检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2015年第12期45卷 1295-1299页

作者：李悦陈伟贞陈建国胡长敏刘东明丁明星韩丽华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf... 详细信息

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf9细胞,获得第一代重组杆状病毒(P1)。然后病毒连续传代2次,用RT-PCR鉴定重组的杆状病毒,用SDS-PAGE验证纯化后蛋白质的表达,并使用BCA蛋白质浓度检测试剂盒检测纯化后的蛋白质样品的质量浓度。结果表明,感染重组杆状病毒后的Sf9细胞能够明显看到细胞皱缩、碎裂等感染症状;RT-PCR能够扩增出1 272bp的条带,证明重组的杆状病毒构建正确;SDS-PAGE结果表明重组的杆状病毒能够表达出45ku的条带,与理论大小一致;利用BCA蛋白质浓度检测试剂盒测得纯化样品中蛋白质的质量浓度为(216.05±10.02)μg/mL。小鼠抑制素α亚基成功地在杆状病毒表达系统中被表达,为今后抑制素的广泛应用奠定了基础。

关键词：抑制素α亚基杆状病毒表达系统表达纯化

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牛分枝杆菌基因分型技术的研究进展

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 508-512页

作者：张永亮陈颖钰熊学凯祁明普郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

牛分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）是结核分枝杆菌复合群（Mycobacteriumtuberculosiscomplex，MTC）中的重要成员，是引起牛结核病（Bovinetuberculosis）的主要病原菌。牛结核病在2016年被国际兽医局列为须申报的14类牛传染病之一，... 详细信息

牛分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）是结核分枝杆菌复合群（Mycobacteriumtuberculosiscomplex，MTC）中的重要成员，是引起牛结核病（Bovinetuberculosis）的主要病原菌。牛结核病在2016年被国际兽医局列为须申报的14类牛传染病之一，它不仅影响了养牛业的健康发展，还严重地威胁动物性食品安全和人类的健康。

关键词：牛分枝杆菌基因分型技术动物性食品安全结核分枝杆菌牛结核病复合群病原菌传染病

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狂犬病新型基因工程疫苗研究进展

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华中农业大学学报 2021年第3期40卷 75-84页

作者：柴本杰黄菲裴捷周明田大勇傅振芳赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070 上海青赛生物科技有限公司上海201506

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领... 详细信息

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。

关键词：狂犬病狂犬病病毒灭活疫苗弱毒疫苗核酸疫苗亚单位疫苗病毒样颗粒疫苗口服疫苗基因工程

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弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 527-531页

作者：江涛周艳琴刘琴聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

应用PCR技术从刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2(rhpotry protein 2)的部分基因,构建pGEX-KG-ROP2重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转入*** BL21CodonPlus中,在IPTG诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果表明,扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9%,该基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000,可被兔抗弓形虫免疫血清识别。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白ROP2 基因克隆原核表达

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乙型脑炎病毒E基因自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答

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中国兽医科学 2009年第2期39卷 130-134页

作者：刘学芹李么明曹胜波叶静孙敏轩肖少波陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中... 详细信息

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pCDE)分别免疫试验小鼠,进行体液免疫和细胞免疫检测。结果表明,在诱导体液免疫方面,pCDE要优于pSE,但pSE却可以诱导更强的细胞免疫反应,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒自杀性DNA疫苗免疫

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猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点萤光素酶报告载体的构建与活性检测

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中国兽医学报 2010年第1期30卷 107-109,136页

作者：王荡方六荣罗锐谢立兰江云波陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或p... 详细信息

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或poly(dAT∶dAT)的刺激下,萤光素酶表达显著增加。本试验为进一步探讨猪β干扰素信号转导通路的研究奠定了基础。

关键词：猪β干扰素启动子 NF-κB结合位点萤光素酶报告质粒

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表达乙型脑炎病毒PrM-E基因慢病毒载体的构建

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 342-346页

作者：陈龙杨晓红徐敏朱碧波陈焕春曹胜波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导29... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导293FT细胞。通过报告基因EGFP表达、间接免疫荧光和Western-blot检测,结果表明,上述三质粒共转染293FT细胞后,获得了假病毒,并且该假病毒可以高效转导正常293FT细胞。同时,PrM-E基因可以在被转导细胞中正确表达,从而为研制基于慢病毒载体的乙型脑炎病毒新型疫苗奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒慢病毒载体 PrM-E基因

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P58IPK通过PERK/eIF2α通路调控猪圆环病毒2型所诱导的细胞自噬

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畜牧兽医学报 2017年第11期48卷 2125-2134页

作者：杨了寒王凯许苏童张敏胡林何启盖张淑君华中农业大学动物科学技术学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

旨在研究猪圆环病毒2型(PCV2)感染激活的PERK/eIF2α通路是否与细胞自噬相关,以及过表达分子伴侣蛋白P58IPK在其中的作用。首先通过PERK特异性抑制剂GSK2606414和siRNA及蛋白免疫印迹检测磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、LC3-Ⅱ和ATG5-ATG12蛋... 详细信息

旨在研究猪圆环病毒2型(PCV2)感染激活的PERK/eIF2α通路是否与细胞自噬相关,以及过表达分子伴侣蛋白P58IPK在其中的作用。首先通过PERK特异性抑制剂GSK2606414和siRNA及蛋白免疫印迹检测磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、LC3-Ⅱ和ATG5-ATG12蛋白表达,研究PCV2感染PK-15细胞24h后PERK/eIF2α通路与细胞自噬的关系;然后通过构建和瞬时转染P58IPK真核过表达质粒及蛋白免疫印迹研究过表达P58IPK对PCV2感染PK-15诱导的PERK/eIF2α通路及细胞自噬的影响。结果显示,PERK特异性抑制剂GSK2606414和siRNA干扰PERK可极显著抑制PCV2诱导的p-eIF2α(P<0.01)和LC3-Ⅱ(P<0.01)表达;而过表达P58IPK同样可以极显著下调PCV2诱导的p-eIF2α(P<0.01)、ATG5-ATG12(P<0.01)及LC3-Ⅱ(P<0.01),且能极显著下调PCV2拷贝数(P<0.01)。结果表明,PCV2感染PK-15通过激活PERK/eIF2α通路诱导细胞自噬,过表达P58IPK通过抑制PERK通路抑制PCV2诱导的细胞自噬,从而抑制病毒复制。

关键词： P58IPK 内质网应激细胞自噬 PERK PCV2 ATG12

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猪Beclin1基因调控伪狂犬病病毒诱导细胞自噬和凋亡的机制分析

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1274-1281页

作者：胡林南良康张敏许苏童杨了寒李帅峰王凯刘正飞张淑君华中农业大学动物科学技术学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)感染后细胞自噬和凋亡情况,进一步分析鉴定PRV感染条件下与Beclin1互作的猪宿主凋亡家族蛋白。利用免疫印迹(WB)方法检测PRV感染细胞的自噬水平;利用流式细胞术探讨凋亡水平;最后利用免疫共沉淀试验分析PRV感... 详细信息

旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)感染后细胞自噬和凋亡情况,进一步分析鉴定PRV感染条件下与Beclin1互作的猪宿主凋亡家族蛋白。利用免疫印迹(WB)方法检测PRV感染细胞的自噬水平;利用流式细胞术探讨凋亡水平;最后利用免疫共沉淀试验分析PRV感染PK-15细胞中Beclin1与Bcl-2和Bcl-xL的结合水平。结果显示,PRV感染导致LC3-Ⅱ的表达明显增多,而P62显著下降,且AKT(S473)磷酸化水平显著减少;其次,PRV感染诱导细胞凋亡且显著上调剪切型Caspase-9/8的表达水平;最后,免疫共沉淀结果显示PRV感染条件下Beclin1能与Bcl-2和Bcl-xL结合,但结合的水平明显降低。PRV感染诱导的细胞自噬可能依赖于PI3K-Ⅰ/AKT信号通路,PRV感染可能同时激活了线粒体凋亡途经和死亡受体途经从而诱导细胞凋亡,而PRV感染诱导的细胞自噬和细胞凋亡可能通过抑制Beclin1和Bcl-2、Bcl-xL结合而相互关联。

关键词： PRV 细胞自噬细胞凋亡 Beclin1

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检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争ELISA方法的建立

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农业生物技术学报 2008年第4期16卷 555-561页

作者：卢顺向敏吴斌赵战勤汤细彪但汉并张建民何华陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗... 详细信息

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体。经实验确定抗原包被浓度223 ng/mL,待检血清最佳稀释度1∶2,酶标单抗AH12工作浓度1∶3 200,血清抑制率大于50%为阳性。稳定性试验表明,批间和批内变异系数均小于10%。应用竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时检测50份已知血清和82份未知血清,已知血清检测结果显示两者阳性符合率为90%,阴性符合率为100%;未知血清检测结果显示竞争ELISA的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%。表明所建立的单抗竞争ELISA方法具有敏感、特异、稳定和简便等特点,在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值。

关键词：多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体单抗竞争ELISA 抗体检测

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