检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2011年第11期32卷 1-5页

作者：刘晓乐张敏敏陈颖钰胡长敏陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学动物科技学院湖北武汉430070

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件... 详细信息

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件为94℃30s,56.2℃30s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5min,16℃10min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425bp和294bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门菌等均呈阴性反应。对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3 TCID50/0.1mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL。

关键词：双重PCR 检测方法牛副流感病毒3型牛病毒性腹泻病毒

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胸膜肺炎放线杆菌荧光抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 949-953页

作者：王贵平刘军发陈剑锋何启盖刘正飞陈焕春吴斌周锐华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128

将表达的胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白(OmlA)纯化后免疫新西兰白兔,收集高免血清作为一抗,建立了间接荧光抗体检测方法(IFA)。同时用提纯IgG标记FITC,作为荧光抗体,建立了直接荧光抗体检测方法(FA)。这2种检测方法对血清1型～12型AP... 详细信息

将表达的胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白(OmlA)纯化后免疫新西兰白兔,收集高免血清作为一抗,建立了间接荧光抗体检测方法(IFA)。同时用提纯IgG标记FITC,作为荧光抗体,建立了直接荧光抗体检测方法(FA)。这2种检测方法对血清1型～12型APP标准株检测结果均为阳性,而血清13型和15型APP标准株、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血性波氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌和链球菌等其它相关细菌的检测结果均为阴性。IFA和FA对APP的最小检出浓度分别为5.32×104CFU/mL和4.17×105CFU/mL。IFA和FA对人工感染动物和139份临床送检病料进行检测,并与细菌学检测结果和apxIV-PCR进行比较。其中,上述4种方法检测实验感染动物样品结果均为阳性,有较好的符合率;临床可疑病料中,有36份(25.90%)为IFA阳性,29份(20.86%)为FA阳性,42份(30.22%)为PCR阳性,从7份(5.03%)病料中分离到本病原。这些初步研究结果表明,所建立的荧光抗体检测方法可以应用于APP感染的检测,在检出率方面优于细菌分离鉴定方法。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌外膜脂蛋白荧光抗体

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2019-2020年湖北部分地区G9P型人轮状病毒基因特征

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中国人兽共患病学报 2022年第4期38卷 359-365页

作者：杨立君陈月米文琴唐一通范久波王媛廖诗英陈焕春何启盖江云波华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北文理学院医学部武汉430070

目的对人A组轮状病毒进行检测及分离鉴定,并研究其各基因片段的遗传进化关系。方法2019-2020年对湖北武汉市和襄阳市临床腹泻病人的粪便样品进行采集,共319份。设计特异性轮状病毒VP6基因引物,RT-PCR检测轮状病毒的感染情况。将阳性样... 详细信息

目的对人A组轮状病毒进行检测及分离鉴定,并研究其各基因片段的遗传进化关系。方法2019-2020年对湖北武汉市和襄阳市临床腹泻病人的粪便样品进行采集,共319份。设计特异性轮状病毒VP6基因引物,RT-PCR检测轮状病毒的感染情况。将阳性样品接种于MA104细胞进行轮状病毒的分离。RT-PCR特异性扩增VP6基因和特异性间接免疫荧光对其进行病毒鉴定及病毒增殖检测;并进一步通过RT-PCR扩增轮状病毒的11个基因片段,在线工具Rota C V2.0对测序结果进行分型分析。Mega软件对其全基因组序列进行遗传进化分析。结果轮状病毒感染阳性标本共69份,阳性率为21.63%。成功分离获得11株人轮状病毒,主要衣壳蛋白VP7和VP4基因型均为G9P[8]型。其中3株轮状病毒归属于类Wa株毒株,基因型图谱为G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1。8株毒株在Wa-like的基因型中具有DS-1-like的NSP4为E2基因型特征。基因型图谱为G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E2-H1。结论G9P[8]型人轮状病毒毒株在2019-2020年湖北部分地区占主导趋势,且其NSP4基因以E2基因型为主要流行形式。

关键词：轮状病毒分离鉴定基因型遗传进化分析

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奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

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中国畜牧兽医 2010年第1期37卷 123-128页

作者：刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍湖北省华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室武汉430070 湖北省华中农业大学动物科技学院武汉430070

提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100... 详细信息

提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL,7.5×104U/mL。结果表明,重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。

关键词：奶牛 β-干扰素融合蛋白抗病毒活性

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温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

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华中农业大学学报 2007年第6期26卷 817-821页

作者：李树清杜凯胡永强陈声国陈志飞周艳琴赵俊龙上海出入境检验检疫局上海200135 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温... 详细信息

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温氏附红细胞体16S rRNA基因序列的特异性片段,检测温氏附红细胞体最低DNA量为0.178 fg。利用该方法对湖北省、江苏省和黑龙江省温氏附红细胞体病感染情况进行了流行病学调查,结果显示阳性感染率分别为10.3%、5.3%、45.8%,说明温氏附红细胞体在湖北省、江苏省和黑龙江省均存在,流行病学调查显示湖北省感染率较高、流行较广。

关键词：温氏附红细胞体 PCR 16SrRNA 应用

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屎肠球菌对感染柔嫩艾美耳球虫肉鸡生长性能和肠道屏障的影响

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畜牧兽医学报 2022年第4期53卷 1210-1219页

作者：焦宇洲杨欢欢卢垚史聪聪徐晓娟蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 武汉科缘生物发展有限责任公司武汉430206

旨在探究屎肠球菌(Enterococcus faecium)对人工感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)肉鸡生长性能、存活率、盲肠损伤、粪便卵囊排出和肠道屏障功能的影响。选取体重相近的1日龄肉鸡(罗斯308)180羽,随机分为5组,包括空白对照组(NC)、... 详细信息

旨在探究屎肠球菌(Enterococcus faecium)对人工感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)肉鸡生长性能、存活率、盲肠损伤、粪便卵囊排出和肠道屏障功能的影响。选取体重相近的1日龄肉鸡(罗斯308)180羽,随机分为5组,包括空白对照组(NC)、感染对照组(PC)、70 mg·kg^(-1)盐霉素添加组(SAL)、*** 1.0×10^(8) CFU·kg^(-1)添加组(EA)和*** 2.5×10^(9)CFU·kg^(-1)添加组(EB)。NC和PC组饲喂基础饲粮,SAL、EA、EB组在分组后即开始饲喂添加盐霉素和***的饲粮,持续至试验结束。在15 d时,除NC组外所有试验组的鸡均口服感染1.0×10^(5)个***孢子化卵囊。通过分析平均日增重(ADG)、克粪便卵囊数(OPG)、盲肠损伤评分、组织病理学检查和盲肠屏障相关分子(iNOS、MUC2、Occludin、JAM2、ZO-1)的基因表达量来评价***的抗球虫效果。结果表明:1)相比于NC组,EA和EB组可以显著增加感染前ADG(P<0.05),并且感染后SAL和EB组ADG显著高于PC组(P<0.05);2)SAL、EA和EB组粪便中的卵囊数显著低于PC组(P<0.05),PC组可以观察到明显的病理损伤、炎性细胞浸润和肠绒毛断裂,而预防组(SAL、EA、EB)病变较轻微,但是所有感染组盲肠损伤评分并没有差异(P>0.05);3)在整个试验期间各组存活率分别为100%(NC)、58.33%(PC)、83.33%(SAL)、58.33%(EA)、75.00%(EB);4)相比于NC组,PC组肠道iNOS、MUC2、Occludin、JAM2和ZO-1的表达均显著下降(P<0.05),而SAL、EA、EB组均能显著提高iNOS的表达量(P<0.05);EB组肠道MUC2、Occludin和JAM2的表达量也显著高于PC组(P<0.05)。综上所述,***具有一定的抗球虫效果,可能通过调节肠道屏障相关分子的表达发挥作用。

关键词：屎肠球菌柔嫩艾美耳球虫肠道屏障

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猪圆环病毒3型的分离及致病性分析

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1568-1578页

作者：库旭钢于学祥孙琪李盼盼张梦佳罗锐钱平何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/... 详细信息

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/CH/HB/XY/2018,全基因组测序分析表明,该毒株属于PCV3a-IM基因亚型。分别用PCV3阳性病料初始匀浆液和第8代细胞培养物采用滴鼻和肌肉注射2种方式感染28日龄断奶仔猪,每组试验猪5头,并设置空白对照组。通过观察和分析试验猪的临床表现、体温、增重、病毒血症、各组织的病毒载量和病理变化等方面评价仔猪感染试验结果。结果显示:PCV3阳性病料初始匀浆液和细胞培养物在感染断奶仔猪后均会引起仔猪出现体温上升、消瘦、皮炎和生长缓慢等现象;病毒血症时间超过14 d,但21 d消失,病毒的组织分布结果表明,PCV3主要感染扁桃体、淋巴结等免疫器官,在脾、肺和扁桃体等组织中的病毒载量最高;感染猪可出现间质性肺炎、淋巴小结增生和嗜酸性粒细胞增多等病理变化。本研究表明PCV3/CH/HB/XY/2018毒株对断奶仔猪有致病性,为PCV3的致病机制研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒3型分离致病性病毒载量

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CRISPR/Cas9技术在构建弓形虫微线体蛋白MIC3敲除株上的应用

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中国兽医学报 2017年第9期37卷 1720-1725页

作者：王一凡张伟超吴颢李龙娇周艳琴方瑞申邦赵俊龙农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染几乎所有温血动物的专性细胞内寄生原虫。该寄生虫入侵和感染宿主细胞需要其分泌细胞器所分泌的蛋白,其中包括微线体蛋白。近年来,CRISPR/Cas9技术已经成为分子生物学和功能基因组学研究的... 详细信息

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染几乎所有温血动物的专性细胞内寄生原虫。该寄生虫入侵和感染宿主细胞需要其分泌细胞器所分泌的蛋白,其中包括微线体蛋白。近年来,CRISPR/Cas9技术已经成为分子生物学和功能基因组学研究的重要工具,本研究利用CRISPR/Cas9技术对弓形虫Ⅰ型虫株RH和Ⅱ型虫株PRU的微线体蛋白mic3基因进行敲除。通过单克隆的筛选和鉴定,成功获得了2种虫株的mic3敲除株。之后对RH敲除株进行研究,发现mic3缺失可以轻微提高虫体在体外培养时的生长速度以及对小鼠的毒力。本研究不仅说明了CRISPR/Cas9技术可以应用到弓形虫的基因敲除和改造上,并且不受弓形虫虫株的限制,同时也为进一步研究mic3在虫体中的功能奠定基础。

关键词：弓形虫 CRISPR/Cas9 基因敲除 mic3基因

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猪A群轮状病毒VP6的表达及IgG抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

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动物医学进展 2014年第7期35卷 1-6页

作者：陈淑华库旭钢闫贵伟丁振江何启盖农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为建立猪A群轮状病毒抗体间接ELISA检测方法,用于开展对该病毒感染的流行病学调查和免疫抗体评估,进行了猪A群轮状病毒TM-a株内衣壳VP6基因的表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析。目的蛋白得到表达,大小约70ku,Western blot表明,该... 详细信息

为建立猪A群轮状病毒抗体间接ELISA检测方法,用于开展对该病毒感染的流行病学调查和免疫抗体评估,进行了猪A群轮状病毒TM-a株内衣壳VP6基因的表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析。目的蛋白得到表达,大小约70ku,Western blot表明,该蛋白与猪A群轮状病毒阳性血清反应。用该蛋白作为包被抗原,通过对条件优化,包被抗原浓度为2μg/mL,待检血清稀释倍数为1∶40倍,标记抗体的稀释倍数为1∶4 000倍,建立了检测猪轮状病毒血清IgG抗体的间接ELISA方法。用该方法检测临床样品142份,并与间接免疫荧光试验(IFA)对比,结果显示,两者阳性符合率为94.6%,阴性符合率为83.4%,总符合率为91.5%,表明该方法有效可行。用建立的方法检测临床上不同年龄阶段的猪血清639份,分析其临床感染情况。结果证明该方法可用于猪轮状病毒流行病学调查、猪群抗体水平评估。

关键词：猪轮状病毒内衣壳蛋白间接ELISA

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苏云金芽胞杆菌无晶体突变株对小鼠和雏鸡的安全性

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安全与环境学报 2007年第5期7卷 12-15页

作者：刘梅胡思顺孙焕毕丁仁孙明华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304为受试菌株,对小鼠和雏鸡进行安全性测试,考察BMB304在鸡肠道中的存留情况,以探索利用苏云金芽胞杆菌S-层表面展示系统研制热稳定性禽用口服活菌疫苗的安全性和可行性。小鼠腹腔一次性注射1010CFUBMB... 详细信息

以苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304为受试菌株,对小鼠和雏鸡进行安全性测试,考察BMB304在鸡肠道中的存留情况,以探索利用苏云金芽胞杆菌S-层表面展示系统研制热稳定性禽用口服活菌疫苗的安全性和可行性。小鼠腹腔一次性注射1010CFUBMB304菌液1.0mL,观察14d,未发现有急性毒性反应。小鼠饮用含BMB304108CFU/mL、107CFU/mL和106CFU/mL的饮用水28d,各组小鼠精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组小鼠体重变化、脏器系数、血常规指标及血液生化指标与对照组无显著性差异。雏鸡24h内灌服1010CFUBMB304芽胞液1.0mL,14d内未出现急性毒性反应。饲喂雏鸡含BMB304芽胞108CFU/g、107CFU/g和106CFU/g饲料28d,雏鸡精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组的日增重与对照组差异不显著。饲喂雏鸡含BMB304芽胞106CFU/g饲料3d后,经测定,芽胞能在肠道中萌发并至少存留5d但不超过7d。研究表明,苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304对小鼠和雏鸡安全无毒,且能在鸡肠道内暂时定植,能被用于研制在细胞表面展示外源抗原并能常温长期保存的新型禽用口服疫苗。

关键词：家畜微生物学苏云金芽胞杆菌小鼠雏鸡安全性

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