检索结果-内蒙古大学图书馆

应用反向斑点杂交技术从转录序列的选择性捕获中筛选副猪嗜血杆菌表达差异基因

农业生物技术学报 2009年第2期17卷 189-194页

作者：胡军勇金卉谢启运万云楚杰刘翠云陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

通过对靶DNA的种类和浓度、探针浓度、紫外交联时间等反向斑点杂交条件优化,建立了一种从选择性捕获的转录序列(selective capture of transcribed sequences,SCOTS)库中筛选副猪嗜血杆菌在体内、外差异表达的基因的方法。通过反向斑点... 详细信息

通过对靶DNA的种类和浓度、探针浓度、紫外交联时间等反向斑点杂交条件优化,建立了一种从选择性捕获的转录序列(selective capture of transcribed sequences,SCOTS)库中筛选副猪嗜血杆菌在体内、外差异表达的基因的方法。通过反向斑点杂交技术从10个样品中筛选出的6个样品被证明是副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)在体内上调表达或者是特异表达的基因。结果表明:SCOTS技术能够有效地获得一个可能存在差异表达基因的cDNA文库,而反向斑点杂交技术可以有效地从中筛选到差异表达基因。

关键词：副猪嗜血杆菌差异表达基因转录序列的选择性捕获反向斑点杂交

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O型口蹄疫多基因重组腺病毒的构建及其免疫原性

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中国兽医学报 2009年第10期29卷 1286-1289页

作者：张克山向敏吴斌徐卓菲蔡利军王勤刚陈焕春华中农业大学动物医学院动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

根据GenBank公布的序列设计1对引物扩增O型口蹄疫病毒P12A3C基因并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV内。含有目的基因的穿梭质粒(pShuttle-PAC)线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细菌。利用细菌内... 详细信息

根据GenBank公布的序列设计1对引物扩增O型口蹄疫病毒P12A3C基因并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV内。含有目的基因的穿梭质粒(pShuttle-PAC)线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细菌。利用细菌内同源重组法得到重组腺病毒质粒(pAd-PAC)。在Lipofectamine 2000介导下重组腺病毒质粒转染HEK293细胞得到重组腺病毒(Ad-PAC)。半数组织培养感染剂量(TCID50)测定、免疫荧光试验(IFA)和连续传代后目的基因的PCR扩增,证实重组病毒滴度为105.5TCID50/0.1 mL,重组病毒HEK293细胞中得以表达且遗传稳定性良好;动物试验表明,该重组病毒能够诱导小鼠产生较高水平的针对口蹄疫病毒的特异性抗体;本试验为口蹄疫重组腺病毒活载体疫苗的进一步研究和应用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒腺病毒重组病毒免疫原性

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支原体分泌蛋白研究进展

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畜牧兽医学报 2017年第9期48卷 1572-1578页

作者：胡古月赵刚陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作为药... 详细信息

支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作为药物和疫苗的潜在靶标。然而支原体分泌蛋白研究尚处于初级阶段,已鉴定的支原体分泌蛋白很少,其在致病与免疫中的作用有待研究。笔者介绍了已发现的支原体分泌蛋白、分泌方式以及其研究方法,以期为支原体分泌蛋白相关研究提供参考。

关键词：支原体分泌蛋白靶标疫苗致病性免疫

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亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒双拷贝VP1基因的串联表达及其免疫原性

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畜牧兽医学报 2009年第3期40卷 383-387页

作者：张克山向敏吴斌王勤刚陈焕春华中农业大学动物医学院动物病毒实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因含有T细胞和B细胞表位,是口蹄疫病毒的主要免疫原性基因。作者将亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因首尾串联构建双拷贝的VP1基因(2VP1),实现双拷贝VP1基因的原核表达,表达的重组蛋白(GST2VP1)经Sephadex-G200分子筛层析纯化... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因含有T细胞和B细胞表位,是口蹄疫病毒的主要免疫原性基因。作者将亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因首尾串联构建双拷贝的VP1基因(2VP1),实现双拷贝VP1基因的原核表达,表达的重组蛋白(GST2VP1)经Sephadex-G200分子筛层析纯化后,Western blot证实其有反应原性,动物试验表明重组蛋白在加强免疫后能够产生和灭活疫苗相当的ELISA抗体和中和抗体;本试验结果为亚洲Ⅰ型FMDV免疫原性研究及GST2VP1蛋白的进一步应用奠定了基础。

关键词：亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 2VP1 串联表达免疫原性

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6-溴-靛玉红-3'-肟抑制脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞凋亡

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畜牧兽医学报 2018年第12期49卷 2753-2761页

作者：刘畅唐鑫张文劲赵春阳郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

研究6-溴-靛玉红-3'-肟(BIO)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠乳腺上皮细胞(mouse mammary epithelial cell,MMEC)凋亡的作用及机制。收集空白对照组、DMSO组、BIO单独处理组及不同浓度BIO(5、25、50nmol·L^(-1))+LPS共同处理组细胞,分别用流式细胞术检测凋亡率,利用qRT-PCR检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3和Caspase-8 mRNA的变化,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3和Caspase-8蛋白水平的变化。结果显示:BIO能够降低LPS诱导的MMECs的凋亡率,抑制凋亡基因Bak和Bax及凋亡通路蛋白Caspase-3和Caspase-8活性(P <0. 001),促进抑凋亡基因Bcl-2及Bcl-xl的活性。BIO通过调节Bax、Bak、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3和Caspase-8活性抑制LPS诱导的鼠乳腺上皮细胞凋亡。

关键词： BIO LPS 乳腺炎凋亡凋亡因子

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猪圆环病毒2型感染PK-15细胞差异表达miRNA和mRNA互作网络

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畜牧兽医学报 2019年第1期50卷 115-125页

作者：李畅李静何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

旨在筛选猪圆环病毒2型感染猪肾上皮细胞(PK-15)后差异表达miRNA和mRNA,并探究miRNA和mRNA之间的互作关系。使用茎环定量PCR检测多个热点miRNA在PCV2感染组和未接种病毒组之间的差异表达水平以发现差异表达miRNA,分析PCV2感染后第12小... 详细信息

旨在筛选猪圆环病毒2型感染猪肾上皮细胞(PK-15)后差异表达miRNA和mRNA,并探究miRNA和mRNA之间的互作关系。使用茎环定量PCR检测多个热点miRNA在PCV2感染组和未接种病毒组之间的差异表达水平以发现差异表达miRNA,分析PCV2感染后第12小时的蛋白质组学研究结果(GEO登录号:GSE71945)以获得差异表达mRNA,并分析差异表达miRNA和mRNA之间的互相作用关系。结果显示,在PCV2感染后第12小时miR-10b、miR-128、miR-155-5p、miR-21、miR-29b、miR-361-3p等表达量显著性变化,使用miRecords预测其靶基因,分别发现7 105、9 741、7 451、7 183、7 971、8 793个靶基因;PCV2感染后第12小时共有158个差异表达mRNA,分属于多种细胞结构成分并参与多条重要的细胞生物途径,且差异miRNA的靶基因和差异mRNA之间有大量的交集基因。上述结果表明,PCV2感染能导致细胞内多种miRNA差异表达,造成miRNA的靶基因表达紊乱,进而影响细胞正常的生命进程。

关键词：猪圆环病毒2型 PK-15细胞 miRNA mRNA 互作关系

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猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1320-1326页

作者：李畅库旭钢王俊伟李静朱玲何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应... 详细信息

为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,SYBR染料法和TaqMan探针法均能有效地扩增PCV3标准质粒以及其他阳性样品,并且对1.29×10~2~1.29×10~9拷贝·μL^(-1)的PCV3标准质粒(Pmd18-t-Cap)呈现良好的线性关系,该方法的检测灵敏度为1.29×10~2拷贝·μL^(-1),比常规PCR的灵敏度高100倍,该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应,具有良好的特异性;批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数(CV)均小于1.5%,呈良好的可重复性。用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测,结果显示本地区PCV3阳性率为8.06%(10/124),PCV2和PCV3共感染率为8.06%(10/124)。上述结果表明,本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型,为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段。

关键词：圆环病毒3型 SYBR荧光定量PCR TaqMan荧光定量PCR 检测

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ALG5对猪流感病毒复制的影响

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畜牧兽医学报 2020年第7期51卷 1719-1727页

作者：杨帅科邹佳辉蒋美君赵亚馨操继跃周红波华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

在实验室前期利用猪肾细胞(PK-15)CRISPR/Cas9全基因组敲除文库(PK-15-GeCKO)筛选到猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)复制相关的宿主因子磷酸十二烷基磷酸酯-葡萄糖基转移酶(ALG5)的前提下,深入研究ALG5与SIV复制的关系。本研究利... 详细信息

在实验室前期利用猪肾细胞(PK-15)CRISPR/Cas9全基因组敲除文库(PK-15-GeCKO)筛选到猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)复制相关的宿主因子磷酸十二烷基磷酸酯-葡萄糖基转移酶(ALG5)的前提下,深入研究ALG5与SIV复制的关系。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了包含ALG5基因向导RNA(gRNA)的质粒LentiGuide-puro-ALG5,并通过慢病毒包装感染稳定表达Cas9蛋白的新生猪气管上皮(NPTr)细胞系,采用有限稀释法筛选ALG5基因敲除的单克隆细胞株,通过靶基因组测序及Western blot验证了ALG5基因在NPTr细胞上的敲除水平,通过CCK-8试验验证基因敲除细胞和野生型细胞的细胞活性。结合TCID50和Western blot试验检测了ALG5敲除和过表达对SIV复制的影响。同时,检测了SIV感染NPTr细胞后内源性ALG5蛋白表达量的变化。最后检测了ALG5敲除对猪流感毒株F26复制的影响。结果显示:获得了ALG5敲除的NPTr单克隆细胞系(ΔALG5),ALG5基因敲除细胞与野生型细胞的细胞活性无显著差异。ALG5基因敲除显著抑制SIV的增殖,过表达促进SIV的增殖。在病毒感染条件下,随着病毒的增殖,ALG5的蛋白表达量上调。ALG5基因敲除后,也可以抑制猪流感毒株F26的复制,无毒株特异性。本研究表明,ALG5是影响猪流感病毒复制过程的一个重要宿主因子,为研究猪流感病毒的复制和致病机制奠定了基础。

关键词： ALG5 CRISPR/Cas9 基因敲除猪流感病毒

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细菌多重耐药泵的研究进展

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畜牧兽医学报 2011年第4期42卷 455-467页

作者：王春梅何启盖操继跃华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

细菌主要通过药物代谢酶将药物失活、靶向改造药物作用部位、降低细胞膜通透性和通过耐药泵主动将胞内药物泵出胞外4种方式抵抗抗生素和其他药物的毒性作用,其中细菌通过耐药泵将药物排出胞外是细菌的主要耐药机制之一,尤其是多重耐药泵... 详细信息

细菌主要通过药物代谢酶将药物失活、靶向改造药物作用部位、降低细胞膜通透性和通过耐药泵主动将胞内药物泵出胞外4种方式抵抗抗生素和其他药物的毒性作用,其中细菌通过耐药泵将药物排出胞外是细菌的主要耐药机制之一,尤其是多重耐药泵,可以外排结构迥异的多种药物或对细菌有毒的代谢产物。由于细胞膜结构的不同,革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌所具有的耐药泵种类和结构也有所不同。革兰氏阴性菌中,目前发现的细菌耐药泵种类主要包括ATP结合盒超家族(ATP-binding cassette family,ABC)、耐药节结化细胞分化(resistancenodulation division,RND)家族、主要易化子超家族(major facilitator superfamily,MFS)、小多重耐药(small multi-drug resistance,SMR)家族和多药及毒性化合物外排家族(multidrug and toxic-compound extrusion family,MA-TE)。革兰氏阳性菌中,目前发现的细菌耐药泵种类主要包括ABC、MFS、SMR和MATE家族。近年来,诸多学者开展了细菌耐药泵的结构及其耐药机制的研究,并且已有新药研发团队以绿脓杆菌耐药泵MexAB-OprM的结构为作用靶点开发新的抗菌药物做了大量的探索工作,天然化合物和常规药物中也存在能够抑制耐药泵活性的化合物。作者主要针对耐药泵的分类、不同细菌中耐药泵的特征及耐药泵作为新药作用靶点的潜在应用价值进行综述。

关键词：细菌多重耐药泵耐药泵抑制剂

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一株猪源鼠伤寒沙门氏菌的耐药性鉴定及其消除

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微生物学报 2006年第5期46卷 789-795页

作者：贾爱卿刘维红郭爱珍陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着... 详细信息

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着质粒的消除而被消除。所鉴定的耐药基因有blaTEM、blaOXA-1、cat1、tet(B)、aacC2、aadA8b、dhfrXⅡ和sul1等。喹诺酮类药物的靶基因gyrA与parC位于染色体上。GyrA在耐药决定区第87位氨基酸突变(N78D),导致了喹诺酮类药物的耐药性逆转。敏感菌中扩增不到质粒毒力基因spv与rck。耐药性消除后的菌株17S1对小鼠的毒力降低(LD50增加10倍),在小鼠体内的增长与散速度也显著降低(P<0.05)。以上证据表明,鼠伤寒沙门氏菌的多重耐药性主要由质粒决定,研究开发新型质粒消除剂将对克服鼠伤寒沙门氏菌多重耐药性具有重要意义。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌耐药性质粒消除细菌毒力整合子

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