检索结果-内蒙古大学图书馆

安全与环境学报 2007年第5期7卷 12-15页

作者：刘梅胡思顺孙焕毕丁仁孙明华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304为受试菌株,对小鼠和雏鸡进行安全性测试,考察BMB304在鸡肠道中的存留情况,以探索利用苏云金芽胞杆菌S-层表面展示系统研制热稳定性禽用口服活菌疫苗的安全性和可行性。小鼠腹腔一次性注射1010CFUBMB... 详细信息

以苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304为受试菌株,对小鼠和雏鸡进行安全性测试,考察BMB304在鸡肠道中的存留情况,以探索利用苏云金芽胞杆菌S-层表面展示系统研制热稳定性禽用口服活菌疫苗的安全性和可行性。小鼠腹腔一次性注射1010CFUBMB304菌液1.0mL,观察14d,未发现有急性毒性反应。小鼠饮用含BMB304108CFU/mL、107CFU/mL和106CFU/mL的饮用水28d,各组小鼠精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组小鼠体重变化、脏器系数、血常规指标及血液生化指标与对照组无显著性差异。雏鸡24h内灌服1010CFUBMB304芽胞液1.0mL,14d内未出现急性毒性反应。饲喂雏鸡含BMB304芽胞108CFU/g、107CFU/g和106CFU/g饲料28d,雏鸡精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组的日增重与对照组差异不显著。饲喂雏鸡含BMB304芽胞106CFU/g饲料3d后,经测定,芽胞能在肠道中萌发并至少存留5d但不超过7d。研究表明,苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304对小鼠和雏鸡安全无毒,且能在鸡肠道内暂时定植,能被用于研制在细胞表面展示外源抗原并能常温长期保存的新型禽用口服疫苗。

关键词：家畜微生物学苏云金芽胞杆菌小鼠雏鸡安全性

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益生枯草芽胞杆菌HDRaBS1缓解蛋鸡热应激效果

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华中农业大学学报 2016年第2期35卷 77-82页

作者：张盼望晏涛王喜亮况世昌周祖涛肖运才农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070 武汉华大瑞尔科技有限公司武汉430070

选取868只280日龄产蛋率相近海兰褐蛋鸡,随机分为高温组(33℃)、益生菌组(枯草芽胞杆菌+33℃)、室温组(26℃),试验期为20 d,研究益生枯草芽胞杆菌HDRa BS1缓解动物热应激的可行性及其机制。结果发现,与高温组相比,益生菌组在全期产蛋率... 详细信息

选取868只280日龄产蛋率相近海兰褐蛋鸡,随机分为高温组(33℃)、益生菌组(枯草芽胞杆菌+33℃)、室温组(26℃),试验期为20 d,研究益生枯草芽胞杆菌HDRa BS1缓解动物热应激的可行性及其机制。结果发现,与高温组相比,益生菌组在全期产蛋率、平均日采食量、平均蛋质量方面分别提高了2.60%(P<0.05)、2.91%(P>0.05)和0.96%(P>0.05),但没有达到室温组水平,且在腹泻率、蛋破损率方面均有降低;血清内毒素、IL-1水平分别降低了37.41%(P>0.05)和20.98%(P<0.05),IL-10含量提高了41.05%(P>0.05);益生菌显著上调盲肠紧密连接基因occludin、ZO-1和JAM-A mRNA的表达(P<0.05),上调肠黏膜修复基因EGF mRNA的表达(P<0.05),显著提高肠绒毛高度,而隐窝深度之间无显著差异(P>0.05)。因此,添加枯草芽胞杆菌HDRa BS1能有效缓解蛋鸡热应激症状。

关键词：枯草芽胞杆菌热应激蛋鸡内毒素盲肠生长性能白细胞介素

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结核分枝杆菌复合群四重PCR检测方法的建立及应用

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中国人兽共患病学报 2012年第4期28卷 333-337页

作者：程实陈伟陈颖钰陈军苗北平郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物科技动物医学院武汉430070 武汉市结核病防治研究所武汉430030

目的本文旨在建立一种能快速鉴定结核分枝杆菌复合群不同成员的多重PCR方法。方法针对结核分枝杆菌复合群4个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg2+浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条... 详细信息

目的本文旨在建立一种能快速鉴定结核分枝杆菌复合群不同成员的多重PCR方法。方法针对结核分枝杆菌复合群4个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg2+浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条件。结果扩增产物的大小分别为824bp、621bp、418bp和254bp,能特异性检测并鉴别出非结核分枝杆菌(824bp 1条带)、卡介苗(824bp和621bp 2条带)、牛分枝杆菌(824bp、621bp和254bp 3条带)和结核分枝杆菌(4条带)。检测灵敏度达到125fg。对42份牛结核菌素皮内变态反应阳性牛的肺淋巴结样本和115份肺结核病人的痰液样品进行了检测,其检出率或准确率明显高于传统方法。结论成功建立了多重PCR方法,能快速、准确地对结核分枝杆菌群进行种、型鉴别。

关键词：结核结核分枝杆菌牛分枝杆菌多重PCR 鉴别诊断

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1种植物瞬时表达捻转血矛线虫氨基肽酶基因和Hc23基因方法的建立

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中国兽医学报 2022年第12期42卷 2420-2426页

作者：叶莉莎张挺廖聪李婷婷田振东胡敏华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学农业农村部马铃薯生物学与生物技术重点实验室湖北武汉430070

为建立利用植物细胞瞬时表达反刍动物寄生线虫捻转血矛线虫优势抗原的方法,选取了氨基肽酶基因Hc-ap-10和优选抗原分子基因Hc23作为目标基因,将经过密码子优化的Hc-ap-10(AP10^(op))和Hc23分别插入pH7lic-EGFP表达载体并在N、C两端均添... 详细信息

为建立利用植物细胞瞬时表达反刍动物寄生线虫捻转血矛线虫优势抗原的方法,选取了氨基肽酶基因Hc-ap-10和优选抗原分子基因Hc23作为目标基因,将经过密码子优化的Hc-ap-10(AP10^(op))和Hc23分别插入pH7lic-EGFP表达载体并在N、C两端均添加核定位信号(nuclear localization sequence,NLS),使用电转法将pH7dNLSAP10^(op)和pH7dNLSHc23分别转入GV3101根癌农杆菌中,随后将根癌农杆菌悬液侵染本氏烟草,最后通过荧光显微镜观察目标蛋白定位情况,并提取侵染烟草叶片总蛋白,使用Western blot检测蛋白的表达量。结果显示,成功构建了植物双元表达载体pH7dNLSAP10^(op)和pH7dNLSHc23,荧光显微镜观察发现在目的基因N、C两端添加了核定位信号后的质粒转化根癌农杆菌。该方法外源表达的膜蛋白pH7dNLSAP10^(op)和pH7dNLSHc23都成功表达在本氏烟草叶片的细胞核上,Western blot也成功检测到Hc23和AP10^(op)蛋白,且Hc23蛋白的表达水平相对较高。结果表明,添加了核定位信号能成功将目的蛋白表达在植物细胞核上;密码子优化有利于大分子蛋白的高效表达,但对于一些相对分子质量相对较小的蛋白可能是非必要的。该研究成功将2种抗原分子表达在植物细胞中,为后续疫苗的研究奠定了基础。

关键词：瞬时表达捻转血矛线虫氨基肽酶 Hc23基因核定位信号根癌农杆菌本氏烟草

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2018年伪狂犬病病毒的流行特征及其遗传变异分析

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畜牧兽医学报 2020年第3期51卷 584-593页

作者：孙颖王雪莹梁婉谢思思彭忠陈宏建华琳宋文博汤细彪陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了了解当前伪狂犬病病毒(PRV)在我国猪群中的流行现状及其遗传变异情况,本研究利用PCR的方法对2018年1-12月来源于我国28个省、市、自治区的1 328份疑似猪伪狂犬病发病猪的组织样品开展了PRV-gE的检测及病毒的分离鉴定,同时针对所分... 详细信息

为了了解当前伪狂犬病病毒(PRV)在我国猪群中的流行现状及其遗传变异情况,本研究利用PCR的方法对2018年1-12月来源于我国28个省、市、自治区的1 328份疑似猪伪狂犬病发病猪的组织样品开展了PRV-gE的检测及病毒的分离鉴定,同时针对所分离的病毒的gB、gC和gE基因进行PCR扩增和DNA测序,并展开遗传变异分析。结果显示,共有92份样品为PRV-gE基因检测阳性,阳性检出率为6.93%。从92份PRV-gE阳性样品分离到13株PRV。分别基于gB基因部分片段、gC和gE基因进行遗传变异分析发现13株PRV与我国2012年以后流行的毒株(如HeN1等变异株)亲缘关系较近,而与2012年以前所分离的毒株(如Ea等经典毒株)的亲缘关系较远;此外,绝大多数中国分离株与国外分离毒株(如NIA-3、Bartha、Kaplan等)在遗传进化树中位于不同的进化分支;相对于国外分离株及国内早期流行的经典毒株而言,13株PRV分离株的gB、gC和gE蛋白中均存在许多特征性的氨基酸位点变异。本研究对于了解我国PRV流行现状及当前流行的PRV毒株的生物学特征具有十分重要的意义。

关键词：伪狂犬病病毒 PCR检测病毒分离遗传变异分析猪

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发达国家重大牛病防控历史和经验

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中国兽医学报 2011年第3期31卷 453-456页

作者：胡长敏郭爱珍潘志明焦新安陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学学院武汉430070 扬州大学生命科学与技术学院扬州225009

许多发达国家在重大牛病防控与消灭方面做得很成功,如已消灭牛口蹄疫,控制或消灭了牛结核,其防控策略可归纳为3个方面,即稳步控制消灭(净化)国内重大疫情,快速高效地扑灭国内突发疫情和严防外来疫情传入。随着全球经济一体化与贸易自由... 详细信息

许多发达国家在重大牛病防控与消灭方面做得很成功,如已消灭牛口蹄疫,控制或消灭了牛结核,其防控策略可归纳为3个方面,即稳步控制消灭(净化)国内重大疫情,快速高效地扑灭国内突发疫情和严防外来疫情传入。随着全球经济一体化与贸易自由化进程的深入,重大疫病防控将走向国际化,发达国家牛病防控经验对我国重大牛病和其他动物重大疫病的防控与根除具有重要借鉴意义。

关键词：牛疫病防控

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猪圆环病毒2型对小鼠淋巴细胞发育的抑制作用

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畜牧兽医学报 2015年第8期46卷 1400-1408页

作者：吴斌肖惠胡林杨了寒叶十一何启盖蔡双双张淑君华中农业大学动物科技学院动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北三峡职业技术学院宜昌443000

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起仔猪断奶多系统衰竭综合征的病原微生物,该病毒可以降低免疫反应引起严重的免疫抑制,直接导致体内淋巴细胞的凋亡和耗竭。为研究PCV2对发育中淋巴细胞的影响,本文以小鼠为试验模型,用免疫荧光法统计骨髓、胸... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起仔猪断奶多系统衰竭综合征的病原微生物,该病毒可以降低免疫反应引起严重的免疫抑制,直接导致体内淋巴细胞的凋亡和耗竭。为研究PCV2对发育中淋巴细胞的影响,本文以小鼠为试验模型,用免疫荧光法统计骨髓、胸腺、脾CD3、CD19阳性淋巴细胞数,qPCR定量分析淋巴细胞发育相关基因转录水平,MTT法检测体外培养淋巴细胞增殖能力。结果表明:(1)PCV2造成感染早期小鼠外周血淋巴细胞不同程度减少,并抑制体外培养淋巴细胞的增殖;(2)PCV2导致骨髓和脾CD19阳性B淋巴细胞极显著降低(P<0.01),并抑制淋巴细胞发育相关基因的转录;(3)PCV2对发育中淋巴细胞的凋亡也有一定促进作用。因此,PCV2抑制早期淋巴细胞的发育和促进发育中淋巴细胞凋亡可能是导致体内淋巴细胞大量耗竭的原因之一。

关键词： PCV2 T淋巴细胞 B淋巴细胞细胞发育

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅲ A基因的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 830-833页

作者：汪招雄何启盖刘军发刘正飞陈焕春长江大学动物科学学院湖北荆州434023 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

应用PCR方法扩增猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinabacillus pleuropneumoniae,App)编码毒素A结构蛋白的完整基因,连接到载体pMD18-T中,经Not和Snab双酶切后连接到用同样酶切的表达载体pPIC9k上,转化GS115酵母感受态细胞,经甲醇诱导表达... 详细信息

应用PCR方法扩增猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinabacillus pleuropneumoniae,App)编码毒素A结构蛋白的完整基因,连接到载体pMD18-T中,经Not和Snab双酶切后连接到用同样酶切的表达载体pPIC9k上,转化GS115酵母感受态细胞,经甲醇诱导表达了分泌到胞外的Apx A蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白约为110 000,与预期相符。Dot-blot和ELISA检测结果表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。为进一步研究Apx A蛋白的结构和功能,研制App重组诊断抗原或亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅢA基因 Pichia pastoris 分泌表达

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表达H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-optiHA的构建及生物学特性

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中国兽医学报 2019年第7期39卷 1303-1309,1335页

作者：范桂芳徐守兴杨斓宋文博华琳吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 预防兽医学湖北省重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒r... 详细信息

为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA。对获得的重组病毒在多种细胞上的增殖特性、一步生长曲线、遗传稳定性以及对小鼠的安全性等生物学特性进行了研究。结果表明,构建的rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA重组病毒能够稳定表达HA蛋白,并且经过优化后,目的基因的表达量有明显提高。该重组病毒在ST、PK-15、Vero和BHK-21细胞上的增殖滴度均高于10-7.0/0.1mL,对PK-15细胞的敏感性最高。一步生长曲线结果表明,重组病毒的增殖特性未受影响。连续传代20代后,该重组病毒依然具有较好的遗传稳定性,并且对小鼠安全性良好。本研究为重组病毒rPRV-optiHA的进一步研究与应用奠定了基础。

关键词： PRV变异毒株猪流感病毒 HA基因生物学特性

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羊弓形虫病间接ELISA诊断方法的建立

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中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 127-133页

作者：李迎迎侯伦王敏李亚琼李明俊周艳琴赵俊龙申邦华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为比较5种弓形虫抗原的诊断效果,建立实用的羊弓形虫病诊断方法,本研究制备了弓形虫速殖子全虫抗原和4个重组蛋白(GRA1、MIC3、MAG、BAG1),正交试验比较其免疫反应性,从中筛选出相对优势抗原并建立羊弓形虫病间接ELISA(iELISA)诊断方法... 详细信息

为比较5种弓形虫抗原的诊断效果,建立实用的羊弓形虫病诊断方法,本研究制备了弓形虫速殖子全虫抗原和4个重组蛋白(GRA1、MIC3、MAG、BAG1),正交试验比较其免疫反应性,从中筛选出相对优势抗原并建立羊弓形虫病间接ELISA(iELISA)诊断方法,用于检测弓形虫特异的IgG抗体。研究结果表明:除BAG1外上述4种抗原均具有较好的免疫反应性,综合考虑选择致密颗粒蛋白1(GRA1)作为诊断抗原建立了GRA1-iELISA,其检测弓形虫抗体灵敏度大于1∶100(血清稀释度),且不与羊莫氏巴贝斯虫、吕氏泰勒虫、捻转血毛线虫阳性血清发生交叉反应,特异性良好;运用建立的方法和改良凝集试验分别对采自山羊屠宰场的80份血清样品进行检测,测得的弓形虫感染阳性率分别为28.75%(23/80)和31.25%(25/80),二者总符合率为82.5%。本研究建立的ELISA检测方法对羊弓形虫病的诊断以及商业化试剂盒的开发具有重要参考价值。

关键词：羊弓形虫病 GRA1 间接ELISA

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