检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2022年第5期52卷 633-639页

作者：陈秋慧李政志张海艳严蕊杨晶涵陈洁陈曦陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 武汉市农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种能在恒温设备下对靶基因进行扩增的技术,具有精确、快速、简单及低成本的优点,已广泛应用于食品安全、医疗卫生及农业现场检测等多个领域。本文主要从环介导等温技术的原理、反应体系改进、产物检测方法... 详细信息

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种能在恒温设备下对靶基因进行扩增的技术,具有精确、快速、简单及低成本的优点,已广泛应用于食品安全、医疗卫生及农业现场检测等多个领域。本文主要从环介导等温技术的原理、反应体系改进、产物检测方法的改进、LAMP与其他技术的联用,以及目前LAMP在动物病原检测方面的应用进行了分析,并展望了LAMP技术的应用前景,以期为同仁提供参考。

关键词：环介导等温扩增环引物 Bst DNA聚合酶 LAMP体系动物病原检测

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表达三拷贝糖蛋白的狂犬病新型疫苗SAD-tOG株的研发

表达三拷贝糖蛋白的狂犬病新型疫苗SAD-tOG株的研发

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第21次全国犬业科技学术研讨会

作者：吴颖张程光赵剑清汪宗梅王平宋文藏周明傅振芳赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室武汉科前生物股份有限公司

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的一种重要的人兽共患传染病,狂犬病一旦出现临床症状死亡率接近100%。犬、猫是狂犬病的主要传染源,当前我国宠物犬、猫数量超过1.2亿只,但宠物犬、猫用的狂犬疫苗多数来自于进口,价格高昂。因此,研发安全... 详细信息

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的一种重要的人兽共患传染病,狂犬病一旦出现临床症状死亡率接近100%。犬、猫是狂犬病的主要传染源,当前我国宠物犬、猫数量超过1.2亿只,但宠物犬、猫用的狂犬疫苗多数来自于进口,价格高昂。因此,研发安全、有效、廉价的犬、猫通用狂犬病疫苗对保障人类健康和公共卫生安全具有重要意义。本研究通过反向遗传技术获得表达3个拷贝密码子优化G基因的重组狂犬病毒SAD-tOG株,该毒株免疫原性优于亲本毒株SAD。纯化SAD-tOG病毒与佐剂混合后免疫犬、猫无副反应,且具有良好的免疫原性,可作为狂犬病疫苗候选株。

关键词：狂犬病病毒重组病毒犬猫模型免疫原性疫苗

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牛樟芝羊毛甾醇合酶基因AcLSS克隆表达及其对不同环境因子的响应

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食用菌学报 2021年第5期28卷 55-63页

作者：李甜甜范智玉梁运祥梅余霞华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

通过转录组测序得到牛樟芝(Antrodia cinnamomea)cDNA序列,用合适的开放阅读框(open reading frame,ORF)进行BLAST得到羊毛甾醇合酶基因AcLSS的蛋白质编码区(sequence coding for amino acids in protein,CDS)序列,根据CDS序列设计引物进行PCR扩增,将AcLSS基因通过T4 DNA连接酶连接到载体pET28a上,通过原核表达得到重组蛋白,采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测体外酶促反应产物,验证其生物活性,并探讨AcLSS基因对不同环境因子的响应。结果表明:在2205 bp处有一条带,与CDS序列大小相符;编码734个氨基酸,相对分子质量大小约为80740,重组蛋白为可溶性蛋白质,能催化2,3-氧化角鲨烯生成羊毛甾醇,具有羊毛甾醇合酶的催化功能;与对照组(麸皮)相比,葡萄糖、蔗糖为碳源时,三萜含量降低,且组间差异均具有统计学意义,基因相对表达量组间差异均无统计学意义;与对照组(酵母提取物)相比,氮源为蛋白胨、硫酸铵时,三萜含量和基因相对表达量均降低,且组间差异均具有统计学意义;与对照组相比,添加金属离子时,三萜含量和基因相对表达量均下降,且组间差异均具有统计学意义;与对照组相比,茉莉酸甲酯、油酸、α-松油醇的添加均导致三萜含量下降,且组间差异均具有统计学意义,而油酸、α-松油醇的添加导致基因相对表达量增加,组间差异均具有统计学意义。

关键词：牛樟芝羊毛甾醇合酶酶促反应三萜基因表达

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ASFV、CSFV、PRRSV多重荧光PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医学报 2021年第11期41卷 2107-2113页

作者：牛伟杰于学祥高宇库旭钢何启盖罗锐华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心湖北武汉430070

非洲猪瘟病毒(ASFV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前影响猪群和我国养殖业的重要的3种病原,且3种疾病临床表现相似,因此,建立一种可以快速检测、区分3种病原的方法十分必要。本研究依据ASFV、CSFV、PRRSV的... 详细信息

非洲猪瘟病毒(ASFV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前影响猪群和我国养殖业的重要的3种病原,且3种疾病临床表现相似,因此,建立一种可以快速检测、区分3种病原的方法十分必要。本研究依据ASFV、CSFV、PRRSV的基因保守片段设计特异性引物和探针,建立了多重荧光PCR检测方法。结果显示,所建立的多重荧光PCR可同时检测ASFV、CSFV、PRRSV 3种病原,特异性好、灵敏度高,对3种病原的检测下限分别达到13,16,26个拷贝;重复性良好,组内及组间重复试验的变异系数(CV)均在2%以内。将ASFV OIE标准、CSFV、PRRSV国家标准荧光qPCR作为金标准,同时对180份样品进行检测对比,结果显示,本研究方法对CSFV灵敏性和特异性分别为94.59%和100.00%,总符合率为98.89%;对PRRSV灵敏性为92.68%,特异性为98.56%,总符合率为97.22%;未检测到ASFV。使用所建立的方法对839份临床样品进行检测,结果显示,CSFV、PRRSV是当前猪群疾病的主要病原,且育肥阶段猪只CSFV、PRRSV核酸检出率均显著高于保育阶段猪只(P<0.01)。结果表明,本研究所建立的方法具有较高的灵敏性和特异性,可用于临床样品检测,猪场在防控非洲猪瘟的同时也须加强对CSF、PRRS的防控工作。

关键词：多重荧光定量PCR 鉴别诊断非洲猪瘟经典猪瘟猪繁殖与呼吸综合征

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丁酸梭菌MY-Z高密度发酵培养基及发酵工艺的优化

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养殖与饲料 2022年第11期21卷 21-27页

作者：朱曦李英俊梅余霞查宇王朝瑞梁运祥华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北蓝谷中微生物技术有限公司湖北宜昌443100

[目的]研究丁酸梭菌的营养条件并优化发酵工艺,为与丁酸梭菌培养发酵相关的实验室研究及规模化生产工艺优化提供依据。[方法]通过单因素试验,比较8种常见廉价碳氮源对丁酸梭菌增菌的影响,对高密度发酵培养基和培养条件进行优化。[结果]... 详细信息

[目的]研究丁酸梭菌的营养条件并优化发酵工艺,为与丁酸梭菌培养发酵相关的实验室研究及规模化生产工艺优化提供依据。[方法]通过单因素试验,比较8种常见廉价碳氮源对丁酸梭菌增菌的影响,对高密度发酵培养基和培养条件进行优化。[结果]丁酸梭菌MY-Z发酵最佳营养组分为:葡萄糖30.0g/L、酵母粉5.0g/L、鱼粉30.0g/L或肽粉30.0g/L、K_(2)HPO_(4)1.05g/L、MgSO_(4)·7H_(2)O1.21g/L、NaCl0.3g/L、CaCO_(3)1.5g/L、MnSO_(4)·H_(2)O0.012g/L、促生长因子0.2g/L;最佳发酵工艺为:37℃恒温培养30~36h,发酵过程中恒定pH为6.5,并在发酵10h左右进行总量为5%的连续变量补料。丁酸梭菌MY-Z在此发酵工艺下,发酵32h左右,芽孢数可达2.28×10^(9)CFU/mL。[结论]通过优化发酵工艺可有效提高发酵液菌数,从而降低生产成本,对丁酸梭菌的产业化推广与应用具有重要意义。

关键词：丁酸梭菌培养基工艺优化高密度发酵肠道益生菌

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猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定

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中国动物传染病学报 2024年第5期32卷 115-125页

作者：张宁赵平刘思雨赵硕陈忠伟何颖欧阳康卢冰霞蒋家霞郭旋林昌华赵武黄伟坚秦毅斌赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530005 广西职业技术学院南宁530226 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司南宁530042 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司贵港537100 广西桂垦牧业有限公司南宁530022

为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后... 详细信息

为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白,将其进行纯化后再免疫小鼠,制备针对PDCoV-N蛋白的mAb,并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blot、亚类的鉴定、mAb特异性的鉴定。结果,成功构建pColdⅡ-PDCoV-N重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达,分子质量约为38 kDa;经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得1株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株;制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048×10^(6)。IFA、Western blot试验表明该mAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合,亚类鉴定其亚型为IgG1,轻链为κ链。该mAb只与PDCoV反应,而与其他猪肠道病毒无交叉反应,表明本研究制备的mAb具有良好的特异性。本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的mAb,为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持。

关键词：猪德尔塔冠状病毒 N蛋白单克隆抗体

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柑橘黄龙病药物防治策略

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华中农业大学学报 2021年第1期40卷 49-57页

作者：韩鹤友程帅华宋智勇丁芳徐强农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学生命科学与技术学院武汉430070 华中农业大学理学院武汉430070 湖北省作物病害检测和安全控制重点实验室/华中农业大学植物科学技术学院武汉430070 园艺植物生物学教育部重点实验室/华中农业大学园艺林学学院武汉430070

柑橘黄龙病(HLB)是世界范围内柑橘生产上的毁灭性病害,已在全球范围造成了巨大的经济损失。黄龙病由韧皮部限制性寄生菌Candidatus liberibacters spp.引起,主要通过柑橘木虱Diaphorina citri(Kuwayama)在田间传播。目前,黄龙病的主要... 详细信息

柑橘黄龙病(HLB)是世界范围内柑橘生产上的毁灭性病害,已在全球范围造成了巨大的经济损失。黄龙病由韧皮部限制性寄生菌Candidatus liberibacters spp.引起,主要通过柑橘木虱Diaphorina citri(Kuwayama)在田间传播。目前,黄龙病的主要防治方法有:一是传统的“三板斧”防治策略,即种植无病苗木、严防木虱(大面积连片统防统治)和挖净病树;二是药物防治,主要包括抗生素化学药物、窄谱靶向化学药物、免疫诱导物、纳米制剂等在内的多种抗菌剂。本文对近年来国内外柑橘黄龙病药物防治的相关研究进行了系统论述,以期为柑橘黄龙病菌新型防治药剂研发提供理论依据和参考。

关键词：柑橘黄龙病药物防治金属纳米药物免疫诱导物靶向药物纳米农药绿色农药

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鱼源致病菌皮特不动杆菌Ap-W20的全基因组序列及其毒力特征分析

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水产学报 2020年第9期44卷 1488-1501页

作者：王超杰黎洁王旭王至诚王卫民罗毅华中农业大学水产学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业微生物学国家重点实验室

皮特不动杆菌是一种新兴的鱼源致病菌,为了对该菌的致病机理进行研究并为该菌引起的鱼类疾病防治提供技术储备,实验选取皮特不动杆菌菌株Ap-W20进行了全基因组测序,并对其毒力特征进行了分析。结果发现,Ap-W20全基因组序列总长为4 399 7... 详细信息

皮特不动杆菌是一种新兴的鱼源致病菌,为了对该菌的致病机理进行研究并为该菌引起的鱼类疾病防治提供技术储备,实验选取皮特不动杆菌菌株Ap-W20进行了全基因组测序,并对其毒力特征进行了分析。结果发现,Ap-W20全基因组序列总长为4 399 705 bp,GC含量为38.78%,共预测到4 230个编码序列(CDS),存在4个质粒,GenBank数据库登录号为CP027658～CP027662。ANI分析结果证实,Ap-W20属于皮特不动杆菌,且ApW20与已知人源皮特不动杆菌AP882(96.69%)和环境源皮特不动杆菌PHEA-2(96.55%)相似度较高。Ap-W20与AP882、PHEA-2的比较基因组学分析发现,Ap-W20中的基因岛、前噬菌体和质粒数量最多,这很可能与它们各自的分离环境和致病力有关。通过与毒力因子数据库(VFDB)比对,在Ap-W20全基因组中预测到286个毒力基因,主要与黏附和抗吞噬等有关。Ap-W20中还存在Ⅰ、Ⅱ和Ⅵ型分泌系统、多套双组分调控系统以及细菌素合成基因簇等,表明鱼源皮特不动杆菌可能存在复杂的致病机制。本研究对鱼源皮特不动杆菌全基因组进行了毒力特征分析,为该菌引起的鱼类疾病防治奠定了基础。

关键词：皮特不动杆菌全基因组测序 ANI分析比较基因组学毒力特征

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口蹄疫病毒O型鼠源单个B细胞抗体的制备及阻断ELISA方法的建立

口蹄疫病毒O型鼠源单个B细胞抗体的制备及阻断ELISA方法的建立

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第五届中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2023年学术年会

作者：杨郑欣朱元源李文涛华中农业大学兽医学院湖北洪山实验室农业微生物学国家重点实验室中国兽医药品监察所国家WOAH经典猪瘟参考实验室

引言口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种急性、烈性和高度致死性传染病。FMDV主要侵害猪、牛和羊等偶蹄动物,每年造成巨大的经济损失,严重影响畜牧业的发展。FMDV包括7种血清型:A型、O型、C型、亚洲1型、南非1、2和3型。不同血...

引言口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种急性、烈性和高度致死性传染病。FMDV主要侵害猪、牛和羊等偶蹄动物,每年造成巨大的经济损失,严重影响畜牧业的发展。FMDV包括7种血清型:A型、O型、C型、亚洲1型、南非1、2和3型。不同血清型间无交叉保护,病毒的免疫逃逸导致疫苗免疫效果差、病毒传染力强。单克隆抗体(MAb)可识别特定的抗原决定簇,是检测抗原抗体的基础工具。单个B细胞抗体制备技术作为新一代快速制备抗体的方法,具有快速、高效、产量高等优点,且表达的抗体具有天然构象,该技术已开始应用于病原体诊断、疾病治疗以及病毒跨种传播机制研究等。本研究拟建立单个B细胞抗体制备平台,筛选O型FMDV的单克隆抗体,并建立阻断ELISA检测方法。

关键词：

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表达非洲猪瘟病毒p54蛋白重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2021年第11期48卷 4182-4191页

作者：何兴林邹忠龚文孝张宇飞李成飞徐婷陈焕春金梅林华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 武汉科前生物股份有限公司武汉430070

试验旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的重组伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)。通过无缝克隆构建含有PRV TK基因同源臂和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的PRV通用转移载体pCAGIG-TK_((l+r)),参... 详细信息

试验旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的重组伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)。通过无缝克隆构建含有PRV TK基因同源臂和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的PRV通用转移载体pCAGIG-TK_((l+r)),参考China/2018/AnhuiXCGQ株基因序列,优化合成E183L基因,并连入通用转移载体,构建重组中间转移质粒pCAGIG-TK_((l+r))-p54;重组质粒ScaⅠ酶切线性化后经脂质体介导转染BHK-21细胞,6 h后感染0.1个感染复数(MOI)PRV变异株,出现病变后通过空斑挑选和PCR鉴定纯化重组PRV,进一步通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测外源蛋白表达,并对重组病毒的遗传稳定性和增殖特性进行研究。结果显示,转染重组质粒pCAGIG-TK_((l+r))-p54的BHK-21细胞24 h后可观察到绿色荧光,说明重组质粒成功转入BHK-21细胞;纯化后的重组病毒表达绿色荧光蛋白且含有ASFV E183L基因,Western blotting和IFA结果证实重组PRV在BHK-21细胞中能表达p54外源蛋白,在26 ku处呈现特异性条带,且能与ASFV阳性血清发生特异性反应,免疫原性较好;重组病毒在BHK-21细胞上连续传代20次均能检测到ASFV E183L基因,遗传稳定性较好;一步生长曲线显示,重组病毒与亲本病毒的增殖特性差异不大,且二者的最高病毒滴度分别为10^(7.34)/0.1 mL和10^(7.61)/0.1 mL,外源片段的插入不影响重组病毒在细胞上的增殖能力。本研究成功获得了表达ASFV p54蛋白的重组病毒rPRV-p54,为进一步研究p54蛋白的免疫原性及开发非洲猪瘟多基因重组PRV载体疫苗奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) 伪狂犬病病毒(PRV) p54蛋白

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