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第十届全国土壤微生物学术讨论会暨第三届全国微生物肥料生产技术研讨会

作者：丑敏霞陈大松李友国周俊初农业微生物学国家重点实验室华中农业大学武汉430070

本文论述了通过抑制差减杂交,比较了紫云英接种根与不接种根在转录水平上的差异,建立了紫云英共生结瘤过程中的差异表达基因文库.利用斑点杂交对文库进行了初步筛选,选取在接种根中的杂交信号强度高于不接种根至少3倍的克隆进行测序分析.

关键词：紫云英共生固氮结瘤素基因土壤微生物

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华癸中生根瘤菌内源质粒不相容性研究

华癸中生根瘤菌内源质粒不相容性研究

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2006年度学术研讨会

作者：胡国元李友国周俊初化工与制药学院武汉工程大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

从紫云英根瘤分离到华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)HN308和HN3015, 植物回接实验证明均能在紫云英上形成有效根瘤。内源质粒检测发现HN308含有3个内源大质粒(150kb的pMhHN308a,294kb的pMhHN308b和428kb的pMhHN308c), HN3015也含... 详细信息

关键词：华癸中生根瘤菌内源质粒共生质粒不相容性

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猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ基因的克隆、表达及其免疫原性

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农业生物技术学报 2006年第4期14卷 493-497页

作者：严克霞刘建杰吴斌汤细彪蔡利军杨明柳陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室武汉430070 海口农工贸(罗牛山)股份有限公司海口570125

以本实验室分离的猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型(Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2,APP-2)菌株HB08的基因组为模板,扩增了2871 bp的APP毒素Ⅱ的结构基因apxⅡA,并克隆到pET-28a原核表达载体中构建重组表达质粒pET28aⅡA,转化到... 详细信息

以本实验室分离的猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型(Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2,APP-2)菌株HB08的基因组为模板,扩增了2871 bp的APP毒素Ⅱ的结构基因apxⅡA,并克隆到pET-28a原核表达载体中构建重组表达质粒pET28aⅡA,转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经SDS-PAGE和Westernblot分析表明,表达的重组蛋白具有良好的反应活性.将表达的蛋白经或不经复性处理,与纯化的天然毒素Ⅱ分别免疫昆明小鼠,同时设PBS空白对照组,每组12只,间隔2周免疫2次,采血检测其抗体效价,二免后2周用致死剂量的APP血清7型(APP-7)菌株(1.08× 108CFU(菌落形成单位,colony form unit)/只)腹腔攻击.结果显示,复性蛋白组的保护率为83.3%,非复性蛋白组的保护率为58.3%,天然毒素蛋白对照组保护率为91.7%,空白对照组小鼠全部死亡,说明复性的重组毒素Ⅱ具有良好的免疫原性.

关键词：胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ 克隆原核表达免疫原性

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免疫佐剂-疫苗研究新亮点

免疫佐剂-疫苗研究新亮点

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：乐敏陈焕春华中农业大学动物医学院动物病毒室农业微生物学国家重点实验室

二战至上世纪末,随着科学技术的长足发展,特别是天花、脊髓灰质炎、麻风病等传染病被根除或得到有效控制之后,人们曾一度欣喜的认为人类最后战胜瘟疫已为期不远。但近些年SARS等新发疫病不断出现,结核病等老式疫病又卷土重来,持续传播... 详细信息

二战至上世纪末,随着科学技术的长足发展,特别是天花、脊髓灰质炎、麻风病等传染病被根除或得到有效控制之后,人们曾一度欣喜的认为人类最后战胜瘟疫已为期不远。但近些年SARS等新发疫病不断出现,结核病等老式疫病又卷土重来,持续传播的耐药性菌株的不断出现,这些疫病有时甚至在一定区域内重新得到大规模传播。现阶段一直潜在的最大威胁是禽流感,流感病毒高度变异快速进化过程中不断突破种间屏障,使得它将在相当长一段时间内一直威胁我们!另外,近些年国际恐怖主义势力有所抬头,一些极端国家仍在潜心研制生物武器,这些是导致现阶段复杂形式条件下对新型高效安全疫苗的迫切需要。本文首先对传统疫苗存在的问题进行分析,结合现阶段免疫学最新研究进展为背景,以免疫学的"地理效应"假说和"危险信号"假说为切入点分析了疫苗研究发展的方向,指出免疫佐剂的研究与开发是新型疫苗研究的重要突破口,并将在改进已有疫苗和发展新型疫苗中起着越来越重要的作用。同时也指出疫苗佐剂的研究也是免疫学基础研究的一个很重要的途径。细胞因子佐剂,霍乱毒素佐剂,不耐热肠毒素突变体等类PAMPs佐剂,中药佐剂,热激蛋白佐剂等疫苗佐剂的研究及应用必然导致一批新型疫苗和改进型疫苗的不断出现,并将在AIDS、登革热、结核病、疟疾等疾病的疫苗研究中发挥重要作用。

关键词：免疫佐剂新型疫苗疫苗研究新亮点

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苏云金芽胞杆菌幕虫亚种晶胞粘连现象与晶体蛋白基因cry26Aa所在质粒有关

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种晶胞粘连现象与晶体蛋白基因cry26Aa所在...

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2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：鞠守勇纪芳张睿喻子牛孙明华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种T02菌株的伴胞晶体在芽胞外壁内侧形成,呈现晶胞粘连的现象。本研究克隆了cry26Aa和cry28Aa两个基因,并对晶胞粘连现象与质粒的相关性做了系统研究。通过消除幕虫亚种T02菌株的质粒,得到了仅消除cry26Aa所在质粒... 详细信息

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种T02菌株的伴胞晶体在芽胞外壁内侧形成,呈现晶胞粘连的现象。本研究克隆了cry26Aa和cry28Aa两个基因,并对晶胞粘连现象与质粒的相关性做了系统研究。通过消除幕虫亚种T02菌株的质粒,得到了仅消除cry26Aa所在质粒的菌株 BMB1151和无质粒的菌株BMB1152。通过穿梭载体将ery26Aa和cry28Aa两个基因分别和同时转化无质粒突变株BMB1152并表达,形成的晶体与芽胞独立存在不能粘连,表明在幕

关键词： cry26Aa 晶体蛋白

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拟南芥中一种新型RNA结合蛋白(PhrIP1)的功能研究

拟南芥中一种新型RNA结合蛋白(PhrIP1)的功能研究

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2006年全国博士生学术论坛——中国生物多样性分论坛

作者：马立安张忠明华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 长江大学生命科学学院荆州434025 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

成膜索相关蛋白(PhrIP1)是含有2个RNA结合位点的RNA结合蛋白,在植物细胞分裂后期细胞板的形成过程中起重要作用。本研究应用亲和吸附法筛选拟南芥总RNA,经测定OD260和RT-PCR鉴定,蛋白质-核酸紫外交联和RNA凝胶滞后试验,证实GST-PhrIP1... 详细信息

成膜索相关蛋白(PhrIP1)是含有2个RNA结合位点的RNA结合蛋白,在植物细胞分裂后期细胞板的形成过程中起重要作用。本研究应用亲和吸附法筛选拟南芥总RNA,经测定OD260和RT-PCR鉴定,蛋白质-核酸紫外交联和RNA凝胶滞后试验,证实GST-PhrIP1融合蛋白是否特异结合某种mRNA。结果显示,GST-PhrIP1融合蛋白能结合RNA,并证实PhrIP1特异性结合Ran2-mRNA,这一结果提示Ran2在细胞板形成中可能发挥重要作用。

关键词：植物细胞细胞分裂融合蛋白基因表达

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利用苏云金芽胞杆菌细胞表面展示系统表达禽流感病毒NP蛋白

利用苏云金芽胞杆菌细胞表面展示系统表达禽流感病毒NP蛋白

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：刘梅胡思顺李淑云赵昌明孙明毕丁仁华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统研究在细胞表面展示禽流感病毒NP蛋白的可行性和最佳方案,为研制既安全有效又能常温长期保藏和运输的禽类口服基因工程疫苗奠定基础.用全长np基因或部分np基因(npp)代替S-层蛋白ctc基因的中部... 详细信息

利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统研究在细胞表面展示禽流感病毒NP蛋白的可行性和最佳方案,为研制既安全有效又能常温长期保藏和运输的禽类口服基因工程疫苗奠定基础.用全长np基因或部分np基因(npp)代替S-层蛋白ctc基因的中部或C-端,构建了4个融合基因;利用电脉冲转化法将含融合基因的重组质粒转入苏云金芽胞杆菌受体菌BMB171菌株中,获得了5个重组菌株:BN(含ctc-np)、BCN(含ctc-np和csaAB操纵子质粒)、C-S(含csa-ctc-np)、BCCN(含ctc-npp和csaAB操纵子质粒)和CN(含csa-ctc-npp).通过玻片凝集试验和小鼠免疫学实验证实,5个重组菌株均成功地在细胞表面展示了NP蛋白并具有免疫学活性,其中,重组菌株CN表现出了最高免疫学活性,其含融合基因csa-ctc-npp,证明这种融合基因的构建方式是最佳方式,这为利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统构建包含其它病原体抗原基因的重组菌株并制备成禽用口服疫苗奠定了基础.

关键词：芽胞杆菌禽流感病毒口服疫苗 NP蛋白免疫学活性 S-层蛋白细胞表面展示

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温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会

作者：李树清杜凯胡永强陈声国陈志飞周艳琴赵俊龙上海出入境检验检疫局华中农业大学农业微生物学国家重点实验室上海出入境检验检疫局华中农业大学农业微生物学国家重点实验室上海出入境检验检疫局华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据本实验室已测得的温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(Genbank登陆号为AY946266),设计一对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法．特异性试验和敏感性试验表明,此诊断方法... 详细信息

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据本实验室已测得的温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(Genbank登陆号为AY946266),设计一对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法．特异性试验和敏感性试验表明,此诊断方法只能特异性地扩增温氏附红细胞体的16S rRNA基因序列的特异性片段．检测温氏附红细胞体最低DNA量为1．78fg．利用该方法对湖北省牛温氏附红细胞体感染情况进行了流行病学调查,结果显示阳性感染率为10．3％,说明温氏附红细胞体在湖北省感染率较高、流行较广。

关键词：沮氏附红细胞体 PCR 16S rRNA 应用

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温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用

温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：李树清杜凯赵俊龙胡永强王巧全姚宝安上海出入境检验检疫局华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室上海出入境检验检疫局上海出入境检验检疫局华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(Genbank登陆号为AY946266),设计一对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验表明,此诊断方法与猪附红细胞体、东方巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、边缘边... 详细信息

根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(Genbank登陆号为AY946266),设计一对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验表明,此诊断方法与猪附红细胞体、东方巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、边缘边虫、弓形虫无交叉反应,能检测温氏附红细胞体最低 DNA量为1．7Sfg．用此PCR方法检测湖北某实验动物场黄牛阳性率为53．8％、湖北某奶牛场奶牛阳性率为 11．4％、苏州某奶牛场奶牛阳性率为90%、进口新西兰奶牛血样60份全为阴性．

关键词：温氏附红细胞体 PCR 检测

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AHL内酯酶在蜡状芽胞杆菌中可增强ZwA抗软腐病作用

AHL内酯酶在蜡状芽胞杆菌中可增强ZwA抗软腐病作用

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2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：曾慧喻子牛孙明华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室

双效菌素(Zwittermicin A,ZwA)是一种广谱、新型的抗生素,对很多植物病原菌具有抑制作用;酰基高丝氨酸内酯酶(AHL内酯酶)通过降解植物病原菌群体感应(Quorum-Sensing) 系统的信号分子,减弱致病基因的表达从而达到抗病的效果。结合这两... 详细信息

双效菌素(Zwittermicin A,ZwA)是一种广谱、新型的抗生素,对很多植物病原菌具有抑制作用;酰基高丝氨酸内酯酶(AHL内酯酶)通过降解植物病原菌群体感应(Quorum-Sensing) 系统的信号分子,减弱致病基因的表达从而达到抗病的效果。结合这两种物质的不同抗病机

关键词： AHL 内酯酶 ZwA

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