检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 454-460页

作者：王俊伟陈芳洲库旭钢李畅何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料... 详细信息

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌*** BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。

关键词：猪圆环病毒3型 ORF2基因 Cap蛋白原核表达 ELISA检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

动物寄生线虫遗传多样性的研究进展

引用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第5期33卷 387-392页

作者：殷方媛李法财赵俊龙胡敏华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

动物寄生线虫分子遗传标记的发展对兽医寄生虫学中的基础和应用研究领域有着重要意义。通过对线虫种群遗传多样性的研究,不仅能够为抗药性等位基因的扩散提供理论依据,而且对线虫病防治策略的制定具有指导作用。因此,本文就分子遗传标记... 详细信息

动物寄生线虫分子遗传标记的发展对兽医寄生虫学中的基础和应用研究领域有着重要意义。通过对线虫种群遗传多样性的研究,不仅能够为抗药性等位基因的扩散提供理论依据,而且对线虫病防治策略的制定具有指导作用。因此,本文就分子遗传标记(RFLP、RAPD、PCR-SSCP、AFLP、SSR和线粒体DNA)在寄生线虫遗传多样性研究中的应用进行综述。

关键词：动物寄生线虫遗传多样性分子遗传标记

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛传染性鼻气管炎病毒(gN-TK-gG-)三基因缺失突变株的构建

引用

中国兽医学报 2018年第7期38卷 1276-1281页

作者：李程陈颖钰索朗斯珠郭爱珍西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

牛传染性鼻气管炎是由牛疱疹病毒I型（BoHV-1）引起的一种牛的传染病，可导致严重的经济损失。疫苗接种是用于防控该病的重要手段，但现有疫苗在多个方面都有改进的余地。本试验利用pBoHV-1 BAC载体和4次Red E／T重组，依次构建了BoHV-1... 详细信息

牛传染性鼻气管炎是由牛疱疹病毒I型（BoHV-1）引起的一种牛的传染病，可导致严重的经济损失。疫苗接种是用于防控该病的重要手段，但现有疫苗在多个方面都有改进的余地。本试验利用pBoHV-1 BAC载体和4次Red E／T重组，依次构建了BoHV-1 gN^-（CT^-）、BoHV-1 gN^-（CT^-30-32^-）、BoHV-1 gN^-TK^-和BoHV-1 gN TK gG^-基因缺失突变株，其中gN缺失了胞外区30-32位氨基酸、胞质尾区CT端，TK基因缺失了1079bp，gG基因缺失了1335bp。pBoHV-1 gN^-TK^-gG^-经磷酸钙法转染MDBK细胞后，出现细胞病变，成功拯救出三基因缺失病毒株BoHV-1 gN TK^-gG^-。研究结果为牛传染性鼻气管炎新型基因缺失标记疫苗的开发奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎牛疱疹病毒I型基因缺失疫苗 gN TK gG

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

检测多种动物弓形虫抗体的SPA-ELISA方法的建立及初步应用

引用

中国兽医学报 2009年第9期29卷 1163-1166页

作者：张东林惠煜周艳琴董海岚方瑞聂浩王正松赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 河南省南阳市兽医站河南南阳473010

利用重组弓形虫MIC3作为包被抗原，SPA作为偶联物建立了可检测多种动物弓形虫抗体的SPA—ELISA方法。确定了抗原最适包被质量浓度为2．6mg／L；血清最适稀释度为1：160，作用时间为45min；优化了酶标SPA工作浓度，作用时间及底物显色时... 详细信息

利用重组弓形虫MIC3作为包被抗原，SPA作为偶联物建立了可检测多种动物弓形虫抗体的SPA—ELISA方法。确定了抗原最适包被质量浓度为2．6mg／L；血清最适稀释度为1：160，作用时间为45min；优化了酶标SPA工作浓度，作用时间及底物显色时间。对已知阳性血清的检测下限可达1：6400，其敏感性是IHAT方法的50～100倍。对临床4种动物共332份血清进行检测，阳性率由高到低依次为：SPA-ELISA（39．4％）〉MAT（39．1％）〉IHAT（13．1％）。以上结果表明，SPA-ELISA不失为一种适用于多种动物弓形虫抗体检测的理想方法。

关键词：弓形虫重组MIC3 SPA—ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PCV3对仔猪生长相关激素及其功能基因表达的影响

引用

中国畜牧兽医 2022年第3期49卷 1041-1047页

作者：孙庆帅严伟东李畅吴昊李长春何启盖华中农业大学动物科技学院/动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物科技学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 武汉科前生物股份有限公司武汉430072

【目的】研究猪圆环病毒3(Porcine circovirus 3,PCV3)对仔猪生长相关激素及其功能基因表达的影响,探索PCV3导致仔猪消瘦的机制。【方法】以8头23日龄的健康断奶仔猪为研究对象,随机均分为PCV3感染组(感染组)、DMEM组,分别从颈部注射3 m... 详细信息

【目的】研究猪圆环病毒3(Porcine circovirus 3,PCV3)对仔猪生长相关激素及其功能基因表达的影响,探索PCV3导致仔猪消瘦的机制。【方法】以8头23日龄的健康断奶仔猪为研究对象,随机均分为PCV3感染组(感染组)、DMEM组,分别从颈部注射3 mL PCV3病毒液(109拷贝/mL)和3 mL DMEM,并于注射前(0 d)及注射后3、7、14、21 d称量仔猪体重,观察其临床表现,采集各组仔猪血清、口腔拭子、鼻腔拭子和肛拭子,采用实时荧光定量PCR检测各样品中PCV3病毒载量;ELISA法测定各组3、7、14、21 d仔猪血清中的三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲状腺素4(thyroxine,T4)的浓度;实时荧光定量PCR测定背最长肌、腿肌、脾脏、肝脏组织中生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)等基因mRNA相对表达量。【结果】感染组仔猪终末体重、平均日增重均极显著低于DMEM组(P<0.01),感染组血清、口腔拭子、鼻腔拭子、肛拭子病毒载量均在14 d达到最高;感染组T3表达量在感染的第14和21天均极显著高于DMEM组(P<0.01),T4含量差异不显著(P>0.05)。与DMEM组相比,背最长肌中IGF-1基因的相对表达量极显著降低(P<0.01),腿肌和脾脏中GHR、IGF-1、IGF-1R基因的相对表达量均无显著差异(P>0.05),肝脏中GHR基因的相对表达量极显著增加(P<0.01),IGF-1R基因的相对表达量显著增加(P<0.05)。【结论】仔猪感染PCV3后可导致机体代谢异常,降低IGF-1对背最长肌的促生长、促细胞分裂作用,从而导致仔猪消瘦。

关键词：猪圆环病毒3(PCV3) 生长激素生长功能基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸭疫里默菌aroA基因缺失突变株的构建及生物学特性研究

引用

动物医学进展 2015年第12期36卷 1-5页

作者：张硕刘宁卢媞王颖周祖涛刘梅胡思顺栗绍文毕丁仁李自力华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

构建鸭疫里默菌aroA基因缺失株,并对其生物学特性及毒力进行研究。以本实验室分离的鸭疫里默菌YM株(RA-YM)为亲本株,建立pRE112-LSR重组自杀性质粒,通过结合转移的方法缺失RAYM株aroA基因,并利用PCR方法对突变株进行鉴定,成功构建了鸭... 详细信息

构建鸭疫里默菌aroA基因缺失株,并对其生物学特性及毒力进行研究。以本实验室分离的鸭疫里默菌YM株(RA-YM)为亲本株,建立pRE112-LSR重组自杀性质粒,通过结合转移的方法缺失RAYM株aroA基因,并利用PCR方法对突变株进行鉴定,成功构建了鸭疫里默菌aroA基因缺失株。生物学特性检测结果显示,鸭疫里默菌aroA基因缺失株不再水解精氨酸;体外生长曲线对数期细菌生长速度减缓,在稳定期趋于一致;半数致死量与野生株相比下降了3倍左右;aroA基因缺失株在血液、心、肝、脑等组织的载菌量与亲本株相比有所下降,但差异不显著。研究结果为深入研究鸭疫里默菌的分子致病机理和研制基因工程疫苗奠定了良好的基础。

关键词：鸭疫里默菌 aroA基因基因缺失生物学特性毒力因子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

多杀性巴氏杆菌分子分型方法简述

引用

微生物学报 2016年第10期56卷 1521-1529页

作者：彭忠梁婉吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 华中农业大学动物科学技术学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

多杀性巴氏杆菌是一种能感染多种动物甚至是人的重要革兰氏阴性病原菌。目前临床上用于多杀性巴氏杆菌诊断的分型方法主要包括血清学分型方法和分子分型方法。其中血清学分型方法主要基于免疫学实验技术建立,操作过程繁琐,技术要求高,... 详细信息

多杀性巴氏杆菌是一种能感染多种动物甚至是人的重要革兰氏阴性病原菌。目前临床上用于多杀性巴氏杆菌诊断的分型方法主要包括血清学分型方法和分子分型方法。其中血清学分型方法主要基于免疫学实验技术建立,操作过程繁琐,技术要求高,工作量大,不适用于临床上大规模快速开展多杀性巴氏杆菌流行病学调查的需要;而基于分子生物学手段建立的分子分型方法相对于传统的血清学分型方法而言具有快速、简单、灵敏、灵活等特点,特别是某些分子分型方法与传统的分型方法形成了较为精确的对应关系,因而在临床上得到了广泛的应用。目前适用于临床上开展多杀性巴氏杆菌分离鉴定的分子分型方法主要包括多重PCR方法及多位点序列分型法(MLST),其中多重PCR方法又包括基于荚膜编码区及脂多糖外核编码簇建立的PCR方法。本文将重点就这3种常用的多杀性巴氏杆菌分子分型方法进行综述,介绍其建立原理、实现手段以及各自的优缺点,为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查特别是分子流行病学调查提供参考。

关键词：多杀性巴氏杆菌分子分型方法多重PCR 多位点序列分型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

引起牛乳腺炎的凝固酶阴性葡萄球菌研究进展

引用

中国兽医学报 2022年第8期42卷 1719-1723页

作者：李政志陈秋慧杨晶涵刘晓雅严蕊陈颖钰陈曦郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)通常引起牛隐性乳腺炎,导致奶牛业巨大经济损失。为有效防控牛CoNS性乳腺炎的发生,现对牛乳腺炎源CoNS的病原学、致病机理、耐药机制及其检测鉴定方法进行阐述,系统性分析牛凝固酶阴性乳腺炎的治疗与预防关键技... 详细信息

凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)通常引起牛隐性乳腺炎,导致奶牛业巨大经济损失。为有效防控牛CoNS性乳腺炎的发生,现对牛乳腺炎源CoNS的病原学、致病机理、耐药机制及其检测鉴定方法进行阐述,系统性分析牛凝固酶阴性乳腺炎的治疗与预防关键技术,并对CoNS的研究热点与前景进行展望,供同行参考。

关键词：凝固酶阴性葡萄球菌乳腺炎致病机理耐药性预防及治疗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

非洲猪瘟病毒无标签p30-ELISA抗体检测方法的建立及应用

引用

畜牧兽医学报 2022年第5期53卷 1517-1526页

作者：于学祥陈晓雨李栋凡孙琪库旭钢范盛先杨汉春何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 中国农业大学动物医学院北京100193

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率。为建立临床检测ASFV抗体的间接EL... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率。为建立临床检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法,本研究扩增了ASFV-CP204L基因,通过pET-30a原核表达系统表达p30蛋白,使用Ni-NTA纯化表达产物,通过肠激酶切除外源性蛋白,得到无His-组氨酸标签的p30蛋白,以此为诊断抗原,建立间接ELISA方法。结果显示:表达的无标签p30重组蛋白大小约为30 ku,与ASF阳性猪血清具有较好的反应原性;确定ELISA抗原包被浓度为1μg·mL^(-1),根据ROC曲线下面积确定S/P值>0.398判定为阳性,批内、批间变异系数均<10%;与PCV2、CSFV、PRV-gE、PRRSV阳性血清无交叉反应与INGENASA商品化试剂盒总符合率为97.78%。用该方法分别检测标准阳性血清、动物感染试验血清和收集的区域性临床血清644份,该方法最低可检测到1∶512倍稀释的标准阳性血清样品;检测感染动物血清,其中80%(4/5)的试验动物在第10天抗体为阳性。644份临床猪血清样品中抗体阳性率为7.61%,其中,母猪、后备母猪、仔猪、保育猪和育肥猪抗体阳性率分别为3.03%、0%、4.94%、7.55%和28.7%。本试验建立的ASFV-p30间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可应用于ASFV的抗体检测,为ASF的诊断和流行病学调查提供了技术手段。

关键词：非洲猪瘟 CP204L基因 p30蛋白原核表达 ELISA抗体检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

引用

中国兽医学报 2019年第9期39卷 1667-1673页

作者：刘青芸国师榜周宁华琳陈焕春吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒... 详细信息

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好。该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64%,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54%,2种方法的符合率为81.08%。综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因 TaqMan实时荧光定量PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：