检索结果-内蒙古大学图书馆

动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：万胜锋陈芳洲严伟东李文涛库旭钢胡翰何启盖华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉科前动物生物制品有限责任公司

轮状病毒是引起动物和人腹泻的重要病原,主要引起幼龄阶段动物和儿童发病,随着年龄的增长,动物体和人对轮状病毒的敏感性呈下降趋势[1]。近两年猪群腹泻病的流行病学调查中发现,猪A群轮状病毒是引起仔猪腹泻的主要原因之一,且多与猪流... 详细信息

轮状病毒是引起动物和人腹泻的重要病原,主要引起幼龄阶段动物和儿童发病,随着年龄的增长,动物体和人对轮状病毒的敏感性呈下降趋势[1]。近两年猪群腹泻病的流行病学调查中发现,猪A群轮状病毒是引起仔猪腹泻的主要原因之一,且多与猪流行性腹泻病毒混合感染[2]。IPEC-J2细胞是North Carolina大学的Helen Berschneider于1989年从新生小猪体内分离的猪空

关键词：猪轮状病毒无血清基因序列系统进化树分析中国分离株间接免疫荧光非洲绿猴肾细胞细胞病变分离鉴定

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N-糖基化对乙型脑炎病毒prME和NS1基因免疫效果影响的研究

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病毒学报 2012年第3期28卷 213-218页

作者：张子重汪雪宰俊杰孙乐强宋云峰陈焕春华中农业大学动物医学院动物传染病室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

prME和NS1为乙型脑炎病毒两个主要的免疫保护蛋白,且均为N-糖蛋白。为研究N-糖基化对乙型脑炎病毒免疫保护的作用,本研究用PCR介导的定点突变方法,分别消除乙型脑炎病毒prME和NS1基因的不同N-糖基化位点,并构建了prME和NS1突变基因的真... 详细信息

prME和NS1为乙型脑炎病毒两个主要的免疫保护蛋白,且均为N-糖蛋白。为研究N-糖基化对乙型脑炎病毒免疫保护的作用,本研究用PCR介导的定点突变方法,分别消除乙型脑炎病毒prME和NS1基因的不同N-糖基化位点,并构建了prME和NS1突变基因的真核表达质粒。将质粒免疫四周龄雌性小白鼠,经两次免疫后,采集血清检测体液免疫反应,最后对小鼠用强毒进行攻击,观察并记录免疫保护力。研究结果显示,与野生型prME基因免疫组相比,消除单个糖基化位点后prME基因诱导的ELISA抗体、中和抗体和免疫保护力均略有升高,而同时消除两个糖基化位点的则会降低。NS1基因消除单个糖基化位点后保护率高达到100%,但消除两个糖基化位点后则免疫保护率略有降低(75%)。通过本研究证明,N-糖基化在维系乙型脑炎病毒prME和NS1蛋白的免疫保护中具有重要的作用,单个糖基化的缺失可增强蛋白的免疫原性,而两个糖基都缺失后,则造成了免疫效率的降低。

关键词：乙型脑炎病毒 prME基因 NS1基因 N-糖基化免疫

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猪A群轮状病毒的分离与鉴定

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畜牧兽医学报 2012年第2期43卷 275-281页

作者：库旭钢张坤刘羽茜何启盖农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行... 详细信息

目前国内对猪轮状病毒的研究较少,作者旨在对猪A群轮状病毒进行分离与鉴定,为后续猪轮状病毒致病机理和分子生物学特性研究奠定基础。用胰蛋白酶处理RT-PCR检测猪A群轮状病毒病原阳性的临床腹泻粪样,然后接种长成单层的MA-104细胞,进行病毒分离传代。再对分离毒株进行常规RT-PCR鉴定和电镜观察,并对分离毒株的VP6、VP7和VP8基因进行测序及序列分析。结果成功分离猪A群轮状病毒TM-a株,经序列同源性分析发现,与TM-a株VP6、VP7和VP8基因同源性最高的毒株分别为中国北京人源LL3354株、印度人源RMC321株和日本野猪源GUB-71株,其相似性为96.0%、95.1%和97.0%。该TM-a株轮状病毒不同基因表现出与人源轮状病毒和猪源轮状病毒的高度同源性,推测猪A群轮状病毒可能在人畜间传播,发生基因重组现象。

关键词：猪A群轮状病毒分离鉴定

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N-糖基化对乙型脑炎病毒感染与增殖的影响

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农业生物技术学报 2012年第3期20卷 316-320页

作者：张子重汪雪宋云峰陈焕春华中农业大学动物医学院动物传染病室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

N-糖基化对于病毒的感染与增殖中均具有重要作用,切除病毒表面糖链或抑制病毒糖基化修饰的方法已成为登革热病毒等的潜在治疗方法。为阐明日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)表面的糖链在其感染和增殖过程中的作用,本... 详细信息

N-糖基化对于病毒的感染与增殖中均具有重要作用,切除病毒表面糖链或抑制病毒糖基化修饰的方法已成为登革热病毒等的潜在治疗方法。为阐明日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)表面的糖链在其感染和增殖过程中的作用,本研究用肽N-糖苷酶F(peptide N-glycosidase F,PNGase F)和内切糖苷酶H(endoglycosidase H,Endo H)处理乙型脑炎病毒,将酶切后的病毒用Western blot验证糖基化酶切的效果,将酶切的JEV接种BHK-21细胞进行蚀斑试验,观察蚀斑的大小及病毒滴度的变化情况。同时用衣霉素处理BHK-21细胞并同步接种JEV,进行蚀斑试验,观察蚀斑大小的变化与病毒增殖情况。结果显示,用Endo H和PNGase F处理JEV后,病毒形成的蚀斑均显著小于未处理的病毒对照,且病毒增殖滴度显著降低,说明病毒粒子表面的糖基化修饰对于病毒的侵染具有重要作用。衣霉素处理细胞后,病毒产生的蚀斑大小没有明显差异,但增殖滴度却显著降低,说明糖基化在JEV增殖过程中也具有重要的功能。本研究说明JEV的糖基化对于其感染和增殖均具有重要的作用,为开发抑制乙型脑炎病毒药物研究提供一个新的思路。

关键词：日本乙型脑炎病毒糖苷酶 N-糖基化感染增殖

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猪支原体肺炎亚单位疫苗的免疫应答

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中国兽医学报 2012年第4期32卷 529-533页

作者：马丰英姚睿玉邹浩勇刘新军何启盖华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐... 详细信息

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐剂为空白对照组来免疫BALB/c小鼠。检测小鼠血清、肺脏以及经蛋白刺激脾淋巴细胞的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4。结果显示,Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体水平极显著高于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.01);Ⅱ组IFN-γ水平极显著高于Ⅲ组,而Ⅱ组与Ⅰ组、Ⅰ组与Ⅲ组的IFN-γ水平无显著差异(P<0.05);但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的IL-4水平差异不显著(P<0.05),但都极显著高于对照组(P<0.01);肺的检测结果中猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4水平呈现一致性,都为Ⅱ组>Ⅰ组>Ⅲ组>对照组;而经刺激脾淋巴细胞检测结果为Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体和IFN-γ水平最高,而IL-4水平为Ⅲ组最高。由此可见,Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫途径,产生的猪支原体肺炎抗体水平最高;Ⅰ组亦能通过这2种免疫途径达到与Ⅲ组同样的免疫效果。

关键词：猪支原体肺炎亚单位疫苗免疫效果抗体 IFN-γ IL-4

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细胞致死膨胀毒素的结构,功能及应用前景

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 247-250页

作者：陈西申果张舒吴玉丛徐晓娟蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

细胞致死膨胀毒素（Cytolethaldistendingtoxin，CDT）是细菌毒素家族最新发现的一员^[1]，它是目前发现的唯一能够引起真核细胞分裂前期和静止期DNA双链断裂的细菌毒素，可导致真核细胞周期的不可逆性阻滞或者靶细胞凋亡^[2-4]。该毒... 详细信息

细胞致死膨胀毒素（Cytolethaldistendingtoxin，CDT）是细菌毒素家族最新发现的一员^[1]，它是目前发现的唯一能够引起真核细胞分裂前期和静止期DNA双链断裂的细菌毒素，可导致真核细胞周期的不可逆性阻滞或者靶细胞凋亡^[2-4]。该毒素是由Johnson和Lior首先发现于大肠杆菌（Eschenchiacoli）的培养液上清，

关键词：细菌毒素细胞分裂膨胀 DNA双链断裂结构应用功能细胞凋亡

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肉鸡胫骨软骨发育不良早期钙黏蛋白1(CDH1)差异表达研究

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畜牧兽医学报 2012年第4期43卷 642-646页

作者：田文霞李家奎王瑞覃平宁官保乔建钢李宏全毕丁仁潘思轶郭定宗华中农业大学动物医学院武汉430070 山西农业大学动物科技学院太谷030801 华中农业大学食品科技学院武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为研究福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)早期钙黏蛋白1(CDH1)的差异表达,基础日粮中添加福美双,在试验第1、2、6天,对试验鸡进行剖杀,迅速采取胫骨生长板放入4%多聚甲醛溶液于4℃固定,做CDH1免疫组化分析;... 详细信息

为研究福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)早期钙黏蛋白1(CDH1)的差异表达,基础日粮中添加福美双,在试验第1、2、6天,对试验鸡进行剖杀,迅速采取胫骨生长板放入4%多聚甲醛溶液于4℃固定,做CDH1免疫组化分析;提取对照组和饲喂福美双组的生长板总RNA,采用Real-time PCR对CDH1基因进行差异表达验证。结果钙黏蛋白1(CDH1/E-cadherin)基因在TD生长板表达上调,在对照和TD软骨生长板,其蛋白合成主要在前肥大、肥大区软骨细胞质,增殖区软骨细胞无表达,钙化区软骨细胞表达少,在饲喂福美双第1、2、6天其表达增加与定量PCR变化结果相一致,且在饲喂福美双第2、6天呈明显高表达。结果表明CDH1参与细胞黏附、血管入侵及调节Wnt/β-cat的信号传递,和其它分子共同调节软骨内骨化。

关键词：福美双肉鸡胫骨软骨发育不良钙黏蛋白1(CDH1) 差异表达

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猪FcRn胞浆尾区的克隆表达及多克隆抗体制备

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中国兽医学报 2012年第2期32卷 262-266,271页

作者：崔惠娟洪素梅陈志虎毕丁仁李自力华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

采用RT-PCR方法从猪肝脏总RNA中克隆猪FcRn基因,然后利用PCR技术亚克隆猪FcRn胞浆尾区(FcRn-CT),构建重组原核表达质粒KG-CT和pET32a-CT,分别在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,并利用Glutathione Sepharose 4B和HisTrap FF crude亲和层... 详细信息

采用RT-PCR方法从猪肝脏总RNA中克隆猪FcRn基因,然后利用PCR技术亚克隆猪FcRn胞浆尾区(FcRn-CT),构建重组原核表达质粒KG-CT和pET32a-CT,分别在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,并利用Glutathione Sepharose 4B和HisTrap FF crude亲和层析柱纯化目的蛋白。用纯化蛋白KG-CT免疫新西兰白兔,制备了多克隆抗体。利用纯化蛋白pET32a-CT建立了间接ELISA法,检测多抗效价达1∶32 000。Western blot检测结果表明该多抗特异性良好,为进一步研究FcRn在猪体内的表达分布及功能研究奠定了基础。

关键词：猪 FcRn胞浆尾区原核表达多克隆抗体

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结核分枝杆菌复合群四重PCR检测方法的建立及应用

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中国人兽共患病学报 2012年第4期28卷 333-337页

作者：程实陈伟陈颖钰陈军苗北平郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物科技动物医学院武汉430070 武汉市结核病防治研究所武汉430030

目的本文旨在建立一种能快速鉴定结核分枝杆菌复合群不同成员的多重PCR方法。方法针对结核分枝杆菌复合群4个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg2+浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条... 详细信息

目的本文旨在建立一种能快速鉴定结核分枝杆菌复合群不同成员的多重PCR方法。方法针对结核分枝杆菌复合群4个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg2+浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条件。结果扩增产物的大小分别为824bp、621bp、418bp和254bp,能特异性检测并鉴别出非结核分枝杆菌(824bp 1条带)、卡介苗(824bp和621bp 2条带)、牛分枝杆菌(824bp、621bp和254bp 3条带)和结核分枝杆菌(4条带)。检测灵敏度达到125fg。对42份牛结核菌素皮内变态反应阳性牛的肺淋巴结样本和115份肺结核病人的痰液样品进行了检测,其检出率或准确率明显高于传统方法。结论成功建立了多重PCR方法,能快速、准确地对结核分枝杆菌群进行种、型鉴别。

关键词：结核结核分枝杆菌牛分枝杆菌多重PCR 鉴别诊断

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猪圆环病毒2型的分离鉴定及优化培养

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中国畜牧兽医文摘 2013年第7期29卷 141-141页

作者：严伟东华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

为研究圆环病毒病的流行情况及防治奠定基础，从湖北省某些大型养猪场采集临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）病死猪的淋巴结、脾等组织病料，进行病毒分离和鉴定。对分离病毒进行了间接免疫荧光鉴定、电子显微镜鉴定、

关键词：猪圆环病毒2型分离鉴定优化培养断奶仔猪多系统衰竭综合征间接免疫荧光圆环病毒病电子显微镜流行情况

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