检索结果-内蒙古大学图书馆

2006年度学术研讨会

作者：罗艳梅周俊初农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

利用显微电镜技术比较观察了根瘤菌NGR234在大翼豆,白灰毛豆,扁豆,豇豆和大豆的结瘤情况和其根瘤类菌体的分化形态。并对大翼豆的根瘤类菌体的繁殖能力进行了研究。采用压碎根瘤汁微室培养的方法在显微镜下定点观察单一类菌体的生长、... 详细信息

利用显微电镜技术比较观察了根瘤菌NGR234在大翼豆,白灰毛豆,扁豆,豇豆和大豆的结瘤情况和其根瘤类菌体的分化形态。并对大翼豆的根瘤类菌体的繁殖能力进行了研究。采用压碎根瘤汁微室培养的方法在显微镜下定点观察单一类菌体的生长、繁殖能力。

关键词：类菌体大翼豆根瘤菌繁殖能力

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根癌农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系的研究

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分子植物育种 2006年第4期4卷 559-564页

作者：周盈林拥军柴鑫莉孙明华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室武汉430070

本研究以潮霉素抗性基因为选择标记,建立了根癌农杆菌介导的花魔芋(Amorphophalluskonjac)的遗传转化体系。同时探讨了魔芋愈伤组织的培养基、筛选剂和筛选时间等因素对转化效率的影响。通过筛选时间不同的两个转化试验,分别从300个花... 详细信息

本研究以潮霉素抗性基因为选择标记,建立了根癌农杆菌介导的花魔芋(Amorphophalluskonjac)的遗传转化体系。同时探讨了魔芋愈伤组织的培养基、筛选剂和筛选时间等因素对转化效率的影响。通过筛选时间不同的两个转化试验,分别从300个花魔芋愈伤组织中得到了16个和18个具有潮霉素抗性的愈伤组织,其抗性愈伤率为5.33%和6.00%。获得的抗性愈伤组织进一步在分化培养基上进行分化,其分化效率分别为31.2%和22.2%。移栽后,分别得到了39株和36株成活植株。PCR检测表明分别有26株和21株再生花魔芋出现了800bp的特异性扩增带型,其阳性率分别为66.7%和58.3%。随机挑取20个PCR阳性植株的DNA进行斑点杂交检测,结果表明外源基因已经整合到花魔芋的基因组中。

关键词：花魔芋根癌农杆菌遗传转化体系

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导入detABD和nifA基因对苜蓿中华根瘤菌共生固氮效率的影响

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湖北农业科学 2006年第5期45卷 538-541页

作者：宫世勇孙淑荣周俊初华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 吉林省农业科学院资源与环境研究中心吉林公主岭136100

将克隆有四碳二羧酸转移酶基因dctABD、nifA基因和发光酶基因luxAB的重组质粒pHN307经三亲本杂交分别导入苜蓿根瘤菌HNM1、HNM2、HNM4和1021中得到HNM1(pHN307)等4个转移接合子,进一步比较研究了pHN307在自生培养条件下传代的稳定性,并... 详细信息

将克隆有四碳二羧酸转移酶基因dctABD、nifA基因和发光酶基因luxAB的重组质粒pHN307经三亲本杂交分别导入苜蓿根瘤菌HNM1、HNM2、HNM4和1021中得到HNM1(pHN307)等4个转移接合子,进一步比较研究了pHN307在自生培养条件下传代的稳定性,并采用本室改进的双层钵无菌砂培盆栽法,分别将4个转移接合子和出发菌接种到苜蓿品种草原1号,公农1号和图牧2号。结果表明,只有用转移接合子HNM4(pHN307)和1021(pHN307)接种到草原1号和图牧2号的植株鲜重和干重明显优于出发菌。

关键词： dctA BD nifA luxAB 苜蓿中华根瘤菌共生固氮效率

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弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会

作者：江涛周艳琴刘琴聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

应用PCR技术从刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的基因组DNA中扩增编码ROP2 (rhpotry protein 2)的部分基因,构建pGEX-KG-ROP2重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转入***21CodonPlus中在IPTG诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果表明,扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99．9％,该基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达的ROP2融合蛋白表观分子量约为64 kd,可被兔抗弓形虫免疫血清识别。本研究为下一步利用重组蛋白研制弓形虫病的诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白ROP2 基因克隆原核表达

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弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达

弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组 DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入*** DH 5a感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴... 详细信息

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组 DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入*** DH 5a感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。然后阳性重组质粒转化入*** BL21Codonplus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定．结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列的同源性达99．6％,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 kd,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别。说明所获得的表达蛋白质具有一定的免疫反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗莫定基础。

关键词：龚地弓形虫微线体蛋白3 基因克隆表达

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径向基神经网络模型对苏云金素在水溶液中的非生物降解过程的模拟和预测

径向基神经网络模型对苏云金素在水溶液中的非生物降解过程的模拟...

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第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会

作者：陈守文周景文冀志霞喻子牛农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

本文系统研究了一系列条件下(pH自5.0到9.0,温度自10℃到40℃)苏云金素在水中的降解情况。在本研究的范围内,指数衰减模型计算出苏云金素在水溶液中的半衰期在2.72 d与16.19 d之间,表明苏云金素是一种易降解的抗生素。为了进一步精确说... 详细信息

本文系统研究了一系列条件下(pH自5.0到9.0,温度自10℃到40℃)苏云金素在水中的降解情况。在本研究的范围内,指数衰减模型计算出苏云金素在水溶液中的半衰期在2.72 d与16.19 d之间,表明苏云金素是一种易降解的抗生素。为了进一步精确说明苏云金素在不同的pH和温度条件下的稳定性,利用人工神经网络方法对降解过程进行描述。建立的精度为0.1和SPREAD值为5的径向基神经网络很好的模拟和预测了降解过程,模拟和预测的平均绝对误差分别在2.9μg/mL和1.4μg/mL范围内。

关键词：苏云金素苏云金芽胞杆菌降解人工神经网络

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细菌内同源重组法构建O型口蹄疫多基因重组腺病毒

细菌内同源重组法构建O型口蹄疫多基因重组腺病毒

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2006年度学术研讨会

作者：张克山吴斌姚清侠向敏徐卓菲钱平陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病实验室

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄兽的急性,烈性传染病,被国际兽医局列为一类传染病。它导致有口蹄疫爆发的地区和国家的畜产品进出口贸易停止,造成巨大的经济损失和政治影响,是一种典型的政治和经济... 详细信息

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄兽的急性,烈性传染病,被国际兽医局列为一类传染病。它导致有口蹄疫爆发的地区和国家的畜产品进出口贸易停止,造成巨大的经济损失和政治影响,是一种典型的政治和经济病。在口蹄疫的基因工程疫苗的研究过程中人们试图将结构蛋白基因P1和蛋白酶基因组合在一起,期望在免疫动物后在细胞内组装成病毒的空衣壳,模拟自然病毒表面的线性和非线性的抗原表位,刺激机体产生与自然病毒感染相近的免疫效果,国外这方面的研究有不少成功的报道。本研究利用细菌内同源重组的方法构建含有O型口蹄疫病毒 P1-2A-3C的多基因重组腺病毒。为口蹄疫重组腺病毒基因工程活载体疫苗的研究及其免疫效果的评价奠定基础。首先通过PCR的方法从阳性质粒PcDNAP1-2A-3C扩增到口蹄疫病毒P1-2A-3C基因,然后将其亚克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用多酶切图谱分析、PCR扩增及序列测定的方法证实口蹄疫病毒P1-2A-3C基因正确插入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,用Pmel酶将含有目的基因的穿梭载体线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化大肠杆菌BJ5183感受态菌,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒ADPSP1-2A-3C,经序列测定,PCR扩增,Pacl酶切鉴定等证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体;将鉴定正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌XL-10进行大量扩增,用Pacl酶线性化后转染HEK293细胞,并连续在HEK293细胞传10代次,对每一代次的细胞提取基因组后通过PCR的方法扩增口蹄疫病毒P1-2A-3C基因,同时设置正常HEK293细胞对照,结果证实重组腺病毒能够在HEK293细胞稳定遗传。在第8 代中提取HEK293细胞的总RNA用口蹄疫病毒P1-2A-3C特异性引物进行RT-PCR,结果表明目的基因能够表达,在第10代次HEK293细胞的间接免疫荧光也证实口蹄疫基因在 HEK293细胞中得到表达。本研究采用细菌内同源重组的方法构建口蹄疫多基因重组腺病毒,和传统的方法比较大大提高了重组效率,构建的重组病毒的动物试验正在进行中。

关键词：同源重组方法构建口蹄疫病毒重组腺病毒 HEK

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中国和美国原始土壤中非高温发现和鉴定

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生物多样性 2006年第3期14卷 181-187页

作者：樊昊心 Derek J. Fairley Christopher Rensing Ian L. Pepper 王革娇华中农业大学农业微生物学国家重点实验室 Queen’s University Environmental Science & Technology Research Centre (QUESTOR) The Queen’s University of Belfast Belfast BT9 5AG UK Department of Soil Water and Environmental Science The University of Arizona Tucson AZ 85721 USA

近年来在非极端环境中已经发现有古菌(Archaea)的存在, 但在中国原始土壤中还未见报道。本研究的目的是调查古菌是否存在于两个分别取自中国新疆和广西的土壤及两个美国亚利桑那州南部地区的土壤中。我们分别构建了这四个原始土壤的古菌... 详细信息

近年来在非极端环境中已经发现有古菌(Archaea)的存在, 但在中国原始土壤中还未见报道。本研究的目的是调查古菌是否存在于两个分别取自中国新疆和广西的土壤及两个美国亚利桑那州南部地区的土壤中。我们分别构建了这四个原始土壤的古菌16S rDNA文库并对28个克隆的16S rDNA进行了鉴定。所有这些16S rDNA的序列都归类于古菌的泉古菌门(Crenarchaeota)。进化树分析表明, 这些泉古菌的16S rDNA属于非高温陆地环境中的泉古菌种群, 明显区别于海洋和淡水地带的泉古菌种群。这个泉古菌种群又有两个分支, 这两个分支在16S rDNA序列上和G+C含量上有明显的区别。本研究在两个中国和两个美国原始土壤中鉴定了非高温泉古菌的存在, 由此证明泉古菌的存在范围不只局限于高温等极端环境。另外, 美国原始土壤中的泉古菌只属于一个进化分支, 这说明非高温泉古菌种群的类型和土壤的地理位置及土壤特性有关。

关键词： 16SrDNA 古菌非高温泉古菌免培养法原始土壤

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蓝细菌Anabaena *** PCC 7120中一种新型蛋白激酶信号转导途径的初步探索

蓝细菌Anabaena *** PCC 7120中一种新型蛋白激酶信号转导途径的...

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2006年全国博士生学术论坛——中国生物多样性分论坛

作者：程勇王莉陈雯莉张承才华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

蓝细菌Anabaena *** PCC 7120是一种丝状体革兰氏阴性细菌,该菌可以在缺乏化合态氮源的条件分化形成异形胞--行使生物固氮的功能，基因组数据分析表明该菌的基因组拥有13个新型的蛋白激酶编码基因。本文对其中的两个基因pkn41(alr07... 详细信息

蓝细菌Anabaena *** PCC 7120是一种丝状体革兰氏阴性细菌,该菌可以在缺乏化合态氮源的条件分化形成异形胞--行使生物固氮的功能，基因组数据分析表明该菌的基因组拥有13个新型的蛋白激酶编码基因。本文对其中的两个基因pkn41(alr0709)和pkn42(alr0710)的功能进行了研究。分别构建了pkn41和pkn42基因的插入失活单突变体和基因敲除双突遍体,测定了突变体细胞内铁的含量。结果表明，突变体细胞的色素含量低于野生型细胞，与突变体的表型分析结果相一致，表明pkn41和pkn42基因参与对nifJ和nifJ-like的调控。

关键词：丝状蓝细菌微生物鉴定蛋白激酶基因表达

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猪乙脑病毒HW株的全基因组克隆及分析

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华中农业大学学报 2006年第2期25卷 117-119页

作者：付文鹏陈建军岳桂平熊东海徐涤平杨在清华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北出入境检验检疫局武汉430022 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064

流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis virus,JEV）是一种中枢系统人畜共患急性传染病，由蚊为媒介传播，以高热和狂暴或沉郁等神经症状为特征，猪患乙型脑炎的主要症状表现为怀孕母猪流产，产死胎或弱仔，公猪则患睾丸炎，仔猪呈神... 详细信息

流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis virus,JEV）是一种中枢系统人畜共患急性传染病，由蚊为媒介传播，以高热和狂暴或沉郁等神经症状为特征，猪患乙型脑炎的主要症状表现为怀孕母猪流产，产死胎或弱仔，公猪则患睾丸炎，仔猪呈神经症状，使养猪业遭受巨大损失。[第一段]

关键词：日本乙型脑炎病毒全基因组克隆

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