检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 219-230页

作者：肖静肖坤雪王翘楚陈焕春蔡旭旺徐晓娟华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控... 详细信息

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控系统调控Flp重组酶的表达,实现抗性突变体中抗性基因的消除;然后将Flp表达质粒电转化引入*** CF7066,再自然转化介导同源重组的自杀性质粒获得有抗性标记的基因缺失突变株,调节Flp酶表达并筛选无抗突变株,提高培养温度消除表达Flp酶的温敏质粒;进一步通过筛选突变FRT位点以保证基因敲除的效率。结果表明成功构建了温敏穿梭质粒pSHG5C-Flp,证实了λcI857/P_(RM)/P_(R)表达系统可调控Flp重组酶在***中表达并切除抗性突变株ΔnanH::Kan_(R)中的抗性基因;然后用Flp重组酶表达质粒pSHG5C-Flp电转化*** CF7066,再用自杀性质粒pKF-ΔnanH和pKF-Δapd2对其进行两次连续自然转化,依次在自然转化的初代转化子中筛选并获得了无抗的单基因缺失株ΔnanH和双基因缺失株ΔnanHΔapd,提高培养温度至42℃培养消除了Flp重组酶表达质粒。尽管该系统实现了***两个基因的连续敲除,但敲除第2个基因时的效率明显下降,这很可能源于细菌细胞中Flp重组酶表达的积累,对转化质粒介导的同源重组产生了干扰。因此,作者筛选了突变的FRT位点、构建自杀性质粒pKFM-Δapd进行自然转化,显著提高了自然转化后获得突变株的效率,从而保证了该敲除系统的有效性和稳定性。本研究首次报道了可用于***的无抗性标记双基因缺失突变系统,为其分子致病基因与基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌表达调控 Flp-FRT 基因敲除无抗缺失

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猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国农业科学 2008年第12期41卷 4209-4217页

作者：赵战勤裴洁薛云汤细彪吴斌何华周学利程相朝何启盖陈焕春华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室河南科技大学动物科技学院

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 05... 详细信息

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌(55.9%)、副猪嗜血杆菌(50.0%)、大肠杆菌(43.1%)、巴氏杆菌(25.5%)、绿脓杆菌(17.6%)和沙门氏菌(11.8%)。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明:各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。

关键词：支气管败血波氏杆菌流行病学协同感染毒力因子

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小鼠和奶牛乳腺上皮细胞的分离及培养特性比较

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动物医学进展 2015年第12期36卷 56-61页

作者：刘玉辉赖金伦寇明明邓明亮刘瑞宁陈颖钰胡长敏郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

为建立小鼠乳腺上皮细胞(MMECs)及奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)分离培养体系,并比较其生长特性。分别无菌采集健康妊娠后期昆明鼠及泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺组织,采用改良混合酶消化结合差速贴壁法分离原代MMECs及BMECs,并进行细胞角蛋白18... 详细信息

为建立小鼠乳腺上皮细胞(MMECs)及奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)分离培养体系,并比较其生长特性。分别无菌采集健康妊娠后期昆明鼠及泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺组织,采用改良混合酶消化结合差速贴壁法分离原代MMECs及BMECs,并进行细胞角蛋白18的免疫荧光鉴定;通过细胞形态跟踪观察评价传代、冻存和复苏后MMECs及BMECs生物学特性;连续培养及细胞计数绘制MMECs及BMECs生长曲线。结果显示,从小鼠和奶牛乳腺组织分离的目的细胞,经角蛋白18免疫荧光鉴定证实为MMECs及BMECs;汇合的单层MMECs多角形,呈铺路石样外观,BMECs呈鹅卵石样;MMECs在传至第2代时细胞特有形状消失,而BMECs传至第9代时仍保持其鹅卵石样外观;MMECs只能复苏冻存原代细胞,传代BMECs均可冻存和复苏。采用改良混合酶消化结合差速贴壁法可获得高纯度的MMECs和BMECs,两种细胞在生长培养特性上存在显著差异。

关键词：小鼠乳腺上皮细胞奶牛乳腺上皮细胞分离培养生长特性

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长链非编码RNA在奶牛乳腺炎中作用机制的研究进展

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 396-402页

作者：杨晶涵林昌杰许灏钧李政志陈秋慧严蕊陈曦陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

奶牛乳腺炎是导致养牛业巨大经济损失的疾病,如今仍无有效防控方法。长链非编码RNA(LncRNA)既可以直接作用于m RNA,又可以通过调控mi RNA而间接作用于m RNA,从而影响下游靶基因及蛋白表达。LncRNA功能强大,广泛参与了染色体重构、核小... 详细信息

奶牛乳腺炎是导致养牛业巨大经济损失的疾病,如今仍无有效防控方法。长链非编码RNA(LncRNA)既可以直接作用于m RNA,又可以通过调控mi RNA而间接作用于m RNA,从而影响下游靶基因及蛋白表达。LncRNA功能强大,广泛参与了染色体重构、核小体修饰、可变剪接、基因组印记、靶标模拟、功能性蛋白转运、转录干扰、细胞周期及分化等多种机体重要的生理和病理学调控过程。研究证实,lncRNA在奶牛乳腺炎中发挥重要作用。本文综述了奶牛乳腺炎和lncRNA的研究背景、lncRNA的生物学功能、lncRNA在奶牛乳腺炎体内外模型中的作用、lncRNA介导奶牛乳腺炎相关信号通路的机制,并对lncRNA在乳腺炎等炎性疾病的研究与应用前景方面进行了展望。

关键词：奶牛乳腺炎长链非编码RNA 研究进展

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牛结核病免疫学诊断研究进展

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中国兽医学报 2018年第6期38卷 1250-1254,1259页

作者：彭永崇朱小洁王子健陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

牛结核病是一种严重危害养牛业、食品安全和公共卫生的人兽共惠传染病。由于检疫和扑杀是目前控制牛结核病的基本策略，检测技术成为影响牛结核病控制效果的重要因素。理想的检测方法应具有准确、简便、高效、成本低、对动物干扰小、结... 详细信息

牛结核病是一种严重危害养牛业、食品安全和公共卫生的人兽共惠传染病。由于检疫和扑杀是目前控制牛结核病的基本策略，检测技术成为影响牛结核病控制效果的重要因素。理想的检测方法应具有准确、简便、高效、成本低、对动物干扰小、结果可追溯等特点。当前的法定检疫方法为结核菌素皮内变态反应，该方法具有受环境分枝杆菌干扰、诊断特异性低、费时费力、对动物干扰大、结果判断主观性强、不可回溯等缺陷。一些牛结核实验室诊断技术克服了以上缺点，可与皮试法联用或单独使用。新型诊断抗原仍在不断被发掘，新型材料也被不断用于牛结核病诊断技术中。现对相关进展进行了归纳和综述，以期为牛结核病免疫学诊断的合理应用及深入研究提供参考。

关键词：牛结核牛分枝杆菌免疫学诊断抗原人兽共患病

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猪伪狂犬病基因缺失疫苗的制备、安全性、免疫原性、保存期测定及区域试验

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畜牧兽医学报 2005年第10期36卷 1055-1063页

作者：何启盖方六荣吴斌刘正飞吴美洲肖少波金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了提供有效的伪狂犬病疫苗,用鸡胚成纤维细胞扩大培养了PrV HB-98突变株(TK-/gG-/LacZ+),研制了伪狂犬病基因缺失疫苗,并对该疫苗经肌肉接种、经口等免疫途径的最小免疫剂量进行了测定,同时也对4批疫苗的安全性、效力、免疫期和保存... 详细信息

为了提供有效的伪狂犬病疫苗,用鸡胚成纤维细胞扩大培养了PrV HB-98突变株(TK-/gG-/LacZ+),研制了伪狂犬病基因缺失疫苗,并对该疫苗经肌肉接种、经口等免疫途径的最小免疫剂量进行了测定,同时也对4批疫苗的安全性、效力、免疫期和保存期进行了检测;同时将4批疫苗用于免疫23个猪场的母猪、新生仔猪和育肥猪进行区域试验。测定结果表明,疫苗经上述两种途径接种对不同阶段猪的最小免疫剂量均为105.0TCID50;10倍免疫剂量的疫苗对初生仔猪、15日龄仔猪和妊娠母猪是安全的,免疫猪能抵抗强毒的攻击;疫苗在4℃和-20℃下分别可保存6个月和12个月。对伪狂犬病毒抗体阴性的70日龄商品猪和种猪的免疫期为6个月。田间试验表明,4批猪伪狂犬病基因缺失疫苗安全有效,并可用于仔猪发病时的紧急接种。为猪伪狂犬病基因工程疫苗的制备与应用提供了有力的依据。

关键词：伪狂犬病基因疫缺失苗 PrY HK-98突变株安全性免疫原性区域试验

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牛支原体病诊断技术的研究进展

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中国兽医科学 2020年第10期50卷 1294-1300页

作者：刘晓雅王朝好李婷尹伊娅李雨芮陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

牛支原体感染可引起牛呼吸系统综合征、结膜炎、中耳炎、乳腺炎、关节炎甚至流产等疾病,给各国养牛业带来重大经济损失。由于目前尚无疫苗及有效的药物可用于该病的防治,及时诊断牛支原体病有利于牛场采取有效的措施以降低扩散风险,减... 详细信息

牛支原体感染可引起牛呼吸系统综合征、结膜炎、中耳炎、乳腺炎、关节炎甚至流产等疾病,给各国养牛业带来重大经济损失。由于目前尚无疫苗及有效的药物可用于该病的防治,及时诊断牛支原体病有利于牛场采取有效的措施以降低扩散风险,减少经济损失。本文就牛支原体病的临床特征、牛支原体分离培养、牛支原体免疫学检测、血清学诊断及分子诊断技术研究进展等方面进行综述,供同行参考。

关键词：牛支原体病诊断技术防控

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沙门菌检测方法研究进展

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动物医学进展 2016年第4期37卷 94-98页

作者：王杰陈颖钰彭清洁郭爱珍华中农业大学动物科技学院动物医学院/华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

沙门菌不仅是一种重要的畜禽病原菌,而且还是一种主要的食源性致病菌,对畜牧生产和公共卫生都具有巨大的威胁。因此,加强对沙门菌的快速准确检测是保障畜禽生产安全和食品安全的一种必需且有效的手段。目前沙门菌的检测方法包括传统细... 详细信息

沙门菌不仅是一种重要的畜禽病原菌,而且还是一种主要的食源性致病菌,对畜牧生产和公共卫生都具有巨大的威胁。因此,加强对沙门菌的快速准确检测是保障畜禽生产安全和食品安全的一种必需且有效的手段。目前沙门菌的检测方法包括传统细菌分离和生化鉴定、分子鉴定和免疫学检测等方法,其中,传统细菌分离并做生化鉴定的方法虽被认定为沙门菌检测的金标准,但较为耗时;分子鉴定通过检测特异性目标片段的有无,在遗传物质水平上鉴定致病菌种属;免疫学检测法则对样品中抗原或者抗体进行检测。依据各方法的特点,在不同的实际运用过程中需要选择相应的检测方法,以便实现快速诊断、及时治疗和处置相关疾病与食品安全事件的目标。

关键词：沙门菌检测方法细菌分离生化鉴定分子鉴定免疫学检测

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牛呼吸道感染细菌病原的致病机理与防控研究进展

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中国兽医学报 2016年第12期36卷 2183-2188页

作者：谢倩茹童胜涛邵咏旋姜鹏陈颖钰胡长敏郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

牛呼吸道疾病综合征(BRDC)是一种急性呼吸道疾病,其主要细菌性病原有多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌和昏睡嗜血杆菌,常见于断奶、运输等应激后牛群。该病呈世界性分布,可经呼吸道感染,严重影响肉牛及泌乳牛的品质,给养... 详细信息

牛呼吸道疾病综合征(BRDC)是一种急性呼吸道疾病,其主要细菌性病原有多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌和昏睡嗜血杆菌,常见于断奶、运输等应激后牛群。该病呈世界性分布,可经呼吸道感染,严重影响肉牛及泌乳牛的品质,给养牛业造成巨大的经济损失。国内关于BRDC的研究仍比较匮乏,且尚无可预防BRDC细菌性病原的疫苗,为更好地防控BRDC,现就国内外BRDC细菌性病原的致病机理和防控研究进展做一综述。

关键词：牛呼吸道疾病综合征多杀性巴氏杆菌溶血性曼氏杆菌化脓隐秘杆菌昏睡嗜血杆菌

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猪流行性腹泻病和猪圆环病毒病混合感染的诊治

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中国畜牧兽医 2015年第10期42卷 2753-2761页

作者：刘洋库旭钢刘晓丽何启盖农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

2014年2月,突遇降雪天气,某规模化猪场2 000头母猪中约100头母猪所产新生仔猪集中在1周龄内出现大批死亡现象,死亡前均出现呕吐、消瘦及水样稀粪症状。通过采用现场调查、实验室病理解剖、病理组织学观察、免疫组化、RT-PCR、测序、ELIS... 详细信息

2014年2月,突遇降雪天气,某规模化猪场2 000头母猪中约100头母猪所产新生仔猪集中在1周龄内出现大批死亡现象,死亡前均出现呕吐、消瘦及水样稀粪症状。通过采用现场调查、实验室病理解剖、病理组织学观察、免疫组化、RT-PCR、测序、ELISA检测等方法,本试验确定该病是猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异野毒株感染引起,同时混合感染猪圆环病毒2型(PCV2)。通过采取母猪群紧急接种疫苗、仔猪口服卵黄抗体及加强保温、消毒等综合措施,该病迅速得到控制。

关键词：猪流行性腹泻病毒 RT-PCR S基因诊断

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