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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：张安定金梅林刘芳芳郭学波陈剑峰陈焕春邱立新刘道新邱伯根华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖南省兽医总站长沙410000

本研究使用抗禽流感病毒NP蛋白的单抗作为包被抗体,纯化的兔抗AIV-NP作为一抗,羊抗兔IgG-HRP作为二抗,建立了检测禽流感病毒的双夹心ELISA方法.样品使用Triton X-100处理后最低检测量可达2.5ng.15个HA亚型(H1-15)的禽流感病毒使用此方... 详细信息

本研究使用抗禽流感病毒NP蛋白的单抗作为包被抗体,纯化的兔抗AIV-NP作为一抗,羊抗兔IgG-HRP作为二抗,建立了检测禽流感病毒的双夹心ELISA方法.样品使用Triton X-100处理后最低检测量可达2.5ng.15个HA亚型(H1-15)的禽流感病毒使用此方法检测均为阳性,而其他一些禽病病原检测为阴性.与鸡胚分离同时检测805份鸡的组织样品,两者符合率达到了98.6％.使用本方法与我国市场上使用的禽流感快速诊断试纸条(韩国安捷公司)在湖南省兽医总站同时检测了83份病料,符合率达到了96.4％.本方法具有较好的特异性,较高的敏感性,适合作为通用地检测禽流感病毒的有力工具.

关键词：禽流感病毒 ELISA检测 NP蛋白

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禽流感病毒ELISA检测方法的建立和初步应用

禽流感病毒ELISA检测方法的建立和初步应用

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：张安定金梅林刘芳芳郭学波陈剑峰陈焕春邱立新刘道新邱伯根华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖南省兽医总站

使用抗禽流感病毒NP蛋白的单抗作为包被抗体,纯化的兔抗AIV-NP作为一抗,羊抗兔IgG-HRP作为二抗,建立了检测禽流感病毒的双夹心ELISA方法。样品使用Triton X-100处理后最低检测量可达2.5ng。15个HA亚型(H1-15)的禽流感病毒使用此方法检...

使用抗禽流感病毒NP蛋白的单抗作为包被抗体,纯化的兔抗AIV-NP作为一抗,羊抗兔IgG-HRP作为二抗,建立了检测禽流感病毒的双夹心ELISA方法。样品使用Triton X-100处理后最低检测量可达2.5ng。15个HA亚型(H1-15)的禽流感病毒使用此方法检测均为阳性,而其他一些禽病病原检测为阴性。与鸡胚分离同时检测805份鸡的组织样品,两者符合率达到了98.6%。使用本方法与我国市场上使用的禽流感快速诊断试纸条(韩国安捷公司)在湖南省兽医总站同时检测了83份病料,符合率达到了96.4%。本方法具有较好的特异性,较高的敏感性,适合作为通用地检测禽流感病毒的有力工具。

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H5亚型禽流感病毒免疫胶体金快速检测方法的建立

H5亚型禽流感病毒免疫胶体金快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：陈剑锋金梅林杨俊兴但汉并张安定陈焕春邱伯根刘道新邱立新华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖南省兽医总站

本试验建立了一种H5亚型禽流感病毒免疫胶体金快速检测方法。制备并获得7株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体(腹水HI效价2-2)和兔抗H5N1亚型禽流感病毒多克隆抗体(血清HI效价2)。用40nm胶体金标记抗H5亚型禽流感病毒混合单克隆抗...

本试验建立了一种H5亚型禽流感病毒免疫胶体金快速检测方法。制备并获得7株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体(腹水HI效价2-2)和兔抗H5N1亚型禽流感病毒多克隆抗体(血清HI效价2)。用40nm胶体金标记抗H5亚型禽流感病毒混合单克隆抗体,经梯度离心和SephadexG200过柱纯化后包被玻璃纤维。同时在硝酸纤维膜（NCM）上分别包被抗H5亚型禽流感病毒多克隆抗体和羊抗鼠二抗,依据胶体金免疫层析的原理构建了H5亚型禽流感病毒检测试纸条。该试纸条对1:256倍稀释的禽流感H5 Hl抗原检测仍为阳性,比进口同类产品敏感性高8-16倍,同时与禽流感H7 Hl抗原、H9 HI抗原、H4N6、H3N2、H1N1亚型禽流感病毒均不反应,与新城疫病毒（NDV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）、传染性支气管炎病毒（52、120株）、鸡减蛋综合征病毒（EDSV-76）、禽副粘病毒2型（PMV-2）、SPF鸡胚尿囊液均不反应,达到了较好的的特异性和敏感性。该试纸条在37℃放置12天,在4℃放置1年,其敏感性、特异性不发生变化。结果表明H5亚型禽流感病毒免疫胶体金快速检测方法具有简便、准确、灵敏度高等优点,适于流感病毒的早期快速诊断。

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禽流感病毒快速乳胶凝集检测方法的建立及其初步应用

禽流感病毒快速乳胶凝集检测方法的建立及其初步应用

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：陈剑锋金梅林喻正军但汉并张安定陈焕春邱伯根刘道新邱立新华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖南省兽医总站

本研究以水溶性碳化二亚胺(EDAC)为介质,将兔抗禽流感病毒NP蛋白抗体共价偶联到羧化乳胶表面,建立了一种快速的禽流感病毒乳胶凝集检测方法,可以从鸡胚尿囊液、喉头拭子、泄殖腔拭子和内脏组织中快速检测所有亚型的禽流感病毒。该方法...

本研究以水溶性碳化二亚胺(EDAC)为介质,将兔抗禽流感病毒NP蛋白抗体共价偶联到羧化乳胶表面,建立了一种快速的禽流感病毒乳胶凝集检测方法,可以从鸡胚尿囊液、喉头拭子、泄殖腔拭子和内脏组织中快速检测所有亚型的禽流感病毒。该方法对肺脏组织的检出率可达97.9%,对肾脏、脑、肝脏、脾脏等组织的检出率均达到90%以上,对喉头拭子和泄殖腔拭子的检出率也达到60%以上,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(52、120株)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV-76)、禽副粘病毒2型(PMV-2)均不反应,达到了较好的的特异性和敏感性。该方法与病毒分离鉴定的符合率为94.2%,与胶体金试纸条的符合率为96.7%。结果证明建立的乳胶凝集检测方法具有快速简便,成本低廉,敏感特异的特点,可用于临床大规模的流行病学调查。

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苏云金芽胞杆菌基因工程菌的构建和开发

苏云金芽胞杆菌基因工程菌的构建和开发

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第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议

作者：孙明喻子牛陈守文刘子铎李林微生物农药国家工程研究中心农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院微生物农药国家工程研究中心农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院微生物农药国家工程研究中心农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院微生物农药国家工程研究中心农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院微生物农药国家工程研究中心农业微生物学国家重点实验室华中农业大学生命科学技术学院

通过筛选具有高毒力的或具有不同杀虫活性谱的特异性菌株,并通过克隆其杀虫晶体蛋白基因和抗病蛋白基因,通过多种技术途径,构建了多种具有不同性质的工程菌,并进行了其应用性能方面的研究。从本室分离保藏的1800余株的苏云金芽胞杆菌的... 详细信息

通过筛选具有高毒力的或具有不同杀虫活性谱的特异性菌株,并通过克隆其杀虫晶体蛋白基因和抗病蛋白基因,通过多种技术途径,构建了多种具有不同性质的工程菌,并进行了其应用性能方面的研究。从本室分离保藏的1800余株的苏云金芽胞杆菌的菌株中,筛选到8株对鳞翅目、双翅目和鞘翅目等不同害虫的特异性高度力菌株。从中克隆到多个杀虫晶体蛋白基因,辅助蛋白基因,抗病蛋

关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白载体工程菌转基因安全

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用Tn5-mob-sacB转座子对华癸中生根瘤菌HN3015质粒进行定向标记、消除或缺失

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化学与生物工程 2006年第7期23卷 33-36页

作者：胡国元李伟伟周俊初华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 武汉工程大学化工与制药学院湖北武汉430073

采用Tn5-mob-sacB转座子对Mesorhizobium huakuiiHN3015菌株含有的3条大质粒(pMhHN3015a,150kb;pMhHN3015b,294 kb和pMhHN3015c,390 kb)进行定向标记,获得各个质粒标记菌株。利用sacB基因对蔗糖的敏感性,对标记质粒进行消除实验,获得HN3015质粒消除或缺失的突变株。并对HN3015及其突变菌株的培养特征、生长速度和共生结瘤能力进行了研究,结果表明:质粒消除或缺失的突变株的培养特征和生长速度与出发菌株基本一致,但是,pMhHN3015a与固氮有关,pMhHN3015b消除的菌株则失去结瘤能力,只有pMhHN3015c消除或缺失菌株不影响结瘤与固氮能力。

关键词：华癸中生根瘤菌 Tn5-sacB 质拉标记消除缺失

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安琪培养基型酵母抽提物在嗜酸乳杆菌发酵中的应用

安琪培养基型酵母抽提物在嗜酸乳杆菌发酵中的应用

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2006中国酶制剂及生物催化产品技术开发与产业化会议

作者：李沛李库唐冠群赵述淼梁运祥安琪酵母股份有限公司 443003 华中农业大学生科院农业微生物学国家重点实验室430070

本文将安琪酵母抽提物作为主要氮源物质用于嗜酸乳杆菌L17的发酵生产,嗜酸乳杆菌L17在设计培养基上生长良好,能够较好的利用安琪酵母抽提物作为氮源物质进行菌体生长,并达到了较高的浓度。

关键词：微生态制剂酸乳杆菌酵母培养

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中国和美国原始土壤中非高温泉古菌的发现和鉴定

中国和美国原始土壤中非高温泉古菌的发现和鉴定

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首届全国微生物基因组学学术研讨会

作者：樊昊心王革娇 DJ Fairley C Rensing IL Pepper 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室 QUESTOR The Queen’s University of Belfast Belfast BT9 5AG UK Department of Soil Water and Environmental Science The University of Arizona Tucson AZ 85721 USA Department of Soil Water and Environmental Science The University of Arizona Tucson AZ 85721 USA

近年来在非极端环境中已经发现有古菌(Archaea)的存在,但在中国原始土壤中还未见报道。本研究的目的是调查古菌是否存在于两个分别来自中国新疆和广西的土壤及两个美国亚利桑那州南部地区的土壤中。我们分别构建了这四个原始土壤的古菌1... 详细信息

近年来在非极端环境中已经发现有古菌(Archaea)的存在,但在中国原始土壤中还未见报道。本研究的目的是调查古菌是否存在于两个分别来自中国新疆和广西的土壤及两个美国亚利桑那州南部地区的土壤中。我们分别构建了这四个原始土壤的古菌16S rDNA文库并对28个克隆的16S rDNA进行了鉴定。所有这些16S rDNA的序列都归类于古菌的泉古菌门(Crenarchaeota)。进化树分析表明,这些泉古菌的16S rDNA属于非高温陆地环境中的泉古菌种群,明显区别于海洋和淡水地带的泉古菌种群。这个泉古菌种群又有两个分支,这两个分支在16S rDNA 序列上和G+C含量上有明显的区别。本研究在两个中国和两个美国原始土壤中鉴定了非高温泉古菌的存在,由此证明泉古菌的存在范围不只局限于高温等极端环境。另外,美国原始土壤中的泉古菌只属于一个进化分支,这说明非高温泉古菌种群的类型和土壤的地理位置及土壤特性有关。

关键词：泉古菌原始土壤

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禽流感病毒快速乳胶凝集检测方法的建立及其初步应用

禽流感病毒快速乳胶凝集检测方法的建立及其初步应用

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：陈剑锋金梅林喻正军但汉并张安定陈焕春邱伯根刘道新邱立新华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖南省兽医总站长沙410000

本研究以水溶性碳化二亚胺(EDAC)为介质,将兔抗禽流感病毒NP蛋白抗体共价偶联到羧化乳胶表面,建立了一种快速的禽流感病毒乳胶凝集检测方法,可以从鸡胚尿囊液、喉头拭子、泄殖腔拭子和内脏组织中快速检测所有亚型的禽流感病毒.该方法对... 详细信息

本研究以水溶性碳化二亚胺(EDAC)为介质,将兔抗禽流感病毒NP蛋白抗体共价偶联到羧化乳胶表面,建立了一种快速的禽流感病毒乳胶凝集检测方法,可以从鸡胚尿囊液、喉头拭子、泄殖腔拭子和内脏组织中快速检测所有亚型的禽流感病毒.该方法对肺脏组织的检出率可达97.9％,对肾脏、脑、肝脏、脾脏等组织的检出率均达到90％以上,对喉头拭子和泄殖腔拭子的检出率也达到60％以上,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(52、120株)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV-76)、禽副粘病毒2型(PMV-2)均不反应,达到了较好的的特异性和敏感性.该方法与病毒分离鉴定的符合率为94.2％,与胶体金试纸条的符合率为96.7％.结果证明建立的乳胶凝集检测方法具有快速简便,成本低廉,敏感特异的特点,可用于临床大规模的流行病学调查.

关键词：禽流感病毒乳胶凝集检测水溶性碳化二亚胺

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γ-聚谷氨酸的研究进展

γ-聚谷氨酸的研究进展

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第一届全国农业生物资源与环境调控学术研讨会

作者：陈守文徐虹陈雄徐建喻子牛农业微生物学国家重点实验室华中农业大学武汉430070 制药与生命科学技术学院南京工业大学南京210009

当今石油资源日益枯竭,有害化学制品过度使用,带给我们许多严重的能源问题和环境问题,为了解决这一关系到人类生存的重大问题,保持人与环境的可持续发展,发展生物可降解高分子材料来部分代替石油制品逐渐成为人们关注的热点之一.生物可... 详细信息

当今石油资源日益枯竭,有害化学制品过度使用,带给我们许多严重的能源问题和环境问题,为了解决这一关系到人类生存的重大问题,保持人与环境的可持续发展,发展生物可降解高分子材料来部分代替石油制品逐渐成为人们关注的热点之一.生物可降解材料来源广泛,对减轻环境污染和缓解能源危机有着十分重要的意义.一种多聚氨基酸类的环保型多功能生物可降解高分子材料--γ-聚谷氨酸越来越受到人们的关注.γ-聚谷氨酸是自然界中微生物发酵产生的阴离子型多聚氨基酸,由D型和L型谷氨酸通过α-氨基和γ-羧基以肽键形式形成的高分子聚合物,相对分子质量一般在100～10 000 kD.γ-聚谷氨酸及其衍生物具有良好的水溶性,超强的吸附性,能彻底被生物降解,无毒无害,可以食用等性质,可作为诸如保水剂、增稠剂、絮凝剂、重金属吸附剂、药物/肥料缓释剂及药物载体等的原料,在农业、食品、医药、化妆品,环保,合成纤维和涂膜等领域具有广阔的应用前景.本文分别从γ-聚谷氨酸的有关系列领域的国内外研究进展进行系统介绍:γ-聚谷氨酸的结构和理化性质,γ-聚谷氨酸的合成微生物及相关基因和酶,γ-聚谷氨酸的发酵生产技术,以及γ-聚谷氨酸的应用.

关键词： γ-聚谷氨酸微生物发酵生物可降解高分子材料结构性能

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