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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：杨希邹更周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

防御素(defensin)是由机体分泌的一种小分子阳离子多肽,具有较强的广谱抗菌活性,对真菌和病毒也有一定的作用.由于其特殊的作用机制,病原菌不易产生耐药性,并且近年来发现其在免疫调节和炎性反应中起着重要的作用,因而成为目前研究的热... 详细信息

防御素(defensin)是由机体分泌的一种小分子阳离子多肽,具有较强的广谱抗菌活性,对真菌和病毒也有一定的作用.由于其特殊的作用机制,病原菌不易产生耐药性,并且近年来发现其在免疫调节和炎性反应中起着重要的作用,因而成为目前研究的热点.防御素主要有三种:α-防御素、β-防御素和γ-防御素.其中β-防御素由于广泛表达于呼吸道、胃肠道等的粘膜上皮细胞和白细胞而成为研究的热点.本文介绍了β-防御素的结构,分析其进化,总结了其表达调控、生物学活性及应用. β-防御素主要分泌于粘膜细胞，对细菌、病毒等具有广谱的杀伤活性，是机体清除原微生物的重要手段。同时，β-防御素也是机体免疫中重要的效应分子和调节分子，参与机体的免疫调节和炎性反应，具有广阔的应用前景。然而其杀菌机制和免疫学活性有待进一步的研究，以便更好的将其利用在抗病育种、医药等领域。

关键词：动物医学 β-防御素生物进化功能分析机体免疫

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猪链球菌2型补体结合蛋白的筛选

猪链球菌2型补体结合蛋白的筛选

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：邓思敏徐闻逸赵丽阳周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

以小鼠脑组织cDNA文库为模板用PCR扩增C1qA、C3a和C3b等补体组分的cDNA序列,克隆到细菌双杂交载体pBT中获得重组诱饵质粒pBT-C1qA、pBT-C3a和pBT-C3b,分别与本实验室已经构建的猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的全基因... 详细信息

以小鼠脑组织cDNA文库为模板用PCR扩增C1qA、C3a和C3b等补体组分的cDNA序列,克隆到细菌双杂交载体pBT中获得重组诱饵质粒pBT-C1qA、pBT-C3a和pBT-C3b,分别与本实验室已经构建的猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的全基因组细菌双杂交文库中的膜蛋白、分泌蛋白、蛋白酶和肽酶等pTRG重组质粒共转化大肠杆菌XL1-Blue MRF' Kan菌株,进行细菌双杂交实验,系统筛选和鉴定SS2的补体结合蛋白.目前,已经筛选到候选C1qA、C3a和C3b的补体结合蛋白2个、4个和1个,正在进行相互作用验证和互作结构域的鉴定.C4、C6、C3aR、C5aR、FH等补体的结合蛋白也在筛选之中.这些补体结合蛋白的鉴定对深入研究SS2的补体逃逸机制奠定了的基础.

关键词：猪链球菌2型补体结合蛋白细菌双杂交分子间相互作用

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猪胸膜肺炎放线杆菌:从基因组学到防治技术研究

猪胸膜肺炎放线杆菌:从基因组学到防治技术研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)是巴斯德菌科放线杆菌属的一种猪呼吸道病原菌,引起猪的传染性胸膜肺炎,导致感染猪大量急性或慢性死亡,严重危害世界养猪业.根据其表面多糖的抗原性差异(热稳定抗原的琼脂扩散试... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)是巴斯德菌科放线杆菌属的一种猪呼吸道病原菌,引起猪的传染性胸膜肺炎,导致感染猪大量急性或慢性死亡,严重危害世界养猪业.根据其表面多糖的抗原性差异(热稳定抗原的琼脂扩散试验),可将其分为15种血清型,血清1型和5型又分别分为1a、1b和5a、5b亚型,还有一些分离株尚不能被分型.不同国家、地区和猪场流行的优势血清型不尽相同,不同血清型的菌株的毒力也不同,并缺乏有效的交叉免疫保护,因此,APP血清型和毒力的多样性是该病诊断与免疫防控的重要挑战.本实验室从流行病学、基因组学和致病机理研究,到诊断技术和疫苗的研制与产业化,为该病的防治奠定了理论基础和提供了有力工具.

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌基因组学疾病防治

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减毒支气管败血波氏杆菌细菌载体的应用研究

减毒支气管败血波氏杆菌细菌载体的应用研究

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：彭忠夏欣吴磊常宇慧胡睿铭吴斌陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

引言支气管败血波氏杆菌aroA基因缺失株(Bb△aroA)不仅被开发成弱毒疫苗广泛应用于预防猪波氏杆菌感染,而且还能作为细菌载体呈递异源抗原,促使机体同时产生针对不同抗原的抗体,从而达到预防多种病原感染的目的.本研究利用Bb△aroA(QH0...

引言支气管败血波氏杆菌aroA基因缺失株(Bb△aroA)不仅被开发成弱毒疫苗广泛应用于预防猪波氏杆菌感染,而且还能作为细菌载体呈递异源抗原,促使机体同时产生针对不同抗原的抗体,从而达到预防多种病原感染的目的.本研究利用Bb△aroA(QH0814△aroA)分别表达猪2型圆环病毒主要衣壳蛋白(PCV2-MCP)以及巴氏杆菌毒素C端(PMTC),并检测其免疫效力,旨在为二价苗及多价苗的研发奠定基础.

关键词：

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猪β防御素-2转基因小鼠的制备及抗病性评价

猪β防御素-2转基因小鼠的制备及抗病性评价

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第十四届中南地区实验动物科技交流会

作者：杨希张庆德周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

动植物抗菌肽因其独特的抗菌活性和免疫调节活性而被广泛用于抗菌药物和转基因动植物新品种的研究。防御素(defensin)是由动植物分泌的一种小分子阳离子多肽，具有较强的广谱抗菌活性，对真菌和病毒也有一定的作用。由于其特殊的作用机... 详细信息

动植物抗菌肽因其独特的抗菌活性和免疫调节活性而被广泛用于抗菌药物和转基因动植物新品种的研究。防御素(defensin)是由动植物分泌的一种小分子阳离子多肽，具有较强的广谱抗菌活性，对真菌和病毒也有一定的作用。由于其特殊的作用机制，病原菌不易产生耐药性，并且近年来发现其在免疫调节和炎性反应中起着重要的作用，而被广泛用于抗菌药物利转基因动植物新品种的研究。由于没有合适的动物模型，绝大多数防御素活性发现来自体外研究，缺乏体内的直接证据。猪β防御素-2(PBD-2)广泛表达于呼吸道、胃肠道等的粘膜上皮细胞，体外研究表明，其对常见的革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均呈现出良好的杀菌活性，因而被认为是猪体内最重要的防御肽之一。

关键词：猪β防御素-2 转基因小鼠伤寒沙门氏菌抗病性

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神农架金丝猴粪便中致泻性大肠杆菌的分离鉴定及药敏分析

神农架金丝猴粪便中致泻性大肠杆菌的分离鉴定及药敏分析

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第十四届中南地区实验动物科技交流会

作者：汪乾坤童胜涛郭爱珍农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

目的了解神农架金丝猴粪便中致泻性大肠杆菌分离情况及菌株特征。方法对2013年7月至2014年3月从神农架采集的38只金丝猴的76份粪便样品(8份腹泻样品)进行大肠杆菌常规分离培养。观察分离细菌的培养特性和形态，进行生化试验、PCR分群... 详细信息

目的了解神农架金丝猴粪便中致泻性大肠杆菌分离情况及菌株特征。方法对2013年7月至2014年3月从神农架采集的38只金丝猴的76份粪便样品(8份腹泻样品)进行大肠杆菌常规分离培养。观察分离细菌的培养特性和形态，进行生化试验、PCR分群试验鉴定，然后对五种致泻性大肠埃希菌(EPEC、EHEC、ETEC、EIEC、EAEC)的12种毒力相关基因(eae、escV、bfpB、stxlA、stx2A、elt、estIa、estIb、invE、astA、aggR、pic)合成引物进行毒力基因检测;再对已确定毒力基因的菌株进行大肠杆菌O抗原血清型鉴定、LD50试验及药敏分析。结果通过PCR扩增出eae、escV毒力基因，确定从两只腹泻金丝猴粪便中分离到两株非典型致病性大肠杆菌(EPEC)。

关键词：金丝猴腹泻致泻性大肠杆菌分离鉴定药敏试验

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IVOC技术在动物感染性疾病研究中的应用

IVOC技术在动物感染性疾病研究中的应用

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第十四届中南地区实验动物科技交流会

作者：黎璐张庆德周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

目的动物实验是现代生物医学科学研究和教学中的重要手段。随着3R原则的提出，实验动物的替代方法在欧美国家受到了学者的高度关注。近年来，动物福利在我国的科研工作者中也受到了广泛支持，而采取合理有效的方法替代实验动物不仅符... 详细信息

目的动物实验是现代生物医学科学研究和教学中的重要手段。随着3R原则的提出，实验动物的替代方法在欧美国家受到了学者的高度关注。近年来，动物福利在我国的科研工作者中也受到了广泛支持，而采取合理有效的方法替代实验动物不仅符合动物福利原则，也能提高实验效率，节省科研开支，能够将检测结果标准化，形成统一规范的管理。在动物感染性疾病研究中，实验动物是病原微生物致病与免疫机制研究、疫苗和药物研发必不可少的工具。随着动物病原菌基因组的全面解析，新基因的功能研究利新保护性抗原的发掘进入了全基因组水平。

关键词： IVOC技术动物感染性疾病鼻腔气管

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弥猴结核IFN-γ体外释放检测法的建立与初步应用

弥猴结核IFN-γ体外释放检测法的建立与初步应用

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第十四届中南地区实验动物科技交流会

作者：汪乾坤姜勇童胜涛郝丽影胡长敏陈颖钰李翔任习东陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物科技学院湖北天勤猕猴繁育生物科技有限公司湖北武汉430072

目的本研究旨在建立猴结核IFN-γ体外释放检测法,用于二猴结核病的特异性诊断.方法克隆表达了猕猴IFN-γ基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得12株高效价的单克隆抗体.用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测猴IFN... 详细信息

目的本研究旨在建立猴结核IFN-γ体外释放检测法,用于二猴结核病的特异性诊断.方法克隆表达了猕猴IFN-γ基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得12株高效价的单克隆抗体.用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测猴IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到62.5 pg/mL.采集146份猕猴肝素钠抗凝全血,利用牛结核菌素(bPPD)和禽结核菌素(aPPD)体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA及商品化试剂盒平行检测所有样本.结果该方法与皮内变态反应的符合率为84.93％,与进口试剂盒的符合率为93.84％.结论该方法具有良好的应用价值.

关键词：猴结核猴IFN-γ 单克隆抗体 ELISA

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同位素标记相对和绝对定量蛋白组技术研究进展

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生物技术通讯 2014年第2期25卷 295-300页

作者：孔汉金张克山刘永杰尚佑军吴斌刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院湖北武汉430070

近年来定量蛋白组学技术迅速发展,目前常用的有双向荧光差异凝胶电泳、同位素亲和标记、15N同位素标记、同位素标记相对和绝对定量和细胞培养条件下稳定同位素标记技术等。同位素标记相对和绝对定量技术以其高通量、高灵敏度、高重复性... 详细信息

近年来定量蛋白组学技术迅速发展,目前常用的有双向荧光差异凝胶电泳、同位素亲和标记、15N同位素标记、同位素标记相对和绝对定量和细胞培养条件下稳定同位素标记技术等。同位素标记相对和绝对定量技术以其高通量、高灵敏度、高重复性、高动态检测限和能对各种复杂样品进行相对和绝对定量研究等优势而备受研究者青睐,目前已发展到在同一实验中分析8组样品,增加了实验设计的灵活性。我们就同位素标记相对和绝对定量技术在定量蛋白组史中的地位作用、研究策略,以及在病毒致病机制研究和医药临床相关问题中的应用做简要综述。

关键词：定量蛋白质组学同位素标记相对和绝对定量病毒临床应用

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猪链球菌2型毒力因子gapdh基因的克隆·表达及与Hela细胞互作蛋白的筛选

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安徽农业科学 2014年第36期42卷 12821-12824页

作者：袁芳艳谭臣雷丽贝为成刘泽文郭锐段正赢杨克礼周丹娜田永祥湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北武汉430064 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

[目的]克隆并在大肠杆菌中表达猪链球菌2型毒力因子gapdh基因,寻找与GAPDH互作的受体蛋白。[方法]扩增猪链球菌2型甘油醛-3-磷酸脱氢酶gapdh基因并构建表达质粒p ET28a-gapdh。[结果]在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了约41 k Da的融合蛋... 详细信息

[目的]克隆并在大肠杆菌中表达猪链球菌2型毒力因子gapdh基因,寻找与GAPDH互作的受体蛋白。[方法]扩增猪链球菌2型甘油醛-3-磷酸脱氢酶gapdh基因并构建表达质粒p ET28a-gapdh。[结果]在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了约41 k Da的融合蛋白GAPDH。Western blot试验说明GAPDH具有良好的免疫学活性。利用新西兰大白兔制备抗GAPDH蛋白的多克隆抗体。运用配体重叠技术,在He La细胞中初步找到了一个与GAPDH蛋白作用的潜在受体蛋白。[结论]为进一步研究猪链球菌2型的分子致病机理奠定基础。

关键词： 2型猪链球菌原核表达多抗制备受体

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