检索结果-内蒙古大学图书馆

植物保护学报 2004年第4期31卷 418-424页

作者：余子全周燚孙明喻子牛华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

植物寄生线虫是一类重要的植物病原生物,给农业生产造成巨大的损失。传统方法防治植物寄生线虫都存在一定的局限性。研究发现苏云金芽胞杆菌对线虫有毒杀活性,为防治植物寄生线虫寻找到了一条新途径。文章介绍了苏云金芽胞杆菌防治植物... 详细信息

植物寄生线虫是一类重要的植物病原生物,给农业生产造成巨大的损失。传统方法防治植物寄生线虫都存在一定的局限性。研究发现苏云金芽胞杆菌对线虫有毒杀活性,为防治植物寄生线虫寻找到了一条新途径。文章介绍了苏云金芽胞杆菌防治植物寄生线虫的研究现状,着重阐述了苏云金芽胞杆菌的杀线虫晶体蛋白及其基因、杀线虫机制等方面的研究进展,并探讨了其中存在的问题及其对策。

关键词：植物寄生线虫苏云金芽胞杆菌防治晶体蛋白病原生物农业生产损失基因发现

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根瘤菌培养基的优化和剂型的比较研究

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微生物学通报 2004年第2期31卷 14-19页

作者：吴红慧周俊初华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobiumfredii)HN0 1和大豆慢生根瘤菌 (Bradyrhizobiumjaponi cum)USDA1 1 0作为供试菌 ,进行YMA、TY、SM、PA和BSE等 5种培养基的比较试验。结果表明 ,两种菌都在BSE中生长速度最快。对USDA1 1 0进行培养基... 详细信息

以费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobiumfredii)HN0 1和大豆慢生根瘤菌 (Bradyrhizobiumjaponi cum)USDA1 1 0作为供试菌 ,进行YMA、TY、SM、PA和BSE等 5种培养基的比较试验。结果表明 ,两种菌都在BSE中生长速度最快。对USDA1 1 0进行培养基的优化试验 ,筛选出一种能将生长速度提高 2倍左右的优化培养基。制作了供试菌的固体、液体与冻干菌剂 ,结果表明在 3种供试固体剂型载体中 ,草炭要优于蛭石 ,蛭石又优于珍珠岩。供试菌在两种液体剂型中的存活率和活菌数均较高 ,氮气或真空剂型对存活率的影响没有明显的差别。两种冻干菌剂的结果表明 ,供试菌在冻干过程中的死亡率较高 ,液氮冻干优于常规冻干。冻干菌剂在储存条件下的存活率为 : 2 0℃ >4℃ >

关键词：大豆根瘤菌培养基优化剂型

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利用绿色荧光蛋白基因gfp研究芽胞杆菌的启动子活性

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微生物学报 2004年第4期44卷 543-546页

作者：周琴孙明喻子牛华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

利用绿色荧光蛋白基因gfpmut3,分别标记苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)的cry3A启动子Pcry3A、BtI_BtII启动子PBtI_BtII和来自蜡状芽胞杆菌特异启动子P4 4- 1 2 以研究其表达差异。其中 ,Pcry3A和PBtI_BtII分别与gfpmut3构成融... 详细信息

利用绿色荧光蛋白基因gfpmut3,分别标记苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)的cry3A启动子Pcry3A、BtI_BtII启动子PBtI_BtII和来自蜡状芽胞杆菌特异启动子P4 4- 1 2 以研究其表达差异。其中 ,Pcry3A和PBtI_BtII分别与gfpmut3构成融合基因 ,以调控gfpmut3在苏云金芽胞杆菌中的表达。将重组质粒pGFP_30 4 (含P4 4- 1 2 )、pGFPExpA(含Pcry3A_gf pmut3融合基因 )和pGFPExpB(含PBtI_BtII_gfpmut3融合基因 )分别导入大肠杆菌 (Escherichiacoli)和苏云金芽胞杆菌后发现 ,P4 4- 1 2 和PBtI_BtII在大肠杆菌与苏云金芽胞杆菌中均可表达gfpmut3,其中PBtI_BtII在大肠杆菌中具有极强的启动基因表达的能力。而Pcry3A 不能启动gfpmut3在大肠杆菌中表达 ,在苏云金芽胞杆菌中启动的gfpmut3表达的荧光强度也较弱。进一步通过荧光显微镜和生物活性检测器对含重组质粒pGFP_30 4、pGFPExpA和pGFPExpB的转化子分别进行荧光检测及微量热检测。结果表明 ,3种启动子驱动下的gfpmut3基因均可在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB1 71中表达并检测得到不同的发光类型。微量热法检测发现P4 4_1 2

关键词：绿色荧光蛋白基因芽胞杆菌启动子荧光活性检测微量热

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环境重金属污染的细菌修复与检测

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应用与环境生物学报 2004年第2期10卷 256-262页

作者：徐磊辉黄巧云陈雯莉华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

日益严重的环境重金属污染引起政府和科技工作者的广泛关注,以细菌为研究对象的生物修复与检测技术已成为环境科学领域中一大研究热点.细菌可通过对重金属的吸附富集、氧化还原、成矿沉淀、淋滤、协同植物吸收等作用修复环境重金属污染... 详细信息

日益严重的环境重金属污染引起政府和科技工作者的广泛关注,以细菌为研究对象的生物修复与检测技术已成为环境科学领域中一大研究热点.细菌可通过对重金属的吸附富集、氧化还原、成矿沉淀、淋滤、协同植物吸收等作用修复环境重金属污染.在重金属污染环境中,细菌为响应重金属的胁迫而产生的种群结构、生物量和生理代谢活性的变化信息可用于重金属生物有效性的检测.本文从细菌对重金属的耐性、环境重金属污染的细菌修复和检测等方面综述该领域近10年的研究进展,并就目前存在的问题提出今后亟待开展的研究.

关键词：重金属污染细菌耐性筛选修复检测

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利用S-层蛋白在细胞表面展示α-淀粉酶和金属硫蛋白

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微生物学报 2004年第5期44卷 658-662,i002页

作者：吴怀光刘欣孙明喻子牛华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

选用苏云金芽胞杆菌CTC菌株细胞表面S 层蛋白作为表面展示载体 ,利用其N 端信号肽以及锚定序列分别将不同生物特性的外源蛋白带到胞外并锚定在细胞的表面。为研究外源蛋白的分子量和生化特性对表面展示以及对其在细胞表面生物活性的影... 详细信息

选用苏云金芽胞杆菌CTC菌株细胞表面S 层蛋白作为表面展示载体 ,利用其N 端信号肽以及锚定序列分别将不同生物特性的外源蛋白带到胞外并锚定在细胞的表面。为研究外源蛋白的分子量和生化特性对表面展示以及对其在细胞表面生物活性的影响 ,选用分子量较大的分泌性蛋白α 淀粉酶和富含半胱氨酸的非分泌性蛋白金属硫蛋白作为目标蛋白。将α 淀粉酶的结构基因 (amy)和金属硫蛋白的结构基因 (smtA)与S 层蛋白的锚定区slh结合 ,构建融合蛋白基因slh amy及slh smtA ,克隆至穿梭载体pHT30 4上 ,得到重组质粒pBMBSA 30 4和pBMBSM 30 4 ;转入带有帮助质粒的重组菌株BMB171 pBMB CSA中 ,得到新的重组菌株BMBSAC和BMBSMC。SDS PAGE显示融合蛋白SLH AMY和SLH SMTA在重组菌的表面得到了表达。利用锥虫蓝染色打孔加膜法表明重组菌SAC的确具有表面酶活性 ,α 淀粉酶被固定在细胞表面。碘液法测定的数据表明重组菌SAC的菌悬液样品较之受体菌BMB171菌悬液样品酶活提高了 4 2 4 %。Ni NTA 琼脂糖微球吸附试验显示重组菌SMC能够被微球所吸附 ,证实SMTA在重组菌表面具有活性。对游离镉离子的吸附试验显示重组菌对镉离子的吸附能力是对照受体菌的 4倍。

关键词：苏云金芽胞杆菌 S-层蛋白细胞表面展示融合蛋白基因载体 α-淀粉酶

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四种AM真菌接种剂的田间效应及其分子检测研究

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土壤学报 2004年第5期41卷 742-749页

作者：郑世学董秀丽喻子牛赵斌华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用灭菌土壤生产了 4种AM真菌接种剂。在盆栽条件下测试了接种剂的质量 ,结果显示 ,4种接种剂促进玉米生长效果明显 ,地上部分生物量均显著高于对照 (p <0 .0 1 ) ;以MPN试验检测了接种剂的侵染能力 ,结果表明每克接种剂中真菌的繁... 详细信息

采用灭菌土壤生产了 4种AM真菌接种剂。在盆栽条件下测试了接种剂的质量 ,结果显示 ,4种接种剂促进玉米生长效果明显 ,地上部分生物量均显著高于对照 (p <0 .0 1 ) ;以MPN试验检测了接种剂的侵染能力 ,结果表明每克接种剂中真菌的繁殖体数在 95～ 1 4 0 0之间。将AM真菌的预接种技术和农业生产上的营养钵育苗技术相结合 ,进行了玉米的田间试验 ,结果显示 ,玉米根系的AM真菌感染率早期增长较快 ,然后趋于平稳 ;AM真菌接种剂A(Glomusconstrictum)、C (Glomus三种菌混合 )和D (G .intraradices)对玉米籽粒产量有显著的增产效果 (p <0 .0 5 ) ;玉米籽粒的淀粉含量和磷含量也高于对照。运用特异性分子探针和nest ed PCR技术 ,从田间接种AM真菌Glomusintraradices和G .mosseae的玉米根样中粗提DNA进行特异性扩增 ,成功地从感染根段中检测到特定的接种AM真菌。本工作从分子水平为评价高效AM真菌的应用潜力、研究AM真菌之间及其与其他微生物之间的相互关系奠定了基础。

关键词： AM真菌接种剂田间效应分子检测田间试验

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伪狂犬病病毒Ea株基因组UL区的克隆与序列分析

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中国病毒学 2004年第2期19卷 120-124页

作者：马相如胡勤芹肖少波方六荣陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

从伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA中扩增到3.76 kb的基因组片段,该片段包含UL31、UL32、UL33和UL34基因完整编码区,以及UL30和UL35基因部分序列.UL31、UL32、UL33和UL34基因G+C含量为69.5%~73.4%,偏向于使用富含GC特别是第三密码子位置上核... 详细信息

从伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA中扩增到3.76 kb的基因组片段,该片段包含UL31、UL32、UL33和UL34基因完整编码区,以及UL30和UL35基因部分序列.UL31、UL32、UL33和UL34基因G+C含量为69.5%~73.4%,偏向于使用富含GC特别是第三密码子位置上核苷酸是C或G的密码子,Ala、Leu、Arg的利用率最高,占氨基酸残基总数的36.4%.PRV Ea株UL31和UL32基因与PRV Ka株核苷酸与氨基酸序列同源性都很高,在98%以上;而UL33和UL34基因与Ka株的氨基酸序列同源性较低,分别为95.7%和94.8%.UL31基因在疱疹病毒α-亚科所有成员之间都很保守,并且UL31基因与马疱疹病毒IV型同源程度最高.UL32、UL33和UL34基因均与牛疱疹病毒I型同源程度最高.UL31、UL32、UL33与UL34基因产物均有酪蛋白激酶2磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点,表明UL31、UL32、UL33、UL34蛋白质可能都是磷酸化蛋白质.

关键词：伪狂犬病病毒 Ea株基因组克隆序列分析马疱疹病毒IV型同源性牛疱疹病毒I型

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以新鲜根段进行AM真菌的分子检测及竞争性侵染研究

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菌物学报 2004年第1期23卷 126-132页

作者：郑世学董秀丽喻子牛赵斌华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

运用nested-PCR技术和AM真菌特异性引物,建立了用新鲜植物根段直接检测AM真菌的分子生物学方法。以真核生物通用引物LR1和NDL22对混合接种的西红柿新鲜根段进行第1次扩增,将其产物进行稀释,再分别以Glomus intraradices 和Glomus mossea... 详细信息

运用nested-PCR技术和AM真菌特异性引物,建立了用新鲜植物根段直接检测AM真菌的分子生物学方法。以真核生物通用引物LR1和NDL22对混合接种的西红柿新鲜根段进行第1次扩增,将其产物进行稀释,再分别以Glomus intraradices 和Glomus mosseae的种特异性引物8.22和5.25进行第2次扩增。在琼脂糖凝胶上观察到AM真菌种特异性条带;运用该技术检测出混合接种时同一根段内不同的AM真菌,并探讨了真菌在植物根部的竞争性侵染。用盆栽方式种植西红柿,混合接种G. intraradices 和G. mosseae,在1个月后,前者侵染占优势。

关键词：西红柿根内球囊霉摩西球囊霉 nested-PCR AM真菌

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苏云金芽胞杆菌AiiA蛋白对魔芋软腐病菌的抗病活性

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武汉大学学报（理学版） 2004年第6期50卷 761-764页

作者：周燚孙明喻子牛华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室

AiiA蛋白通过破坏病原菌的信号分子来阻断病原菌的群体感应调节系统,达到抗病的目的,是一种新型的抗病蛋白.根据蜡状芽胞杆菌ATCC14579基因组中aiiA序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌中成功扩增出aiiA基因,其ORF为753bp,测序后经blast检测... 详细信息

AiiA蛋白通过破坏病原菌的信号分子来阻断病原菌的群体感应调节系统,达到抗病的目的,是一种新型的抗病蛋白.根据蜡状芽胞杆菌ATCC14579基因组中aiiA序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌中成功扩增出aiiA基因,其ORF为753bp,测序后经blast检测与已发表的序列相似性均在95%以上.将此基因克隆到pET28a表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,超量表达的蛋白在菌体中以包涵体形式存在,纯化的AiiA蛋白经SDS PAGE电泳检测,表达产物分子量为28×103,致病性测定表明该蛋白对魔芋软腐病菌CZY具有较强的抗病活性.

关键词：苏云金芽胞杆菌 AiiA蛋白魔芋软腐病菌CZY

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费氏中华根瘤菌purL基因的共生诱导型表达可以建立共生固氮体系

费氏中华根瘤菌purL基因的共生诱导型表达可以建立共生固氮体系

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湖北省生物工程学会2004年年会

作者：谢波陈大松周俊初农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

不同的根瘤菌营养缺陷型突变株对揭示豆科植物与根瘤菌形成共生组织过程中代谢产物交换与类菌体繁殖分化等问题起着重要作用。有报道揭示嘌呤代谢途径中purL 基因的突变造成腺嘌呤缺陷型和LPS组分改变,该突变株与大豆只能形成微小的无... 详细信息

不同的根瘤菌营养缺陷型突变株对揭示豆科植物与根瘤菌形成共生组织过程中代谢产物交换与类菌体繁殖分化等问题起着重要作用。有报道揭示嘌呤代谢途径中purL 基因的突变造成腺嘌呤缺陷型和LPS组分改变,该突变株与大豆只能形成微小的无固氮活性的假瘤。虽然培养液中含腺嘌呤或5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸可以促进突变株的结瘤能力,但仍不能恢复固氮能力。本研究进一步探讨了purL基因在建立共生体中的作用,以及purL基因不同表达形式对恢复共生固氮的影响。

关键词：费氏中华根瘤菌共生启动子 purL 腺嘌呤缺陷型

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