检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术进展 2021年第4期11卷 471-475页

作者：王子健陈颖钰胡长敏郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

兽用诊断试剂产业服务于动物疾病防控的技术需求,既是一个独立的产业,也是多学科交叉、技术密集、资金密集型产业。和国际兽用诊断试剂产业相比,我国兽用诊断试剂产业起步晚,底子薄,产品质量差距明显。通过对比和分析兽用诊断试剂产业... 详细信息

兽用诊断试剂产业服务于动物疾病防控的技术需求,既是一个独立的产业,也是多学科交叉、技术密集、资金密集型产业。和国际兽用诊断试剂产业相比,我国兽用诊断试剂产业起步晚,底子薄,产品质量差距明显。通过对比和分析兽用诊断试剂产业的国内外现状,提出了我国兽用诊断试剂行业所面临的挑战,指出了未来的发展趋势,以期为我国兽用诊断试剂产业的发展提供有益的参考建议。

关键词：兽用诊断试剂检测技术动物疾病防控

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寨卡病毒NS1蛋白在杆状病毒系统中的表达及免疫原性分析

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中国兽医科学 2020年第3期50卷 346-352页

作者：魏思琪张路平张艳芳叶静曹胜波陈政华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

本研究旨在采用杆状病毒表达系统表达并纯化寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)NS1蛋白,并对其免疫原性进行鉴定。将ZIKV NS1基因克隆至杆状病毒载体pFastBac1中,构建重组转移载体,将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组... 详细信息

本研究旨在采用杆状病毒表达系统表达并纯化寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)NS1蛋白,并对其免疫原性进行鉴定。将ZIKV NS1基因克隆至杆状病毒载体pFastBac1中,构建重组转移载体,将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染sf9细胞,获得重组杆状病毒,经SDSPAGE和Western-blot鉴定蛋白正确表达后,将其感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,将纯化后的ZIKV NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,进行血清特异性抗体效价检测。最终结果显示,获得了纯度较高分泌表达的ZIKV NS1蛋白,并且血清特异性抗体效价实验表明,纯化的ZIKV NS1蛋白能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,有很好的免疫原性。本研究为ZIKV疫苗和诊断试剂盒的研发奠定了重要的基础。

关键词：寨卡病毒 NS1蛋白杆状病毒免疫原性

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牛支原体病诊断技术的研究进展

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中国兽医科学 2020年第10期50卷 1294-1300页

作者：刘晓雅王朝好李婷尹伊娅李雨芮陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

牛支原体感染可引起牛呼吸系统综合征、结膜炎、中耳炎、乳腺炎、关节炎甚至流产等疾病,给各国养牛业带来重大经济损失。由于目前尚无疫苗及有效的药物可用于该病的防治,及时诊断牛支原体病有利于牛场采取有效的措施以降低扩散风险,减... 详细信息

牛支原体感染可引起牛呼吸系统综合征、结膜炎、中耳炎、乳腺炎、关节炎甚至流产等疾病,给各国养牛业带来重大经济损失。由于目前尚无疫苗及有效的药物可用于该病的防治,及时诊断牛支原体病有利于牛场采取有效的措施以降低扩散风险,减少经济损失。本文就牛支原体病的临床特征、牛支原体分离培养、牛支原体免疫学检测、血清学诊断及分子诊断技术研究进展等方面进行综述,供同行参考。

关键词：牛支原体病诊断技术防控

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一例育肥猪猪呼吸道疾病综合征的诊断

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黑龙江畜牧兽医 2020年第16期 57-59,64,165页

作者：牛伟杰孙琪于学祥库旭钢何启盖罗锐华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)是由多种病原及环境条件等多种因素引起的猪呼吸系统疾病。2019年4月份,湖北省某猪场育肥阶段猪只出现明显的呼吸道症状,且发病率高达60%,死亡率约为8%,造成了严重的经济... 详细信息

猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)是由多种病原及环境条件等多种因素引起的猪呼吸系统疾病。2019年4月份,湖北省某猪场育肥阶段猪只出现明显的呼吸道症状,且发病率高达60%,死亡率约为8%,造成了严重的经济损失。为了对该病进行诊断,试验采用剖检病变、实验室检测进行诊断,对分离菌进行药敏试验,并根据诊断结果进行防控。结果表明:根据病猪临床症状、剖检病变及实验室检测结果,最后确定该场PRDC是由细菌、病毒混合感染所致。推断可能是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV-2)混合感染引起免疫抑制后继发多杀性巴氏杆菌(Pm)和副猪嗜血杆菌(Hps)、猪链球菌(SS)感染所致。可采取改善饲养环境、药物治疗及对猪群进行群体保健等防控措施。说明猪场应重视PRDC的实验室诊断及防控。

关键词：猪呼吸道疾病综合征经济损失混合感染免疫抑制诊断防控

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Rv0309通过抑制宿主炎性反应增强结核分枝杆菌的存活

Rv0309通过抑制宿主炎性反应增强结核分枝杆菌的存活

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中国防痨协会第33届全国学术大会暨中国防痨科技奖颁奖大会

作者：彭永崇朱小洁陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院华中农业大学国家动物结核病专业实验室

目的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是导致人类结核病（Tuberculosis,TB）的主要病原菌;宿主先天免疫调节蛋白对结核分枝杆菌的致病起着不可估量的作用。本研究前期在结核分枝杆菌RD区蛋白中发现了一种具有抑制炎性作用的... 详细信息

目的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是导致人类结核病（Tuberculosis,TB）的主要病原菌;宿主先天免疫调节蛋白对结核分枝杆菌的致病起着不可估量的作用。本研究前期在结核分枝杆菌RD区蛋白中发现了一种具有抑制炎性作用的蛋白Rv0309,并通过表达、纯化该蛋白在细胞水平对其进行了验证。为进一步在菌体水平研究其功能,确定该蛋白在结核分枝杆菌中的重要作用,我们对其进行了深入研究。方法本研究分别构建了表达Rv0309蛋白的重组耻垢分枝杆菌Msv0309和缺失该基因的牛分枝杆菌BCG缺失株BCGΔrv0309,通过Western blot确定了该蛋白在分枝杆菌的细胞亚定位,并对细菌的生长速率、菌落形态、细胞壁通透性的影响进行了研究。利用RAW264.7细胞感染模型,以MOI=10:1分别感染Msv0309、BCGΔrv0309以及野生型菌株,对不同时间点细胞炎性因子在mRNA和蛋白质水平的变化进行了检测,进一步分析了分枝杆菌的胞内存活以及炎性相关天然免疫细胞信号通路的磷酸化水平的变化。最后,利用BCGΔrv0309、回补菌株和野生株感染小鼠模型,通过体内感染实验验证了Rv0309在调控宿主固有免疫反应的作用。结果研究表明,Rv0309定位于分枝杆菌细胞壁并与细胞壁通透性有关。纯化的重组rRv0309蛋白能够抑制脂多糖诱导的IL-6的释放,并呈现剂量依赖性。与野生株相比,Msv0309能够显著抑制IL-6,IL-1β和TNF-α的产生。相比之下,与野生型BCG和回补菌株cBCGΔrv0309::rv0309相比,BCGΔrv0309强烈诱导这些细胞因子的表达。进一步研究表明,Rv0309是通过降低NF-κB p65/IκBα和MAPK ERK/JNK的磷酸化水平来抑制炎性细胞因子的产生。重要的是,表达Rv0309蛋白的BCG和耻垢分枝杆菌增强了巨噬细胞中分枝杆菌的存活率。体内研究结果表明,感染BCGΔrv0309的小鼠肺部在感染早期表达出高水平的TNF-α和IFN-γ,以及大量淋巴细胞和中性粒细胞,而在晚期感染中肺部载菌量和炎症病理损伤最小。结论 Rv0309蛋白能够抑制感染过程中宿主的炎症反应并提高感染后结核分枝杆菌的存活率,为结核疫苗的研发提供了理论基础。

关键词：结核分枝杆菌 Rv0309 牛分枝杆菌BCG 炎症致病性

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捻转血矛线虫部分发育相关基因功能的研究

捻转血矛线虫部分发育相关基因功能的研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

作者：胡敏李法财何莉邸文达李芳芳农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

寄生线虫感染性三期阶段(iL3)在形态生理生化等方面都与自由生活的秀丽新杆线虫滞育期幼虫(Dauer)相似,因此有人提出调控iL3和Dauer发育的分子机制也应该相似的"Dauer假说"。调控秀丽新杆线虫Dauer发育的分子机制了解得比较透... 详细信息

寄生线虫感染性三期阶段(iL3)在形态生理生化等方面都与自由生活的秀丽新杆线虫滞育期幼虫(Dauer)相似,因此有人提出调控iL3和Dauer发育的分子机制也应该相似的"Dauer假说"。调控秀丽新杆线虫Dauer发育的分子机制了解得比较透彻,而对大部分寄生线虫iL3的发育调控机制仍然所知甚少。本课题组自2010年开始探索捻转血矛线虫iL3发育调控分子机制研究,利用RACE-PCR、RT-PCR、异源转基因技术、蛋白质表达、免疫间接荧光方法、体外RNA干扰技术及体外抑制剂实验对该虫胰岛素和TGF-β信号传导通路中的重要基因进行了鉴定及功能研究。结果发现胰岛素信号通路重要基因在氨基酸序列、时空表达特征及功能方面与秀丽新杆线虫同源分子相似性高,而TGF-β信号传导通路中重要基因与秀丽新杆线虫同源分子的相似性较低。研究结果支持Dauer假说,但是同时提示捻转血矛线虫iL3的发育调控机制仍然在一些方面与秀丽新杆线虫Dauer的发育调控机制不同,需要进行更深入的研究。本研究建立了一系列技术方法,其发现增加了对捻转血矛线虫iL3发育相关基因功能的认识,为进一步研究调控机制奠定了良好的基础。由于捻转血矛线虫遗传操作系统的缺乏极大阻碍了对其分子调控机制的深入探索,今后需要建立更好的技术平台以阐明体内寄生阶段发育调控机制。

关键词：捻转血矛线虫感染期幼虫发育基因功能调控机制

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猪δ冠状病毒激活未折叠蛋白反应的分子机制

猪δ冠状病毒激活未折叠蛋白反应的分子机制

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会暨中国畜牧兽医学会生物制品学分会2021年学术论坛

作者：方谱县田丽园方六荣肖少波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院

猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年来发现的一种重要肠道冠状病毒,感染仔猪可引发腹泻、呕吐、脱水甚至死亡,而且具有跨种感染潜能。自2014年PDCoV首次在美国爆发以来,目前已有10多个国家或地区报道了PDCoV的发生与流...

猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年来发现的一种重要肠道冠状病毒,感染仔猪可引发腹泻、呕吐、脱水甚至死亡,而且具有跨种感染潜能。自2014年PDCoV首次在美国爆发以来,目前已有10多个国家或地区报道了PDCoV的发生与流行,严重威胁养猪业发展。内质网(ER)是细胞内蛋白质合成、加工、成熟以及运输的主要场所,参与各种信号通路的调控以维持细胞稳态。病毒感染常常导致大量的未折叠蛋白或折叠异常的蛋白积累,从而引起内质网应激(ER stress)。为了维持内质网稳态,细胞常常激活未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)应对内质网应激;同时,某些病毒也可操控细胞的UPR,促进自身复制。目前,关于PDCoV感染是否激活UPR以及如何激活尚不清楚。本研究系统分析了PDCoV感染LLC-PK1细胞(猪肾上皮细胞)和IPI-2I细胞(猪小肠上皮细胞)后UPR的3条信号通路(PERK、ATF6、IREI)的激活情况,发现PDCoV感染促进切割形式的XBP1s的表达、显著上调eIF2α的磷酸化水平,但对GRP78、GRP94、Calreticulin以及转录因子p50ATF6蛋白的表达没有影响,提示PDCoV感染激活了IRE1和PERK信号通路,但不激活ATF6信号途径。进一步通过药物处理、RNA干扰以及超表达实验,证实PDCoV激活IRE1和PERK信号通路有利于病毒复制。为了确定PDCoV编码的哪种蛋白在激活UPR中发挥重要作用,分析了PDCoV编码的所有结构蛋白和非结构蛋白,发现辅助蛋白NS6能激活UPR,而且可同时激活IRE1、PERK、ATF6三条通路。利用建立的PDCoV AJ1102株感染性克隆,借助CRISPR/Cas9技术,分别构建了NS6完全缺失、EGFP置换NS6的重组病毒,发现与同样采用感染性克隆拯救的PDCoV AJ1102野生型病毒相比,NS6缺失或EGFP置换的重组PDCoV激活IRE1和PERK信号途径的能力显著降低,从病毒水平进一步证实了NS6在诱导内质网应激中发挥主要作用,为阐明PDCoV的致病机制、挖掘潜在的药物靶标奠定了基础。

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神农架金丝猴常见疾病的流行病学调查及风险因素分析

神农架金丝猴常见疾病的流行病学调查及风险因素分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十九次全国学术研讨会

作者：祁明普汪乾坤陈颖钰胡长敏杨万吉姚辉李翔陈建国 Ian Duncan Robertson 陈焕春郭爱珍农业微生物学国家重点实验室动物医学院华中农业大学

引言川金丝猴为国家一级保护动物,是我国特有的珍稀濒危动物,有"第二国宝"的美称。其栖息地主要分布在湖北等地区,而湖北的金丝猴主要分布在神农架自然保护区[1]。目前神农架约有1,400只金丝猴。据报道,大量疾病如腺病毒病(A...

引言川金丝猴为国家一级保护动物,是我国特有的珍稀濒危动物,有"第二国宝"的美称。其栖息地主要分布在湖北等地区,而湖北的金丝猴主要分布在神农架自然保护区[1]。目前神农架约有1,400只金丝猴。据报道,大量疾病如腺病毒病(AdV)、甲肝病毒病(HAV)、B病毒病(BV)、柯萨奇病毒病(CV)、猴病毒40病(SV40)、麻疹病毒病(MV)、轮状病毒病(RV)和结核病(***)等威胁着灵长类动物生存和健康。更重要的是,有些灵长类疾病与

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捻转血矛线虫三期到四期发育阶段体外培养条件初探

捻转血矛线虫三期到四期发育阶段体外培养条件初探

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

作者：刘璐王春群周彩显瓦热斯刘慧刘峰叶丽莎张耀胡敏农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

捻转血矛线虫是寄生于反刍动物皱胃的吸血性寄生线虫,常导致宿主腹泻、消瘦、贫血甚至死亡,给牛羊养殖业带来巨大的经济损失。近年来关于其抗药性的文章在多地均有报道,因此急需挖掘新的药物靶标和疫苗候选抗原。由于缺乏可用的体外遗... 详细信息

捻转血矛线虫是寄生于反刍动物皱胃的吸血性寄生线虫,常导致宿主腹泻、消瘦、贫血甚至死亡,给牛羊养殖业带来巨大的经济损失。近年来关于其抗药性的文章在多地均有报道,因此急需挖掘新的药物靶标和疫苗候选抗原。由于缺乏可用的体外遗传操作系统,这些重要分子功能的研究受到极大限制。本研究旨在探索体外培养从感染性三期到寄生性四期阶段的虫体,以建立适合其发育的体外培养系统。多年来捻转血矛线虫的体外培养一直停滞于寄生阶段的四期早期,即相当于体内感染后的2天左右,本研究配置了一种新型的混合培养基使脱鞘三期幼虫在体外培养20天后,与感染后体内发育4-6天相似。在此培养系统中,幼虫体长达900μm,体宽达30μm;生殖原基由两个细胞发育至12个细胞左右;肠道发育为管状;可以初步区分雌雄虫。通过提高新型培养基中脱纤维蛋白血的含量,在体外培养20天后,20%幼虫发育至与体内8天幼虫相似。此时可以清晰的观测到生殖系统各部分器官,雌虫各器官清晰可辨;并与消化系统交互缠绕。本体外培养系统可使四期早期在体外发育至四期中后期,在前人培养系统的基础上有了长足的进步,为日后完成完整的寄生阶段虫体的体外培养系统打下了初步的基础。

关键词：捻转血矛线虫体外培养混合培养基红细胞

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我国牛星状病毒流行病学调查和新型基因型的鉴定

我国牛星状病毒流行病学调查和新型基因型的鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十九次全国学术研讨会

作者：朱杰祁明普姜传文彭永崇彭清洁陈颖钰胡长敏陈建国陈曦陈焕春郭爱珍农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

引言牛星状病毒(BoAstV)属于星状病毒科(AstV)哺乳动物星状病毒属(MAstV),目前该病毒在腹泻和健康犊牛的粪便中均可检测到[1]。然而该病毒在我国牛群中的流行率、遗传多样性以及与犊牛腹泻的关联了解甚少。材料与方法本研究采集了87份...

引言牛星状病毒(BoAstV)属于星状病毒科(AstV)哺乳动物星状病毒属(MAstV),目前该病毒在腹泻和健康犊牛的粪便中均可检测到[1]。然而该病毒在我国牛群中的流行率、遗传多样性以及与犊牛腹泻的关联了解甚少。材料与方法本研究采集了87份腹泻犊牛和77份无症状犊牛的粪便样本,这些样本分布在12个省份的20个养殖场。通过RT-PCR检测样本中的BoAstV,对阳性样本进行下一代测序(NGS)获得BoAstV的全基因组,并利用生物信息学软件对获得的序列进行遗传进化、重组等分析。

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