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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：蔡婷付艳苹谢甲涛程家森姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070

本研究通过对采自四川省发病油菜上的菌核进行分离纯化，筛选获得一株菌落形态异常菌株8-2。相比于核盘菌正常菌株1980或Ep-1PNA367，菌株82在PDA上生长较慢，对油菜叶片呈现毒力衰退的特性，是一株典型的弱毒菌株。提取菌株8-2的dsRNA... 详细信息

本研究通过对采自四川省发病油菜上的菌核进行分离纯化，筛选获得一株菌落形态异常菌株8-2。相比于核盘菌正常菌株1980或Ep-1PNA367，菌株82在PDA上生长较慢，对油菜叶片呈现毒力衰退的特性，是一株典型的弱毒菌株。提取菌株8-2的dsRNA，发现该菌株中含有3条dsRNA片段（分别命名为dsRNAl、dsRNA2和dsRNA3），最大的片段超过lOkb，另外两条片段大小分别为6kb和1.8kb。回收纯化后进行随机克隆后，将获得的cDNA序列与NCBI数据库进行了比对分析，获得了dsRNA片段的部分遗传信息。其中dsRNAl是一种新型负单链RNA病毒的复制体，基于获得大部分cDNA序列分析，表明该负链病毒与与动物水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus)具有同源性，其基因组与典型的负链病毒具有相似性，因此将该病毒暂且命名为Sclerotinia sclerotiorum negatlve-strand RNA virus3(SsNSRV-3);另外两条dsRNA片段分别与Botrytis porri RNA virus1和Botryotinia fuckeli-ana partitivirus1具有同源性，是两个dsRNA病毒的基因组。通过原生质体再生试验和菌丝尖端脱毒研究发现，在原生质体再生菌株和菌丝顶端分离物中，相比dsRNA2和dsRNA3片段，病毒SsNSRV-3极易丢失。菌株8-2中所含病毒的全长序列、分类地位及其与菌株弱毒相关的特性正在研究中。

关键词：油菜病害核盘菌菌株鉴定基因测序

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灰葡萄孢致病相关基因BC1G_07326的克隆及其功能验证

灰葡萄孢致病相关基因BC1G_07326的克隆及其功能验证

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：刘信强谢甲涛付艳苹姜道宏陈桃李国庆程家森湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070

由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害，灰葡萄孢的寄主范围极其广泛，能侵染400多种植物，造成严重的经济损失。灰葡萄孢对寄主的致病作用是一个极其复杂的过程，多种致病因子参与其中，例如，细... 详细信息

由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害，灰葡萄孢的寄主范围极其广泛，能侵染400多种植物，造成严重的经济损失。灰葡萄孢对寄主的致病作用是一个极其复杂的过程，多种致病因子参与其中，例如，细胞壁降解酶、毒素、抵抗寄主防卫反应的酶类及小分子物质。灰霉病的防治是农业生产上的难题之一，从分子水平上探究灰葡萄孢的致病机制可为灰霉病的防治奠定一定的基础。本研究主要利用基因敲除和基因互补技术对灰葡萄孢基因BC1G_07326的功能进行初步研究，目前主要取得以下研究结果。

关键词：灰葡萄孢致病 BC1G_07326

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真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：刘四谢甲涛程家森姜道宏付艳苹湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学/农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒.弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注.在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进... 详细信息

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒.弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注.在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进化.目前关于真菌病毒与寄主互作的研究主要集中在栗疫病菌弱毒病毒与栗疫病菌之间的互作,其他真菌病毒与寄主(病毒与核盘菌等)的互作体系也已陆续建立.前期研究过程中克隆得到真菌病毒BfHV-2/10HN454,该病毒基因组由6 251个核苷酸(不含Poly A结构)组成,含有两个推定的开放性阅读框(ORF).ORF1编码具有RdRp结构域特性的蛋白,基于该结构域分析,病毒BfHV-2/10HN454与Hypoviridae科的病毒亲缘关系较近;ORF2推定编码的蛋白与人及动物的epidermal growth factor receptor (EGFR) pathway substrate (EGFRS)蛋白具有一定的相似性.

关键词：真菌病毒 EGFRS-like蛋白病毒与寄主互作

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砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘娟洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室/农业微生物学国家重点实验室

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差。因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法。以砂梨... 详细信息

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差。因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法。以砂梨离体植株"金水2号"叶片和茎秆为材料,采用改进的CTAB、实验室建立的SDS-过柱法（专利号:ZL201010509840.2）和Trizol（Invitrogen公司）法提取样品核酸总RNA。结果表明,采用Trizol法,样品上样量超过0.1g,核酸降解;叶片样品上样量最适为0.05g左右,裂解于1mL溶液中,电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA完整带型,无DNA条带污染,OD/OD值都在1.8～2.0,无蛋白污染,质量好。提取茎秆部位样品,电泳检测无完整的核酸RNA条带,总RNA均存在不同程度的降解。采用SDS-过柱法提取总RNA,琼脂糖电泳可以看出叶片、茎尖、茎秆中部和茎基部组织材料所提取的RNA完整性都很好,没有拖尾现象,但却有较高浓度的基因组DNA污染。对比Trizol方法和SDS-过柱法,本研究采用了CTAB法提取"金水2号"叶片和茎秆的茎尖、中部和基部组织样品,最适上样量为0.05～0.1g/mL。电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA,带型完整,无可见条带的DNA污染,紫外分光光度计检测OD/OD值也均在1.8～2.0,无蛋白污染。结果表明,采用CTAB法可以有效提取其砂梨离体组织不同部位总RNA,用于病毒检测及其RNA-sequence转录组测序等后继试验研究。

关键词：砂梨 CTAB SDS-过柱法 total RNA

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砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

砂梨离体植株不同组织部位提取总RNA的效果分析

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：刘娟洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差.因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法.以砂梨离... 详细信息

砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差.因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法.以砂梨离体植株"金水2号"叶片和茎秆为材料,采用改进的CTAB、实验室建立的SDS-过柱法(专利号：ZL2010 10509840.2)和Trizol(Invitrogen公司)法提取样品核酸总RNA.结果表明,采用Trizol法,样品上样量超过0.1g,核酸降解;叶片样品上样量最适为0.05g左右,裂解于1mL溶液中,电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA完整带型,无DNA条带污染,OD260/OD280值都在1.8 ～2.0,无蛋白污染,质量好.提取茎秆部位样品,电泳检测无完整的核酸RNA条带,总RNA均存在不同程度的降解.采用SDS-过柱法提取总RNA,琼脂糖电泳可以看出叶片、茎尖、茎秆中部和茎基部组织材料所提取的RNA完整性都很好,没有拖尾现象,但却有较高浓度的基因组DNA污染.对比Trizol方法和SDS-过柱法,本研究采用了CTAB法提取"金水2号"叶片和茎秆的茎尖、中部和基部组织样品,最适上样量为0.05 ～0.1g/mL.电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA,带型完整,无可见条带的DNA污染,紫外分光光度计检测OD260/OD280值也均在1.8 ～2.0,无蛋白污染.结果表明,采用CTAB法可以有效提取其砂梨离体组织不同部位总RNA,用于病毒检测及其RNA-sequence转录组测序等后继试验研究.

关键词：砂梨 CTAB SDS-过柱法 total RNA

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侵染我国芋的杆状DNA病毒分子鉴定及特异性检测

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植物病理学报 2013年第6期43卷 590-595页

作者：施世明王彦芬王国平王利平徐文兴洪霓华中农业大学植物科技学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用已报道杆状DNA病毒属（Badnavirus）的通用检测引物BadnaFP／BadnaRP，从7份芋样品中扩增到Badnavirus病毒的RT／RNaseH基因保守区域，获得12个克隆序列，长度为576bp。序列分析结果显示，来自不同样品的克隆间核苷酸和氨基酸序列... 详细信息

采用已报道杆状DNA病毒属（Badnavirus）的通用检测引物BadnaFP／BadnaRP，从7份芋样品中扩增到Badnavirus病毒的RT／RNaseH基因保守区域，获得12个克隆序列，长度为576bp。序列分析结果显示，来自不同样品的克隆间核苷酸和氨基酸序列相似性分别为78．8％～99．5％和81．3％～99．5％；来自同一样品扩增产物的克隆间在序列上也存在较大差异，核苷酸和氨基酸序列相似性分别为89．6％～100％和92．7％～100％。在系统进化树中，本研究所获序列与Badnavirus病毒的亲缘关系相对较近，聚在同一簇，表明此病毒为Badnavirus属病毒，但与芋杆状病毒（Tarobacillifo硎virus，TaBV）序列相似性较低，核苷酸和氨基酸相似性分别为58．0％～62．2％和58．5％～64．1％，推测为杆状DNA病毒属的一个新种。根据所测定序列设计了用于该病毒检测的引物P197／P433，对51份芋样品检测结果表明，该引物可有效检测来源于我国芋的Badna—virus病毒。

关键词：芋杆状DNA病毒 PCR 序列分析

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我国梨树腐烂病菌致病力分化分析

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果树学报 2013年第4期30卷 657-664页

作者：张美鑫翟立峰周玉霞陈晓忍贾娜娜洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院.湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学.农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】研究明确我国梨树腐烂病菌致病力的分化状况。【方法】梨离体枝条经打孔法造成伤口后接种梨树腐烂病菌,通过接种在5个梨系统(白梨、沙梨、秋子梨、西洋梨和新疆梨)不同品种上观测和比较不同来源菌株的致病力差异,并根据各菌株... 详细信息

【目的】研究明确我国梨树腐烂病菌致病力的分化状况。【方法】梨离体枝条经打孔法造成伤口后接种梨树腐烂病菌,通过接种在5个梨系统(白梨、沙梨、秋子梨、西洋梨和新疆梨)不同品种上观测和比较不同来源菌株的致病力差异,并根据各菌株的综合致病力强弱划分为不同类型,分析致病力分化与菌株来源间的相关性。【结果】研究发现来源于我国14省市5个梨系统的91份梨树腐烂病菌株在不同梨品种上的致病力均存在显著性差异,但同一菌株在5个梨品种上的症状反应程度有异。根据各供试菌株在不同梨品种上的综合致病力强弱可将其划分为3个类型,其中强致病力菌株16份,占17.6%;中致病力菌株70份,占76.9%;弱致病力菌株5份,占5.5%。来源于不同地区和梨系统的菌株之间其致病类型的分布比例存在明显的差异,这种差异可能与其梨系统的抗病性相关。【结论】来源于我国不同地区和梨系统的梨树腐烂病菌存在明显的致病力分化,其综合致病力可划分为强、中、弱3个致病类型,以中等致病力菌株为优势群体。

关键词：梨树腐烂病菌菌株致病力分化

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梨腐烂病致病力的室内快速测定方法研究

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果树学报 2013年第2期30卷 317-322,F0003页

作者：张美鑫翟立峰周玉霞陈晓忍贾娜娜洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】为了研究建立我国梨腐烂病致病力室内快速、稳定的测定方法,【方法】以‘丰水梨’的离体枝条、叶片、嫩梢和果实为材料,采用不同方法造成伤口后接种梨腐烂病的强致病力菌株F-AH-3a,在25℃下保湿培养后观测各处理的发病程度,并... 详细信息

【目的】为了研究建立我国梨腐烂病致病力室内快速、稳定的测定方法,【方法】以‘丰水梨’的离体枝条、叶片、嫩梢和果实为材料,采用不同方法造成伤口后接种梨腐烂病的强致病力菌株F-AH-3a,在25℃下保湿培养后观测各处理的发病程度,并在‘丰水梨’和‘康德梨’上用梨腐烂病致病力已知的菌株对测定方法进行验证。【结果】叶片伤口接种,叶正面的病斑较背面的大,经6针与1和3针刺伤处理产生的病斑大小之间存在显著性差异;嫩梢和果实伤口接种,不同处理产生的病斑大小之间无显著性差异;枝条伤口接种3d后,经打孔、环割、烫打及10针刺伤处理的枝条发病率均为100%,而经3针刺伤、烫伤和芽痕处理的分别为55%、40%和15%。前4种处理病斑的长度显著大于后3种处理。在‘丰水梨’和‘康德梨’品种上,用5个梨腐烂病致病力已知菌株对测定方法进行验证的结果表明,各菌株通过枝条打孔接种后产生的病斑,在其长度之间的差异与菌株致病力已知的强弱相吻合。【结论】采用枝条打孔接种法的测定效果显著、稳定,且操作简单,可用于梨腐烂病菌致病力的室内快速测定。

关键词：梨腐烂病致病力室内测定枝条打孔接种

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我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

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果树学报 2013年第1期30卷 140-146,F0004页

作者：周玉霞程栎菁张美鑫翟立峰洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省（市）梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化... 详细信息

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省（市）梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为*** ***。

关键词：梨腐烂病苹果腐烂病 rDNA-ITS 致病力

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拟南芥光周期途径参与拟南芥与芸薹属根肿菌早期互作

拟南芥光周期途径参与拟南芥与芸薹属根肿菌早期互作

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中国植物病理学会第十一届青年学术研讨会

作者：毕凯赵莹付艳苹陈桃谢甲涛程家森姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070

近年来根肿病在十字花科作物上广泛发生，给十字花科作物生产带来极严重损失。根肿病由专性活体寄生病原物芸薹属根肿菌(Plasmodiophora brassicae)引起，发病后期寄主根系组织明显肿大、畸形，严重影响作物产量和品质。从分子水平研究...

近年来根肿病在十字花科作物上广泛发生，给十字花科作物生产带来极严重损失。根肿病由专性活体寄生病原物芸薹属根肿菌(Plasmodiophora brassicae)引起，发病后期寄主根系组织明显肿大、畸形，严重影响作物产量和品质。从分子水平研究、阐述寄主抗性机理将为生产上有效防治该病提供有力的理论依据。根肿菌能成功侵染模式植物拟南芥，两者的互作体系成为研究这一重要病害的模式系统。为了研究寄主植物抗性的分子机理，我们通过观察拟南芥与根肿菌早期互作过程，选取了两个病菌侵入过程中的关键时间点(24dpi、48dpi)，采取高通量数字基因表达谱分析技术筛选到了一系列拟南芥响应根肿菌侵染的差异表达基因。对这些差异表达基因进行了基于pathway的显著性分析，得到一系列拟南芥响应根肿菌侵染相关的途径。其中与拟南芥光周期节律相关途径(Circadian rhythm Plant)紧密相关，注释到该通路的所有基因共有332个，其中在24 hpi、48 hpi时间点分别有34、27个基因差异表达。其中组成光周期途径的核心元件相关基因均显著下调表达，这些基因通过调控拟南芥开花途径关键基因来控制拟南芥的开花过程，暗示拟南芥在受到根肿菌侵染的情况下可能通过调控开花过程，加速生殖生长进程，使更多碳源在地上部分积累，防止根肿菌诱导地下根组织积累过量碳源。为了深入研究光周期节律途径在拟南芥和根肿菌早期互作过程中的功能，我们采用了基因超量表达和基因置换策略，通过农杆菌介导的转化方法转化拟南芥获得超量表达转化植株;并获得相应基因的T-DNA插入突变体。深入研究这些超量表达转化子和T-DNA插入突变体中根肿菌的侵染过程及其表型变化，有助于阐明该途径在拟南芥与根肿菌互作过程中的功能。

关键词：

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