检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2025年第1期41卷 252-262页

作者：刘克寒杨升辉黄巧云崔文靖中化环境控股有限公司北京100071 济宁岚德生物科技有限公司济宁272000 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 绿氮生物科技有限公司北京100094

【目的】黑龙江是我国大豆的主产区,有着丰富的大豆根瘤菌资源,针对该区域筛选优质抗逆大豆根瘤菌及根际促共生菌株对于大豆的提质增产至关重要。【方法】从黑龙江采集根瘤、根际土分离纯化大豆根瘤菌、根际菌,通过rpoB、16S rRNA基因... 详细信息

【目的】黑龙江是我国大豆的主产区,有着丰富的大豆根瘤菌资源,针对该区域筛选优质抗逆大豆根瘤菌及根际促共生菌株对于大豆的提质增产至关重要。【方法】从黑龙江采集根瘤、根际土分离纯化大豆根瘤菌、根际菌,通过rpoB、16S rRNA基因测序进行种属鉴定。在试管培养条件下进行根瘤菌菌株对盐胁迫(1.2%NaCl)、干旱胁迫(15%PEG6000)的耐受性评价。胁迫耐受根瘤菌菌株接种到黑河43,筛选高效共生菌株。代表性根瘤菌菌株及其根际促共生菌株混合菌接种到黑河43,获得高效共生根瘤菌及促共生显著的菌株。【结果】(1)分离获得大豆根瘤菌136株,其中129株慢生型根瘤菌(分属于Bradyrhizobium elkanii、***、B. diazoefficiens、B. yuanmingense、B. liaoningense);7株快生型根瘤菌(分属于Sinorhizobium fredii、Sinorhizobium sp.)。(2)分离获得拮抗大豆根腐病病原菌(镰刀菌)的菌株6株(B1-B6,分属于Bacillus velezensis、B. subtilis、B. licheniformis、***、B. megaterium),其中有4株(B1、B2、B4、B5)具有产IAA的能力。(3)获得耐盐或耐旱代表性大豆根瘤菌28株,其中有两株大豆根瘤菌B. japonicum GN1、B. diazoefficiens GN10对盐胁迫、干旱胁迫均具有较好抗性,并且通过共生表型的筛选确定GN10是代表菌株中最为高效的大豆根瘤菌。(4)混合接种大豆表型结果表明,B. velezensis B4相比于其余5株芽胞杆菌可以显著提升*** GN10的共生表现。【结论】成功获得耐盐、耐旱且共生效率高的慢生大豆根瘤菌1株,同时获得对共生表现促进效果显著的贝莱斯芽胞杆菌1株,为高效复合根瘤菌菌剂的开发及应用提供有力支撑。

关键词：大豆根瘤菌胁迫耐受高效共生根际促生菌共接种

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猪弓形虫病阻断ELISA方法的建立及初步应用

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中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 79-87页

作者：潘珂张静莫心宇申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究利用制备的GRA7单克隆抗体为基础建立猪弓形虫病的阻断ELISA方法。以rGRA7重组蛋白免疫小鼠,取脾细胞进行细胞融合,筛选出4株能够稳定产生单克隆抗体的阳性单克隆细胞株。经对此单克隆抗体进行IFA和Western blot检测确认成功制备G... 详细信息

本研究利用制备的GRA7单克隆抗体为基础建立猪弓形虫病的阻断ELISA方法。以rGRA7重组蛋白免疫小鼠,取脾细胞进行细胞融合,筛选出4株能够稳定产生单克隆抗体的阳性单克隆细胞株。经对此单克隆抗体进行IFA和Western blot检测确认成功制备GRA7蛋白的单克隆抗体后,以重组蛋白为包被抗原对阻断ELISA方法进行优化后,经过重复性、交叉性、符合性实验验证本方法具有可重复性,与MAT符合性高。初步应用于288份临床样品检测,检出率为11.46%,与MAT检测结果重合率为84.8%。本研究成功制备弓形虫GRA7蛋白的单克隆抗体,并建立了一种猪弓形虫病的阻断ELISA方法,为弓形虫病的检测提出了新的方案。

关键词：弓形虫 GRA7蛋白单克隆抗体阻断ELISA

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基于16S rDNA高通量测序技术分析受水灾影响猪场水样的菌群特征

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2092-2100页

作者：洪勃孙琪李栋凡于学祥库旭钢何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括1... 详细信息

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括19份猪饮用水、22份场内积雨水和7份废弃污水,采用菌落计数和高通量测序技术,对样品的细菌总数和菌群丰度进行分析研究,同时对采集的水样开展消毒剂杀菌试验。结果发现:饮用水、积雨水和污水中的平均含菌量分别为1.55×10^(5)、1.88×10^(8)和3.70×10^(9)CFU·mL^(-1),其中污水中的细菌总数最多,其次为积雨水,饮用水中的细菌总数最少,但远超国家饮用水的安全标准。本研究在不同种类的水样中均检测到了链球菌属、埃希氏杆菌属、弓形杆菌属、不动杆菌属和假单胞菌属等潜在的致病菌属,以及嗜低温弓形杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和豚鼠气单胞菌等致病菌。杀菌试验显示,氯制剂终浓度达到2500mg·L^(-1),作用30 min即可杀灭积雨水和污水中所有的细菌。本研究发现,水灾后养猪场内的水样中含有多种致病菌,规模化猪场可选用含氯消毒剂对场内污染的水体进行消杀,以确保人和猪群的健康安全。

关键词： 16S rDNA 猪场洪水细菌

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粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶基因的克隆、表达及定位分析

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 98-105页

作者：张碧瀛单嘉男覃裴溪周涛勋周焕胡敏华中农业大学、动物医学院、农业微生物学国家重点实验室武汉湖北430070

虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶,研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少,研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和... 详细信息

虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶,研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少,研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和表达分析,为进一步研究其功能奠定基础。利用生物信息学方法对Ss-ast-1基因进行序列分析,通过转录组数据分析Ss-ast-1在各个发育阶段的转录水平,转基因技术进行虫体内表达定位分析。通过体外原核表达重组蛋白,Western blot分析其抗原性。采用免疫荧光组织化学方法对Ss-AST-1在粪类圆线虫幼虫体内的定位进行研究。结果显示:Ss-ast-1基因全长1905 bp,编码634个氨基酸;转录组分析该基因在iL3期的表达水平最高。定位分析表明该蛋白在虫卵细胞的细胞核和细胞质均有表达;体外表达重组蛋白的大小约67.5 kDa,Western blot分析表明多克隆抗体可以较好的识别全虫蛋白中的Ss-AST-1。免疫荧光结果显示Ss-AST-1在幼虫体内表达并分布幼虫的头部和体壁。Ss-ast-1属于虾青素金属蛋白酶家族,其可能在寄生虫入侵过程中发挥作用,为进一步探究粪类圆线虫蛋白功能奠定了良好的基础。

关键词：粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶原核表达显微注射

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母猪卵泡发育质量的营养调控研究进展

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动物营养学报 2022年第10期34卷 6334-6342页

作者：徐保阳秦文峡晏向华华中农业大学动物科学技术学院农业微生物学国家重点实验室湖北洪山实验室武汉430070

卵泡发育质量是决定哺乳动物繁殖性能的关键因素之一。营养物质可直接或间接通过中间代谢产物影响哺乳动物卵泡发育质量。本文总结了母猪卵泡发育过程及其营养调控方法的研究进展,结合肠道微生物在这一过程中的作用,综述了“营养物质-... 详细信息

卵泡发育质量是决定哺乳动物繁殖性能的关键因素之一。营养物质可直接或间接通过中间代谢产物影响哺乳动物卵泡发育质量。本文总结了母猪卵泡发育过程及其营养调控方法的研究进展,结合肠道微生物在这一过程中的作用,综述了“营养物质-肠道微生物-卵巢轴”的可能作用机制,为通过营养措施靶向调控肠道微生物而改善母猪卵泡发育提供资料与参考。

关键词：母猪卵泡发育质量营养物质肠道微生物

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时间分辨荧光免疫分析的研究进展

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中国兽医科学 2023年第4期53卷 520-525页

作者：赵天睿雷镒妃许灏钧张峻豪匡磊严蕊郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)是一种利用稀土元素荧光特性为基础的检测方法。稀土元素的荧光寿命长且不易被其他荧光影响,使TRFIA具有灵敏度高、特异性强、稳定性好的特点,并在诊断检测领域广泛应用。阐述了TRFIA的原理,并围绕其材料、... 详细信息

时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)是一种利用稀土元素荧光特性为基础的检测方法。稀土元素的荧光寿命长且不易被其他荧光影响,使TRFIA具有灵敏度高、特异性强、稳定性好的特点,并在诊断检测领域广泛应用。阐述了TRFIA的原理,并围绕其材料、技术以及与其他检测方法结合应用等方面探讨了TRFIA的最新进展,同时介绍了TRFIA在疾病诊断、食品检测及环境监测的应用,并对其发展前景进行了展望。

关键词：时间分辨荧光免疫分析诊断方法原理免疫学诊断

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鳖源铜绿假单胞菌的分离鉴定及多位点序列与全基因组分析

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微生物学报 2022年第7期62卷 2751-2767页

作者：何宏港吴悠刘乃瑜王至诚刘静霞罗毅华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室/农业动物遗传育种与繁育教育部重点实验室湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室华中农业大学湖北武汉430070

【目的】查明引起湖北仙桃某中华鳖养殖场中华鳖发病死亡的病原及其特征。【方法】本研究分离患病中华鳖的病原,并结合形态特征、生理生化试验、16SrRNA基因鉴定,鉴定分离菌株;通过人工回归感染试验、药敏试验、全基因组测序与分析对分... 详细信息

【目的】查明引起湖北仙桃某中华鳖养殖场中华鳖发病死亡的病原及其特征。【方法】本研究分离患病中华鳖的病原,并结合形态特征、生理生化试验、16SrRNA基因鉴定,鉴定分离菌株;通过人工回归感染试验、药敏试验、全基因组测序与分析对分离菌株的致病性和耐药性进行研究;通过多位点序列分型(multilocus sequence type,MLST)分析,对分离菌株的流行情况进行探究。【结果】从患病中华鳖肝脏等部分分离到3株优势菌株HX8、FG10和GC20,16SrRNA基因同源性和生化特征分析鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。回归感染试验证实该菌株是引起本次中华鳖患病的病原菌。3株分离株的药敏实验结果基本一致,均对诺氟沙星、恩诺沙星等8种抗生素敏感,对氟苯尼考、多西环素、磺胺异恶唑等6种抗生素耐药。MLST鉴定表明,3株分离株均属于序列型(sequencetype,ST)252型,eBURST分析进一步显示ST252型与一些ST共同构成了克隆复合体(clonal complexes,CC)CC252,且ST252是CC252的原始序列型(founder ST)。全基因组测序结果显示,FG10的全基因组大小为5.65 Mb,GC含量为65.3%,共预测到5956个编码序列(CDS),GenBank登录号为JAJGXC000000000。通过与毒力因子数据库(the virulence factor database,VFDB)比对,预测到873个毒力相关因子,主要与黏附、分泌系统以及毒素等相关。通过与耐药基因数据库(the comprehensive antibiotic resistance database,CARD)比对,结果显示FG10中含有喹诺酮类、碳青霉烯类、肽类等抗生素的耐药相关基因。【结论】本研究分离获得了中华鳖的病原细菌铜绿假单胞菌,MLST分析推测了其流行情况,基因组数据揭示了其毒力及耐药基因,为防控水产养殖中铜绿假单胞菌感染提供了一定的参考依据。

关键词：中华鳖铜绿假单胞菌分离鉴定多位点序列分型全基因组毒力及耐药

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硬骨鱼类特有免疫球蛋白IgT的研究进展

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大连海洋大学学报 2022年第2期37卷 183-190页

作者：张永安华中农业大学水产学院湖北洪山实验室农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

免疫球蛋白是脊椎动物在适应性免疫中发挥关键作用的效应分子,其基本单元是由两条重链和两条轻链组成。依据重链恒定区序列的不同,免疫球蛋白被划分为不同的类型。目前,在硬骨鱼类中发现了IgM、IgD和IgT 3种免疫球蛋白,其中IgT是硬骨鱼... 详细信息

免疫球蛋白是脊椎动物在适应性免疫中发挥关键作用的效应分子,其基本单元是由两条重链和两条轻链组成。依据重链恒定区序列的不同,免疫球蛋白被划分为不同的类型。目前,在硬骨鱼类中发现了IgM、IgD和IgT 3种免疫球蛋白,其中IgT是硬骨鱼类特有的免疫球蛋白类型。自2005年首次被发现以来,有关IgT的起源、演化、结构和功能的研究取得了一定进展,现已有多种硬骨鱼类的IgT被鉴定,并且部分硬骨鱼类的IgT具有多个亚类且功能存在分化,说明鱼类IgT远比现有认知复杂得多。本文系统地综述了硬骨鱼类免疫球蛋白IgT的亚类组成、基因结构、免疫功能及起源演化等研究进展,并针对硬骨鱼类IgT研究中存在的问题,提出应进一步加强硬骨鱼类IgT与IgT+B细胞的功能、IgT重链基因产生机制及IgT的Fc受体鉴定等未来重点研究方向,以期为深入阐明IgT的免疫功能及鱼类抗感染免疫应答机制提供参考。

关键词：硬骨鱼类免疫球蛋白组成结构功能

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乌鳢水泡病毒P蛋白异构体的鉴定及其功能初探

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水产学报 2021年第9期45卷 1508-1516页

作者：秘琮然张永安涂加钢华中农业大学水产学院农业微生物学国家重点实验室

为了鉴定乌鳢水泡病毒（SHVV）磷蛋白（P）的异构体并研究其在病毒增殖中的作用,本研究扩增了SHVV的P基因,构建了原核表达质粒pET32a-P,通过Ni-NTA亲和层析柱纯化His-P蛋白,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,利用该抗体对SHVV的P蛋白... 详细信息

为了鉴定乌鳢水泡病毒（SHVV）磷蛋白（P）的异构体并研究其在病毒增殖中的作用,本研究扩增了SHVV的P基因,构建了原核表达质粒pET32a-P,通过Ni-NTA亲和层析柱纯化His-P蛋白,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,利用该抗体对SHVV的P蛋白异构体进行鉴定。进一步利用增强性绿色荧光蛋白（EGFP）研究了P蛋白异构体的亚细胞定位,并通过定量PCR（qRT-PCR）、Western blot及TCID50研究了过表达P蛋白异构体对SHVV增殖的影响。结果显示,SHVV感染斑点叉尾鮰卵巢细胞（CCO）出现3条P蛋白带,进一步验证表明,其中2条带分别是P蛋白（又称P1）及其异构体P2。亚细胞定位实验发现P1和P2主要定位在细胞质,但是可以在核质中穿梭。在CCO细胞中过表达P1、P2均能促进SHVV增殖。因此,SHVV在感染过程中能产生P蛋白（P1）及其异构体P2,且P1和P2对SHVV增殖发挥重要作用。研究结果有助于阐明SHVV的致病机理以及弹状病毒P蛋白异构体的功能。

关键词：乌鳢水泡病毒多克隆抗体 P蛋白异构体增殖

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河南省和湖北省部分地区鸡球虫分离株对磺胺氯吡嗪钠耐药性调查

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动物医学进展 2023年第4期44卷 125-129页

作者：耿天天罗莉妍王雅乐申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河... 详细信息

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河南省共计虫株52株,湖北省共计虫株41株。在河南省52株分离虫株中,有25株对磺胺氯吡嗪钠完全耐药(ACI<160),16株中度耐药(160≤ACI≤180),11株敏感(ACI>180);在湖北省共计41株鸡球虫分离虫株中,有9株完全耐药,9株中度耐药,23株敏感。研究结果为河南省和湖北省鸡球虫的耐药性提供了数据支撑。

关键词：鸡球虫耐药性磺胺氯吡嗪钠,鸡体笼养试验

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