检索结果-内蒙古大学图书馆

猪业科学 2020年第7期37卷 76-80页

作者：陈晓雨于学祥孙琪库旭钢范盛先何启盖华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心检测实验室湖北武汉430070

2019年11月底,湖北某商品猪场保育猪只出现厌食、消瘦、呼吸困难、咳嗽等症状,偶有病猪急性死亡,为查找病因,控制疫情,减少损失,依次通过流行病学调查、病理剖检和实验室检测,最终确定该发病猪场为感染猪瘟病毒,进而继发感染Hps-4混合感... 详细信息

2019年11月底,湖北某商品猪场保育猪只出现厌食、消瘦、呼吸困难、咳嗽等症状,偶有病猪急性死亡,为查找病因,控制疫情,减少损失,依次通过流行病学调查、病理剖检和实验室检测,最终确定该发病猪场为感染猪瘟病毒,进而继发感染Hps-4混合感染,并伴随蛔虫感染导致。通过筛选敏感药物治疗,优化生产管理,成功控制了此次疫情。该案例对此次疫情进行了分析总结,就加强生物安全建设,优化养殖管理,实现生产质量可控提供了参考建议。也为猪瘟混合感染呼吸系统细菌性疾病的防控提供参考。

关键词：保育猪混合感染诊断防控

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鸡传染性贫血病毒湖北分离株XH16全基因组序列分析

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中国兽医杂志 2020年第12期56卷 1-4,8,I0001页

作者：靳泽华黄英王泽宇张安定华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 农业农村部兽医诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430070 科技部动物疫病联合研究中心湖北武汉430070

为了解鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因组特征及遗传变异情况,本试验对湖北某家禽养殖场中疑似CAV感染的肉鸡进行剖检,从其肝脏中分离得到1株病毒。通过聚合酶链式反应(PCR)试验验证为CAV,并将其命名为CAV-XH16。克隆该毒株全基因组,测序... 详细信息

为了解鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因组特征及遗传变异情况,本试验对湖北某家禽养殖场中疑似CAV感染的肉鸡进行剖检,从其肝脏中分离得到1株病毒。通过聚合酶链式反应(PCR)试验验证为CAV,并将其命名为CAV-XH16。克隆该毒株全基因组,测序拼接得到全基因组序列,并将该毒株与国内外已发表的其他病毒序列进行遗传进化分析。结果显示,该分离株具有高毒力毒株的分子特征,属于亚洲CAV分离株所属的主要亚群A1亚群。与中国分离株JL14023(NCBI登记号KY486145)有99.65%的相似性。本试验为CAV分子流行病学研究和新型疫苗研发提供了参考依据。

关键词：鸡传染性贫血病毒全基因组序列分析

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基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用

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畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 454-460页

作者：王俊伟陈芳洲库旭钢李畅何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料... 详细信息

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌*** BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。

关键词：猪圆环病毒3型 ORF2基因 Cap蛋白原核表达 ELISA检测

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表达H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-optiHA的构建及生物学特性

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中国兽医学报 2019年第7期39卷 1303-1309,1335页

作者：范桂芳徐守兴杨斓宋文博华琳吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 预防兽医学湖北省重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒r... 详细信息

为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA。对获得的重组病毒在多种细胞上的增殖特性、一步生长曲线、遗传稳定性以及对小鼠的安全性等生物学特性进行了研究。结果表明,构建的rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA重组病毒能够稳定表达HA蛋白,并且经过优化后,目的基因的表达量有明显提高。该重组病毒在ST、PK-15、Vero和BHK-21细胞上的增殖滴度均高于10-7.0/0.1mL,对PK-15细胞的敏感性最高。一步生长曲线结果表明,重组病毒的增殖特性未受影响。连续传代20代后,该重组病毒依然具有较好的遗传稳定性,并且对小鼠安全性良好。本研究为重组病毒rPRV-optiHA的进一步研究与应用奠定了基础。

关键词： PRV变异毒株猪流感病毒 HA基因生物学特性

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两株分离自疫苗免疫猪场的PRRSV毒株的遗传演化分析

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中国兽医科学 2019年第7期49卷 847-854页

作者：姚睿玉陈芳洲何启盖杨汉春中国农业大学动物医学院北京100083 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重影响全球养猪业的传染病,疫苗免疫是防控该病的重要措施,但猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)容易发生变异从而降低了免疫预防的效果。本研究从免疫了高致病性PRRS疫苗的发病猪场,分离出2株PRRSV毒株,并测... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重影响全球养猪业的传染病,疫苗免疫是防控该病的重要措施,但猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)容易发生变异从而降低了免疫预防的效果。本研究从免疫了高致病性PRRS疫苗的发病猪场,分离出2株PRRSV毒株,并测定了其全基因组序列,分别命名为:PRRSV/pig/CHN/JTS/201606和PRRSV/pig/CHN/TG/201711。为了探讨临床中分离得到的这2株PRRSV毒株与该场所使用疫苗之间的关系,我们进行了全基因序列的遗传变异和重组分析,结果显示,这2个毒株都以PRRSV-pig-CHN-TJ-200-610(EU860248.1)疫苗毒株为骨架,其中PRRSV/pig/CHN/JTS/201606毒株在ORF1a蛋白的1429-1522 aa区域存在独特的94 aa的缺失,PRRSV/pig/CHN/TG/201711毒株在1013-1132aa区域存在120 aa的缺失。综上,本研究结果表明,PRRSV疫苗株基因组中核苷酸的突变和缺失产生的新毒株是造成猪场疫苗免疫失败的原因。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组遗传变异

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利用实时荧光定量方法进行副猪嗜血杆菌分子血清分型的研究

利用实时荧光定量方法进行副猪嗜血杆菌分子血清分型的研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会暨中国畜牧兽医学会生物制品学分会2021年学术论坛

作者：崔一芳郭芳芳蔡旭旺曹晓亚王宏俊杨兵周宏专苏霞徐福洲畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京市农林科学院畜牧兽医研究所农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）是引起猪格拉泽氏病（Gl?sser's disease）的细菌性病原,可感染猪出现多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎及败血症等多种临床表现和病理变化,是当前我国养猪业最重要的细菌性疫病之一。GPS目... 详细信息

副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）是引起猪格拉泽氏病（Gl?sser's disease）的细菌性病原,可感染猪出现多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎及败血症等多种临床表现和病理变化,是当前我国养猪业最重要的细菌性疫病之一。GPS目前至少鉴定出15个血清型,不同血清型菌株存在高毒力、中等毒力和无毒力等显著差异,因而鉴定GPS血清型对该病的诊断、防治以及流行病学调查具有重要意义。通过对GPS 15个血清型荚膜多糖合成编码基因座的基因结构进行分析发现,不同血清型菌株之间存在显著差异,基于不同血清型的特异性基因进行多重PCR的分子血清分型方法已有报道,此种分子血清分型方法比传统的血清分型方法具有高效、准确、快速等显著优势。为克服多重PCR方法中需要跑胶、通过条带判断时不易区分大小等缺点,本试验建立了一种简便、快速的基于实时荧光定量（qPCR）检测方法中Ct值大小进行GPS血清型判定的检测方法,即利用报道的GPS不同血清型特异性基因片段,设计不同血清型的特异性qPCR引物,建立基于Sybr Green荧光染色的qPCR检测方法。通过对GPS15种血清型国际参考菌株检测结果显示,对应血清型菌株的Ct值均小于12,而其它血清型菌株均大于19,扩增效率介于85.5%至110.4%之间,相关系数R>0.98。通过对83个临床分离株检测结果显示,本试验建立的qPCR与多重PCR检测方法符合率为98.8%（82/83）,其中经琼脂扩散试验（GID）鉴定的43株血清型菌株中41株与qPCR检测结果相符,2株血清12型菌株被鉴定为血清5型。本试验结果显示,基于Ct值的实时荧光定量检测方法应用于GPS分子血清分型具有简便、快速、准确等显著优点,对临床上GPS流行病学调查、快速诊断和防控具有重要的应用价值。

关键词：副猪嗜血杆菌分子血清分型实时荧光定量方法

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一例夏南牛大肠杆菌与链球菌混合感染的病例报告

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中国奶牛 2020年第5期 32-34页

作者：刘心彭清洁郭爱珍陈曦陈颖钰华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物国家重点实验室武汉430070 湖北省兽医流行病学国际科技合作基地武汉430070

本文就一例夏南公牛混合感染大肠杆菌O158与链球菌导致死亡的病例进行了报告分析,提出了大肠杆菌O158与链球菌混合感染的诊断、治疗方法以及防范措施。为临床大肠杆菌O158与链球菌混合感染的识别及处置提供参考,为该病的防治提供支持。

关键词：牛大肠杆菌O158 链球菌病例报告

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猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医学报 2019年第9期39卷 1667-1673页

作者：刘青芸国师榜周宁华琳陈焕春吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒... 详细信息

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好。该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64%,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54%,2种方法的符合率为81.08%。综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因 TaqMan实时荧光定量PCR

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关于当前人间新型冠状病毒肺炎疫情防控对我国养牛企业生产影响及其应对措施建议

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中国奶牛 2020年第2期 5-9页

作者：郭爱珍彭清洁胡长敏陈颖钰曹永强李家奎华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 武汉科前生物股份有限公司武汉430070 随州市弘大畜牧有限责任公司随州441300

自2020年1月以来,新型冠状病毒(简称“新冠”)肺炎疫情在局地爆发,隔离、封锁和交通管制已成为阻断人间传染源传播的重要防控措施。为摸清现阶段这些疫情防控措施对养牛业的影响,我们对全国38个养殖单位进行调查。调查结果显示,交通管... 详细信息

自2020年1月以来,新型冠状病毒(简称“新冠”)肺炎疫情在局地爆发,隔离、封锁和交通管制已成为阻断人间传染源传播的重要防控措施。为摸清现阶段这些疫情防控措施对养牛业的影响,我们对全国38个养殖单位进行调查。调查结果显示,交通管制给绝大部分养牛场饲料、兽药和疫苗等生产物资的供应带来障碍,湖北省尤其严重;并且产品(奶、牛、肉)加工和上市受阻。同时,有可能因牛群防疫计划不能正常实施、牛病不能及时处置等原因导致动物疫病爆发、长期倒奶导致环境污染等次生灾害。据此,我们对相关部门和养殖企业提出了应对措施和政策建议,以期为当前新型冠状病毒肺炎疫情下保持养牛业稳定发展提供数据和政策支持。

关键词：新型冠状病毒养牛业调查控制疾病

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三基因缺失重组弱毒株(PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2)不同途径免疫的效果分析

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中国预防兽医学报 2019年第12期41卷 1261-1267页

作者：吴昊牛伟杰王久红胡耀方姚伦库旭钢何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

为评价口服免疫猪伪狂犬病毒三基因缺失重组弱毒株PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2对母源抗体阳性保育猪的保护效果,本研究将该重组弱毒株通过口服和颈部肌肉注射两种不同途径免疫母源抗体阳性的断奶仔猪,通过ELISA方法测定血清PRV g... 详细信息

为评价口服免疫猪伪狂犬病毒三基因缺失重组弱毒株PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2对母源抗体阳性保育猪的保护效果,本研究将该重组弱毒株通过口服和颈部肌肉注射两种不同途径免疫母源抗体阳性的断奶仔猪,通过ELISA方法测定血清PRV gB抗体、PCV2 Cap抗体和IFN-γ水平,利用固定病毒-稀释血清的中和试验方法检测PRV中和抗体水平;免疫结束后攻毒,记录各组猪临床表现和病理变化、测定其鼻拭子和肛拭子中病毒排毒时间、病毒载量等指标。结果显示,整个免疫试验过程中,口服组与注射组猪的PRV gB抗体均维持阳性、血清中PRV中和抗体效价均高于1:4、IFN-γ含量在免疫后均能达到300 pg/mL以上,PCV2抗体阳性率则出现下降;而未免疫组猪在第7 d后gB抗体转阴,中和抗体效价低于1:4、IFN-γ含量维持在约250 pg/mL,PCV2抗体阳性率(母源抗体)持续到二免后28 d才开始下降。免疫后攻毒,检测结果显示,口服组与注射组比对照组猪提前2 d体温下降,提前7 d恢复采食,而对照组猪出现高温、打喷嚏、咳嗽、流鼻涕、食欲不振、精神沉郁和神经症状并持续至攻毒后第8 d,并于攻毒后第12 d开始采食;口服组与注射组猪排毒高峰在攻毒后第2 d^6 d,第12 d后均停止排毒,对照组猪排毒持续期大于14 d;脑组织病理切片观察可见,口服组与注射组猪脑组织中仅少量小胶质细胞和淋巴细胞增多,而对照组猪脑组织中出现胶质细胞结节、血管袖套现象、卫星现象、噬神经元现象等病理变化,对照组猪扁桃体隐窝腔内含有大量脱落的隐窝上皮细胞、白细胞和炎性渗出液,并有燕麦细胞增多。以上结果表明口服方式免疫该三基因缺失重组弱毒株能够使保育猪产生针对PRV的有效免疫应答,但并不能诱导高水平的PCV2抗体。本研究为PRV疫苗研发带来了新的方向,也为免疫途径提供了更多选择,同时首次证实了该缺失弱毒株口服和肌注均能提供相似的免疫保护效果。

关键词： PRV缺失弱毒株口服免疫免疫效果评价

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