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猪业科学 2021年第11期38卷 78-82页

作者：张哲玮贝为成华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北洪山实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 广西扬翔农牧有限责任公司广西贵港537100 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染引起的一种以妊娠母猪发热流产、仔猪高死亡率和各年龄段猪呼吸功能障碍为主要特征的高度接触性传染病。目前,该病在全球范围内均有分布,对养猪业造成的经济损失不计其数。自1996年我国首次分离PRRSV到如今,该病已在我国横行了25年之久,却依旧无法有效防治。文章对目前国内外猪繁殖与呼吸综合征病原、流行病学、临床症状以及疫苗免疫和综合防控措施等方面的研究进展进行综述,以期为该病的防控提供科学依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗免疫防控措施

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某奶牛场布鲁氏菌病暴发调查及A19疫苗紧急免疫效果评估

某奶牛场布鲁氏菌病暴发调查及A19疫苗紧急免疫效果评估

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十九次全国学术研讨会

作者：王宇王艳彭清洁陈颖钰 Ian D.Robertson 郭爱珍农业微生物学国家重点实验室湖北省兽医流行病学国际科技合作基地中澳兽医流行病学联合研究中心华中农业大学

引言布鲁氏菌病(Brucellosis)简称为"布病",是由布鲁氏菌(Brucellaspp)引起的一种重要的人兽共患病。主要影响动物的生殖系统。对奶牛来说,易造成奶牛发生流产和产奶量下降,不仅对奶牛业造成巨大危害也产生食品安全问题,还可...

引言布鲁氏菌病(Brucellosis)简称为"布病",是由布鲁氏菌(Brucellaspp)引起的一种重要的人兽共患病。主要影响动物的生殖系统。对奶牛来说,易造成奶牛发生流产和产奶量下降,不仅对奶牛业造成巨大危害也产生食品安全问题,还可能因人感染布病导致严重的公共卫生和社会问题。

关键词：

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利用实时荧光定量方法进行副猪嗜血杆菌分子血清分型的研究

利用实时荧光定量方法进行副猪嗜血杆菌分子血清分型的研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会暨中国畜牧兽医学会生物制品学分会2021年学术论坛

作者：崔一芳郭芳芳蔡旭旺曹晓亚王宏俊杨兵周宏专苏霞徐福洲畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京市农林科学院畜牧兽医研究所农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）是引起猪格拉泽氏病（Gl?sser's disease）的细菌性病原,可感染猪出现多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎及败血症等多种临床表现和病理变化,是当前我国养猪业最重要的细菌性疫病之一。GPS目... 详细信息

副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）是引起猪格拉泽氏病（Gl?sser's disease）的细菌性病原,可感染猪出现多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎及败血症等多种临床表现和病理变化,是当前我国养猪业最重要的细菌性疫病之一。GPS目前至少鉴定出15个血清型,不同血清型菌株存在高毒力、中等毒力和无毒力等显著差异,因而鉴定GPS血清型对该病的诊断、防治以及流行病学调查具有重要意义。通过对GPS 15个血清型荚膜多糖合成编码基因座的基因结构进行分析发现,不同血清型菌株之间存在显著差异,基于不同血清型的特异性基因进行多重PCR的分子血清分型方法已有报道,此种分子血清分型方法比传统的血清分型方法具有高效、准确、快速等显著优势。为克服多重PCR方法中需要跑胶、通过条带判断时不易区分大小等缺点,本试验建立了一种简便、快速的基于实时荧光定量（qPCR）检测方法中Ct值大小进行GPS血清型判定的检测方法,即利用报道的GPS不同血清型特异性基因片段,设计不同血清型的特异性qPCR引物,建立基于Sybr Green荧光染色的qPCR检测方法。通过对GPS15种血清型国际参考菌株检测结果显示,对应血清型菌株的Ct值均小于12,而其它血清型菌株均大于19,扩增效率介于85.5%至110.4%之间,相关系数R>0.98。通过对83个临床分离株检测结果显示,本试验建立的qPCR与多重PCR检测方法符合率为98.8%（82/83）,其中经琼脂扩散试验（GID）鉴定的43株血清型菌株中41株与qPCR检测结果相符,2株血清12型菌株被鉴定为血清5型。本试验结果显示,基于Ct值的实时荧光定量检测方法应用于GPS分子血清分型具有简便、快速、准确等显著优点,对临床上GPS流行病学调查、快速诊断和防控具有重要的应用价值。

关键词：副猪嗜血杆菌分子血清分型实时荧光定量方法

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百脉根半胱氨酸蛋白酶基因在根瘤衰老过程中的表达分析

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华中农业大学学报 2019年第1期38卷 16-21页

作者：许泽远苟洪兰段柳剑张忠明华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为明确半胱氨酸蛋白酶与定型根瘤衰老的相关性,通过与已鉴定的紫云英半胱氨酸蛋白酶AsNODf32进行序列比对分析,从百脉根中鉴定出2个与根瘤衰老相关的蛋白酶基因LjCyp1和LjCyp5。蛋白序列及结构分析表明,LjCyp1和LjCyp5同源性高达96.2%,... 详细信息

为明确半胱氨酸蛋白酶与定型根瘤衰老的相关性,通过与已鉴定的紫云英半胱氨酸蛋白酶AsNODf32进行序列比对分析,从百脉根中鉴定出2个与根瘤衰老相关的蛋白酶基因LjCyp1和LjCyp5。蛋白序列及结构分析表明,LjCyp1和LjCyp5同源性高达96.2%,均含有2个典型的半胱氨酸蛋白酶结构域和液泡定位信号肽,属于木瓜蛋白酶家族。体外酶活检测显示,2个蛋白都具有半胱氨酸蛋白酶活性。通过Realtime PCR和组织化学定位分析表明,2个蛋白酶基因主要在成熟和衰老的根瘤中表达。结果表明LjCyp1和LjCyp5可能在百脉根根瘤衰老过程中发挥重要作用。

关键词：百脉根半胱氨酸蛋白酶根瘤衰老共生固氮

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磷转运蛋白AsPT6对紫云英结瘤及固氮酶活性的影响

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华中农业大学学报 2019年第1期38卷 50-58页

作者：陈冲李友国赵斌林会华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用组织定位、超表达及RNAi等方法对紫云英中的Pht1家族磷转运蛋白AsPT6进行了研究。时空表达结果显示,AsPT6基因在根、茎、叶中均有表达,接种根瘤菌后在根和根瘤中高量表达;化学组织定位分析表明,AsPT6在根和根瘤的维管组织及根和根... 详细信息

采用组织定位、超表达及RNAi等方法对紫云英中的Pht1家族磷转运蛋白AsPT6进行了研究。时空表达结果显示,AsPT6基因在根、茎、叶中均有表达,接种根瘤菌后在根和根瘤中高量表达;化学组织定位分析表明,AsPT6在根和根瘤的维管组织及根和根瘤连接处均有表达,起到向根瘤转运磷的作用;超表达及RNAi结果显示AsPT6能显著影响紫云英的结瘤及固氮酶活性。这些研究结果表明,AsPT6参与根瘤形成和发育过程中磷的转运。

关键词：紫云英华癸中慢生根瘤菌结瘤磷转运蛋白 Pht1家族

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MicroRNA在结核病诊断中的作用

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动物医学进展 2020年第5期41卷 121-124页

作者：王子健竺婷婷陈颖钰郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省兽医流行病学国际科技合作基地湖北武汉430070

MicroRNA(miRNA)是一类进行基因转录后调控的非编码小RNA,它们广泛存在于真核细胞之中,参与机体调节。结核病严重危害人类与其他生物健康,除潜伏期长、胞内寄生以外,还缺少有效的快速的早期诊断方法。尽管已经在结核病诊断的研究中预测... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是一类进行基因转录后调控的非编码小RNA,它们广泛存在于真核细胞之中,参与机体调节。结核病严重危害人类与其他生物健康,除潜伏期长、胞内寄生以外,还缺少有效的快速的早期诊断方法。尽管已经在结核病诊断的研究中预测并证实了多种miRNA,但miRNA在结核菌感染中的功能及其靶基因的相互作用机制尚不完全清晰。研究表明,结核病的发生、发展及转化过程与miRNA有着密不可分的联系。深入研究miRNA在结核病早期诊断中的应用,阐明结核菌感染过程中miRNA的生物学作用,充分挖掘其在诊断和治疗中的价值,将有助于人类防治结核病。

关键词： MicroRNA 结核病诊断

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百脉根起始结瘤相关转录因子间相互作用的鉴定

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华中农业大学学报 2019年第1期38卷 10-15页

作者：樊玉倩肖爱芳张忠明华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以模式豆科植物百脉根为材料,利用酵母双杂交和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术,研究调控起始结瘤基因表达的转录因子IPN2、NSP2、CYCLOPS、DELLA间的相互作用。结果显示,百脉根IPN2与DELLA、NSP2与... 详细信息

以模式豆科植物百脉根为材料,利用酵母双杂交和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术,研究调控起始结瘤基因表达的转录因子IPN2、NSP2、CYCLOPS、DELLA间的相互作用。结果显示,百脉根IPN2与DELLA、NSP2与DELLA、CYCLOPS与DELLA均有相互作用。表明IPN2、DELLA可能参与并形成一个大的蛋白复合物,网络调控豆科植物起始结瘤基因的时空表达。

关键词：百脉根转录因子起始结瘤基因酵母双杂交双分子荧光互补

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百脉根Rboh基因家族在共生固氮中的功能研究

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华中农业大学学报 2019年第1期38卷 1-9页

作者：凌颖张婷婷端木德强张忠明曹扬荣华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为探索植物呼吸爆发氧化酶(respiratory burst oxidase homologue,Rboh)基因家族在共生固氮中的功能和作用机制,利用分子生物学、细胞生物学和遗传学等方法,围绕百脉根Rboh基因家族中在根瘤中特异性表达的基因LjRbohA (Lj5g3v1497840)... 详细信息

为探索植物呼吸爆发氧化酶(respiratory burst oxidase homologue,Rboh)基因家族在共生固氮中的功能和作用机制,利用分子生物学、细胞生物学和遗传学等方法,围绕百脉根Rboh基因家族中在根瘤中特异性表达的基因LjRbohA (Lj5g3v1497840)以及在根瘤中高表达的基因LjRbohB (Lj6g3v1549190)和LjRbohC(Lj5g3v1497820),分别对其蛋白的亚细胞定位、基因的表达模式、基因的启动子活性及蛋白的功能进行了研究。结果显示:LjRbohA、LjRbohB和LjRbohC蛋白都定位在植物的细胞膜上;LjRbohA、LjRbohB和LjRbohC基因在接种根瘤菌后表达上调;LjRobhA和LjRobhB基因在根瘤、维管束和侧根原基表达;利用CRISPR-Cas9技术对LjRbohA、LjRbohB和LjRbohC3个基因分别进行敲除导致结瘤数目减少。这些研究结果表明,LjRbohA、LjRbohB和LjRbohC这3个基因可能都参与调控百脉根与根瘤菌的共生结瘤过程。

关键词：百脉根共生固氮植物呼吸爆发氧化酶活性氧根瘤

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苜蓿中华根瘤菌共生固氮相关基因突变体的分离和鉴定

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华中农业大学学报 2019年第1期38卷 43-49页

作者：张晴余海翔张忠明华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了阐明豆科植物共生反应与免疫反应的协调机制,揭示参与植物细胞侵染、定殖及固氮过程中根瘤菌基因的功能,以苜蓿中华根瘤菌Sm2011为材料,构建了约8 000株Tn5-sacB转座子插入的突变体库。利用巢式PCR检测技术,从中鉴定和筛选出nodC、n... 详细信息

为了阐明豆科植物共生反应与免疫反应的协调机制,揭示参与植物细胞侵染、定殖及固氮过程中根瘤菌基因的功能,以苜蓿中华根瘤菌Sm2011为材料,构建了约8 000株Tn5-sacB转座子插入的突变体库。利用巢式PCR检测技术,从中鉴定和筛选出nodC、nifH、smc01188和smc04024等4个特定目标基因的插入突变体及其插入位点。通过结瘤试验考察突变体共生及固氮表型,结果显示:植株接种smc01188突变体28d后,与对照植株相比,该基因突变导致根瘤固氮酶活下降,与慢生型大豆根瘤菌该基因突变体的表型类似;smc04024基因突变不影响植株生长,根瘤发育基本正常;接种nifH突变体后,植株呈缺氮表型,生长发育受阻,根瘤为白色;接种nodC突变体后植株不结瘤,说明Tn5-SacB的插入导致nifH、nodC基因功能丧失。利用PCR检测、鉴定和分离目标基因突变体是一种行之有效的方法。

关键词：苜蓿中华根瘤菌共生固氮 Tn5转座子插入突变体

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大豆快生根瘤菌SfHH103＿03182基因突变体的构建和共生固氮表型分析

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华中农业大学学报 2019年第1期38卷 35-42页

作者：杜思曾小波李友国华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以大豆快生根瘤菌HH103中glnK同源基因SfHH103_03182为研究对象,采用pK19mob单插入失活技术构建该基因的插入失活突变体,菌落PCR和测序分析表明突变体构建正确。植物盆栽试验结果显示,与接种野生型菌株HH103相比,突变体接种植株的根瘤... 详细信息

以大豆快生根瘤菌HH103中glnK同源基因SfHH103_03182为研究对象,采用pK19mob单插入失活技术构建该基因的插入失活突变体,菌落PCR和测序分析表明突变体构建正确。植物盆栽试验结果显示,与接种野生型菌株HH103相比,突变体接种植株的根瘤数量增多,植株鲜质量和根瘤鲜质量增加,根瘤固氮酶活无显著差异。在不同浓度氮素处理和盆栽条件下,对共生表型的检测表明突变体接种植物的根瘤数量没有显著变化。

关键词：大豆快生根瘤菌HH103 PⅡ蛋白插入突变株共生固氮高氮处理

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