,分别为2-13和2-14。交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,两株mAb的特异性良好。结论:共获得6株抗AIVNP的mAb,其中2株mAb1C11和1D10的效价最高,特异性良好,为AIV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：禽流感病毒单克隆抗体特性鉴定

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猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株的生物学特性及作为活疫苗表达载体的应用

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生物工程学报 2009年第1期25卷 29-36页

作者：赵战勤徐引弟吴斌程相朝李银聚汤细彪张春杰陈焕春河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C... 详细信息

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C500一致,符合猪霍乱沙门氏菌的表型特征;携带平衡表达质粒pYA3493的重组菌株ΔasdC500(pYA3493)与C500的生长速度没有明显差别;根据Reed-Muench法,测定ΔasdC500(pYA3493)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为1.1×107CFU,毒力稍低于C500;口服接种ΔasdC500(pYA3493)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别;携带重组质粒pYA-F1P2(含有支气管败血波氏杆菌抗原基因fhaB的TypeI区域和prn的R2区域)的重组菌株ΔasdC500(pYA-F1P2)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达外源保护性抗原。由此表明,ΔasdC500保留了亲本菌株C500的一系列生物学特征,并可高效表达外源抗原,可作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统开发基因工程重组疫苗。

关键词：沙门氏菌活疫苗载体 Asd^+平衡表达系统支气管败血波氏杆菌

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细菌鞭毛研究概况及进展

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微生物学通报 2005年第6期32卷 124-127页

作者：李任峰何启盖周锐陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室

鞭毛是细菌的一种特殊结构,约半数的杆菌、极少数球菌和所有的螺旋菌及弧菌都有鞭毛。鞭毛与细菌的运动有关,并在感染与免疫以及分类鉴定等方面发挥重要的作用,受到细菌研究者的高度重视。从细菌鞭毛的结构以及它在细菌致病性和免疫中... 详细信息

鞭毛是细菌的一种特殊结构,约半数的杆菌、极少数球菌和所有的螺旋菌及弧菌都有鞭毛。鞭毛与细菌的运动有关,并在感染与免疫以及分类鉴定等方面发挥重要的作用,受到细菌研究者的高度重视。从细菌鞭毛的结构以及它在细菌致病性和免疫中的作用最新研究进展加以概述,以供细菌研究者参考。

关键词：细菌鞭毛运动性抗原毒力相关因子

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表达T^+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学特性

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微生物学报 2010年第1期50卷 91-97页

作者：赵战勤王臣丁轲李晓峰吴斌卢顺张春杰程相朝河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南农业大学牧医工程学院郑州450002

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其... 详细信息

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501,构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。研究结果表明重组菌株C501(pYA-PmtC)的生化特性、血清型和生长速度与亲本菌株C500一致;在没有选择压力的条件下,C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达30.5kDa的外源保护性抗原rPmtC。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106CFU,毒力稍低于C500(LD50为4.4×106CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别。【结论】本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC),为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。

关键词：猪霍乱沙门氏菌C500株产毒巴氏杆菌 Asd+平衡致死系统重组疫苗

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支气管败血波氏杆菌PRN黏附素R1区蛋白的免疫原性

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畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1370-1375页

作者：吴庭才赵战勤王臣张春杰吴斌程相朝何启盖河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS... 详细信息

百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实2种表达产物GST-R1和GST-PRN均具有良好的免疫学反应活性。在主动免疫保护试验中,GST-R1和GST-PRN免疫组小鼠均能产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的Bb强毒株HH0809进行鼻腔攻毒后,其保护率均为100%(9/9);当使用10 LD50HH0809攻毒时,其保护率分别为33.3%(3/9)和77.8%(7/9)。在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-R1和GST-PRN兔抗血清均能100%(10/10)保护小鼠抵抗10 LD50HH0809的腹腔攻击,但经PRN吸附后的2种兔抗血清均失去了保护力(0/5)。这些研究结果表明,重组PRN的N端R1区多肽具有良好的免疫原性。

关键词：支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素免疫原性

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多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌

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畜牧兽医学报 2009年第8期40卷 1222-1228页

作者：薛云赵战勤陈杨邹浩勇何启盖李文洁熊金凤陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一... 详细信息

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一PCR条件进行系统优化后建立5重PCR方法。该多重PCR方法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板进行扩增,且在5种病原菌之间没有交叉反应;对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的检测结果均为阴性;对5种病原菌DNA模板检出的最小量均低于160 pg,且能从攻毒小鼠(App、Hps、Bb和T+Pm)肺脏组织8 h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌。对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明,5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在,且混合感染情况十分严重。这些试验结果表明该多重PCR方法可用于猪呼吸道病原菌App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查。

关键词：猪呼吸道病原多重PCR 检测

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猪源产毒素多杀性巴氏杆菌HN-13株外膜蛋白H的基因克隆与特征(英文)

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农业生物技术学报 2007年第2期15卷 183-191页

作者：李良军黎璐李健张四化吴斌陈焕春周锐农业微生物学国家重点实验室动物病原分室华中农业大学动物医学院

传染性萎缩性鼻炎是养猪业中的一种重要的呼吸道传染病,产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是其重要的病原之一,外膜蛋白H(OmpH)在该菌的致病和免疫中发挥重要作用。以产毒素多杀性巴氏杆菌血清D型菌株HN-13基因组为模板,扩增... 详细信息

传染性萎缩性鼻炎是养猪业中的一种重要的呼吸道传染病,产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是其重要的病原之一,外膜蛋白H(OmpH)在该菌的致病和免疫中发挥重要作用。以产毒素多杀性巴氏杆菌血清D型菌株HN-13基因组为模板,扩增了ompH基因1020bp编码区,经过序列测定和生物信息学分析,发现OmpH蛋白具有典型的膜通道蛋白的特征。将ompH基因克隆到原核表达载体pET-28a中构建了重组表达质粒pET-ompH,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。用纯化的重组蛋白免疫家兔制备OmpH的抗血清,Western杂交显示抗血清能够与菌体蛋白发生特异性反应。以重组OmpH为包被抗原建立了间接ELISA方法,方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为2.89μg/mL,用56份参考阴性猪血清确定阴阳界限值为0.36(OD630)。用建立的ELISA方法对192份临床猪血清样品进行检测,结果显示OmpH抗体阳性率为51.6%(99/192),阴性率为48.4%(93/192)。研究为OmpH的进一步应用奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H 克隆表达结构预测

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猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达

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中国兽医学报 2006年第3期26卷 271-274页

作者：王大鹏吴斌周锐唐先春陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病分室湖北武汉430070

皮肤坏死毒素(Dermonecrotictoxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克隆到pMD18-T载体并测序,结果表明,toxA基因序列与GenBank已报道的5个toxA基因序列的同源性达99.8%以上。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG的GST基因下游,转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,获得大小约173000的融合蛋白。Westernblot结果表明,该融合蛋白具有良好的反应原性。动物试验表明,该重组蛋白可以诱导小鼠产生高水平的抗体,并可抵抗致死剂量的天然DNT毒素攻击。

关键词：猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌 toxA基因克隆表达

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动物寄生线虫遗传多样性的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第5期33卷 387-392页

作者：殷方媛李法财赵俊龙胡敏华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

动物寄生线虫分子遗传标记的发展对兽医寄生虫学中的基础和应用研究领域有着重要意义。通过对线虫种群遗传多样性的研究,不仅能够为抗药性等位基因的扩散提供理论依据,而且对线虫病防治策略的制定具有指导作用。因此,本文就分子遗传标记... 详细信息

动物寄生线虫分子遗传标记的发展对兽医寄生虫学中的基础和应用研究领域有着重要意义。通过对线虫种群遗传多样性的研究,不仅能够为抗药性等位基因的扩散提供理论依据,而且对线虫病防治策略的制定具有指导作用。因此,本文就分子遗传标记(RFLP、RAPD、PCR-SSCP、AFLP、SSR和线粒体DNA)在寄生线虫遗传多样性研究中的应用进行综述。

关键词：动物寄生线虫遗传多样性分子遗传标记

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