检索结果-内蒙古大学图书馆

华中农业大学学报 2025年第1期44卷 183-190页

作者：陈俊峰王璟靳玮柴进张家庆任巧玲邢宝松河南省畜禽繁育及营养调控重点实验室/河南省农业科学院畜牧兽医研究所郑州450002 农业农村部猪遗传育种重点开放实验室/农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/华中农业大学动物科技学院武汉430070

为进一步开展淮南猪分子选育,提升其生长速度和瘦肉率等经济性状,选取淮南猪胚胎期(days post coitus, dpc)第38、58、78天和出生后第21天4个发育阶段的淮南公猪背最长肌,开展全基因组甲基化测序并通过信号通路富集分析筛选调控肌肉发... 详细信息

为进一步开展淮南猪分子选育,提升其生长速度和瘦肉率等经济性状,选取淮南猪胚胎期(days post coitus, dpc)第38、58、78天和出生后第21天4个发育阶段的淮南公猪背最长肌,开展全基因组甲基化测序并通过信号通路富集分析筛选调控肌肉发育的甲基化差异的候选基因。结果显示,基因主体的CpG甲基化程度高于基因上下游2 kb序列的CpG甲基化,基因组元件中内含子、3'UTR和重复序列等甲基化程度最高。随着发育时间的增加,基因主体的CpG甲基化水平逐渐下降,上下游2 kb则是下降-上升-下降趋势。基因组元件中内含子区、3'UTR区和重复序列的甲基化水平都逐渐下降,启动子区则为下降-上升-下降趋势。信号通路富集分析显示,在淮南猪相邻的发育阶段38~58 dpc、58~78 dpc、78 dpc~21 d三者间的差异化均达到极显著水平,黏着斑信号通路存在CpG甲基化差异基因,且达到极显著水平(P值分别为0.000 9、0.000 4、0.000 1),细胞黏附连接信号通路存在CHH甲基化差异基因,且分别达到显著或极显著水平(P值分别为0.013 2、0.012 8、0.000 5),生物信息学分析结果显示,在2个信号通路中筛选到辅肌动蛋白Α4基因(actinin-4, ACTN4)和成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR1)基因。ACTN4基因调节肌动蛋白结合过程,在4个发育阶段的甲基化水平分别为55.75%、11.18%、10.18%、59.75%,FGFR1基因和肌肉细胞分化相关,在4个发育阶段的甲基化水平分别为0.81%、0.78%、7.52%、0.44%。以上结果表明,在淮南猪肌肉组织不同发育阶段筛选到的2个甲基化差异基因ACTN4和FGFR1可作为淮南猪肌肉发育候选基因进行分子育种。

关键词：淮南猪甲基化差异基因肌肉组织肌肉发育

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SP1/IGF2BP3轴对猪骨骼肌卫星细胞增殖的调控作用

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河南农业科学 2025年第3期54卷 129-138页

作者：黄雨馨王伟李一星唐中林广西大学广西南宁530004 中国农业科学院农业基因组研究所广东深圳518000 佛山鲲鹏现代农业研究院广东佛山528226 农业农村部畜禽生物组学重点实验室广东深圳518000 华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/农业农村部猪遗传育种重点实验室湖北武汉430070

为了探究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)对猪骨骼肌生长发育的影响,并解析其生物学功能和表达调控机制,为猪的遗传改良提供理论依据和候选基因,以猪骨骼肌卫星细胞为试验材料,通过RT-qPCR和蛋白质印迹检测细胞增殖标志基因P... 详细信息

为了探究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)对猪骨骼肌生长发育的影响,并解析其生物学功能和表达调控机制,为猪的遗传改良提供理论依据和候选基因,以猪骨骼肌卫星细胞为试验材料,通过RT-qPCR和蛋白质印迹检测细胞增殖标志基因PCNA、CDK4、Cyclin A2和MKI67的表达,采用EdU和CCK-8检测细胞增殖活力和速率,通过突变IGF2BP3基因启动子区SP1结合位点的双荧光素酶试验和ChIP试验探索转录因子SP1对IGF2BP3基因的表达调控机制。结果表明,在猪骨骼肌卫星细胞中敲低IGF2BP3后,细胞增殖标志基因的表达均明显上调,EdU阳性细胞比例增加,细胞增殖速率在48、72 h均明显提高。SP1结合位点的突变使双荧光素酶活性明显降低,而过表达SP1使双荧光素酶活性明显增强。SP1可与IGF2BP3基因启动子区结合。干扰SP1后IGF2BP3表达降低,而过表达SP1后IGF2BP3表达增加。过表达SP1能部分消除敲低IGF2BP3促进猪骨骼肌卫星细胞增殖的表型。综上,转录因子SP1与IGF2BP3基因相互作用,共同调控猪骨骼肌卫星细胞增殖。

关键词：猪骨骼肌 IGF2BP3 SP1 猪骨骼肌卫星细胞增殖

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锌指蛋白核酸酶的作用原理及其应用

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遗传 2011年第2期33卷 123-130页

作者：钟强赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070

锌指蛋白核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)因其能特异性识别并切割DNA序列以及可设计性,被用于基因定点突变和外源基因定点整合。目前,ZFN技术以其准确的靶位点设计能力和诱发高效率基因打靶的优势,越来越受到基因改造研究者的重视,... 详细信息

锌指蛋白核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)因其能特异性识别并切割DNA序列以及可设计性,被用于基因定点突变和外源基因定点整合。目前,ZFN技术以其准确的靶位点设计能力和诱发高效率基因打靶的优势,越来越受到基因改造研究者的重视,已经成功应用于动植物细胞、胚胎的基因改造。随着鉴定靶DNA高亲和力的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)实验技术日渐成熟,可以预见到不久的将来这项技术会在基因工程和育种中得到广泛应用。文章介绍了锌指蛋白识别DNA靶位点和ZFN介导的基因打靶(Double strand break gene targeting,DSB-GT)的原理,同时还综述了目前ZFN技术用于基因改造的研究进展。

关键词：锌指结构域锌指蛋白锌指蛋白核酸酶同源重组基因打靶

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shRNAs介导的Smad2基因在小鼠成纤维细胞NIH/3T3中表达的沉默

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解剖学报 2008年第5期39卷 661-665页

作者：郑嵘熊琪蒋思文左波李凤娥徐德全任竹青熊远华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

目的通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制。方法针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表... 详细信息

目的通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制。方法针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表达质粒,将shRNA表达质粒转染NIH/3T3细胞,采用半定量RT-PCR和Western blotting方法,检测shRNA表达质粒对Smad2表达的抑制效果。结果编号为2.4的shRNA-Smad2表达质粒能够显著降低Smad2的表达,同时发现由不同的shRNA-Smad2表达质粒组成的RNAi池,产生的抑制效果比单个RNAi表达质粒的抑制效果明显提高。结论成功地构建了特异、高效抑制Smad2表达的shRNA表达质粒。

关键词： RNA干扰基因沉默短发夹状RNA 转化生长因子β Smad2 免疫印迹法小鼠

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全基因组选择模型研究进展及展望

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畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 233-242页

作者：尹立林马云龙项韬朱猛进余梅李新云刘小磊赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学农业部猪遗传育种重点实验室武汉430070

全基因组选择是一种利用覆盖全基因组的高密度标记进行选择育种的新方法,可通过早期选择缩短世代间隔,提高育种值估计准确性等加快遗传进展,尤其对低遗传力、难测定的复杂性状具有较好的预测效果,真正实现了基因组技术指导育种实践。随... 详细信息

全基因组选择是一种利用覆盖全基因组的高密度标记进行选择育种的新方法,可通过早期选择缩短世代间隔,提高育种值估计准确性等加快遗传进展,尤其对低遗传力、难测定的复杂性状具有较好的预测效果,真正实现了基因组技术指导育种实践。随着芯片和测序技术日趋成熟,高密度标记芯片检测成本不断降低,全基因组选择模型的不断升级和优化,预测准确性不断提高,全基因组选择已成为动物遗传改良的重要手段和研究热点。目前,全基因组选择已经成为奶牛遗传评估的标准方法,并取得重要进展,在其它物种中的应用正在逐步开展。本文主要对全基因组选择的统计模型发展进行综述,总结全基因组选择在动物遗传育种中的应用现状,讨论当前存在的问题,并对全基因组选择模型的发展方向和应用前景进行展望。

关键词：全基因组选择育种基因组估计育种值模型

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猪Suv39h2基因的cDNA克隆及原核表达

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畜牧兽医学报 2009年第5期40卷 611-616页

作者：刘丽娜彭健郑嵘刘敏蒋思文华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室&农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

以人Suv39h2基因mRNA序列为基础,利用"电子克隆"获得猪的部分cDNA序列,并用RT-PCR技术从肌肉组织中扩增得到猪Suv39h2基因1 291 bp的cDNA序列,将其重组于pGEX-KG原核表达载体中,经酶切、序列鉴定正确后,用该重组质粒转化大肠... 详细信息

以人Suv39h2基因mRNA序列为基础,利用"电子克隆"获得猪的部分cDNA序列,并用RT-PCR技术从肌肉组织中扩增得到猪Suv39h2基因1 291 bp的cDNA序列,将其重组于pGEX-KG原核表达载体中,经酶切、序列鉴定正确后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21,经异丙基B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并用SDS-PAGE电泳进行检测,优化后的最佳条件为IPTG诱导4 h,其浓度为0.7 mmol.L-1,并主要以包涵体的形式存在。Western blotting检测发现在约66 ku处有一条特异带,与预测的大小一致。猪Suv39h2基因的克隆和表达研究,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。

关键词：组蛋白赖氨酸甲基转移酶猪Suv39h2基因克隆表达

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猪miR-206前体的克隆、表达及生物信息学分析

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畜牧兽医学报 2007年第5期38卷 425-431页

作者：陈俭海魏文娟肖骁赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070

研究骨骼肌中表达的miRNAs对深入探明骨骼肌生长发育的调控机制具有十分重要的意义。采用比较基因组学与生物信息学相结合的方法,从猪骨骼肌中克隆了猪miR-206的前体(Precursor),对该miRNA前体的二级结构及与其它物种序列的同源性进行... 详细信息

研究骨骼肌中表达的miRNAs对深入探明骨骼肌生长发育的调控机制具有十分重要的意义。采用比较基因组学与生物信息学相结合的方法,从猪骨骼肌中克隆了猪miR-206的前体(Precursor),对该miRNA前体的二级结构及与其它物种序列的同源性进行了分析。RT-PCR结果显示,该前体miRNA在猪大多数组织中均有表达,在骨骼肌中表达量最高。生物信息学分析表明miR-206前体序列在不同物种间具有较高的保守性。

关键词：猪 miR-206前体克隆表达

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猪HUMMLC2B基因第一内含子单核苷酸多态与胴体、肉质性状的相关分析

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农业生物技术学报 2008年第5期16卷 764-769页

作者：王军邓昌彦熊远左波李凤娥雷明刚郑嵘华中农业大学农业部猪遗传育种重点实验室和农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

快肌肌浆球蛋白轻链2(fast skeletal myosin light chain 2,HUMMLC2B或MYLPF)是一种钙结合蛋白,参与多种生命活动。实验获得克隆猪HUMMLC2B基因(GenBank登录号:DQ533994),并采用PCR-RFLP技术,分析了HUMMLC2B基因第1内含子中的MspⅠ酶切多态(T613C)在7个品种猪中的多态性分布;分析了多态性与36头长白猪、5个群体104头猪以及长白和5个群体之和的140头猪胴体性状和肉质性状间的相关,结果表明,在检测的猪群中除长白猪中A等位基因与B等位基因频率的比例为1∶2外,其余的均为B等位基因占绝对优势,且A等位基因纯合个体只在长白猪中检测到。在不同组合的相关性分析中,基因型效应与瘦肉率、眼肌高度、眼肌面积肌内脂肪和肌内水分等差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)。HUMMLC2B基因在12个猪器官或组织中均表达,在心脏和骨骼肌中表达量最高。

关键词：猪快肌肌浆球蛋白轻链2 PCR-RFLP 胴体性状肉质性状关联分析

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猪基因组选择“两步走”策略的计算机模拟评估

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中国农业科学 2021年第21期54卷 4677-4686页

作者：唐振双殷东尹立林马云龙项韬朱猛进余梅刘小磊李新云邱小田赵书红华中农业大学动物科技学院/农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/农业农村部猪遗传育种重点实验室/国家家畜工程技术研究中心全国畜牧总站

【背景】基因组选择育种自2001年被MEUWISSEN等提出以来,已广泛应用在奶牛、猪等重要家畜的育种中,并显著加快了其重要经济性状的遗传改良速度。2017年,在全国畜牧总站的组织协调下,在全国生猪遗传改良计划框架内,猪全基因组选择育种平... 详细信息

【背景】基因组选择育种自2001年被MEUWISSEN等提出以来,已广泛应用在奶牛、猪等重要家畜的育种中,并显著加快了其重要经济性状的遗传改良速度。2017年,在全国畜牧总站的组织协调下,在全国生猪遗传改良计划框架内,猪全基因组选择育种平台项目正式启动。【目的】尽管基因组选择在种猪选育中取得了良好的效果,基因分型技术的不断升级也带来了成本的持续下降,但对于我国多数核心育种场依然面临着基因芯片分型个体数量不足、基因组选择实施流程不完善等问题,限制了该技术的大规模推广应用。结合我国生猪育种的实际情况,研究提出了一种"终测选择-早期选择"的"两步走"基因组选择策略。"终测选择"指在终测结束后利用一步法基因组BLUP对后备猪进行遗传评估,当群体中芯片分型个体数量达到一定规模后进行"早期选择"。【方法】以杜洛克、长白和大白三个种猪品种真实的50K基因芯片数据作为基础群体对不同品种分别进行大群模拟,共模拟4个世代,前3个世代作为基础群体,第4个世代作为测试群体,每个个体模拟两个性状(中等遗传力性状和低遗传力性状),利用猪基因组选择育种平台基于HIBLUP软件计算不同品种、不同性状的育种值,比较一步法基因组BLUP和常规BLUP两种方法的预测准确性。根据测试群个体有无终测成绩对其基因组育种值影响大小来评估早期选择效果。【结果】分析表明在3个品种内中等遗传力性状的终测选择效果和早期选择效果均好于低遗传力性状。一步法基因组BLUP的选择准确性均优于常规BLUP的选择准确性,并且随着测试群中芯片分型个体数量的增加、群体规模的扩大,预测准确性越来越高。一步法基因组BLUP的早期选择效果好于常规BLUP,当群体中芯片数量达到2 000张时就可以开展早期选择,阉割排名后30%的个体,可以保证前1%的优秀个体不会被错误淘汰,并且随着芯片数量的增加、早期选择的效果会越来越好。【结论】基因组选择"两步走"的策略符合我国国情、容易在生猪育种中推广实施。当芯片数量较少时,可以开展"终测选择",一定程度上提高选择的准确性,提高育种效率;当芯片数量较多时,可以开展"早期选择",对排名靠后的猪只个体进行早期阉割,增加优秀个体的测定量,增大选择强度、加快遗传进展。"两步走"策略符合我国生猪产业基因组选择育种的实际需求,该策略的实施将有利于推动我国猪基因组选择的应用、加快种猪改良进程。

关键词：基因组选择猪两步走终测选择早期选择

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褪黑素的添加减轻猪精原干细胞的氧化损伤

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畜牧兽医学报 2021年第7期52卷 1880-1890页

作者：黄诚彧徐德全冯哲周玲刘敏华中农业大学动物医学院武汉430070 农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070 农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

旨在研究褪黑素(melatonin,MT)对体外培养猪精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的作用机制。本研究采集3头7日龄健康大白公猪睾丸,利用差速贴壁法获得SSCs。后经形态学观察、碱性磷酸酶染色、标记基因检测及免疫荧光染色鉴定后... 详细信息

旨在研究褪黑素(melatonin,MT)对体外培养猪精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的作用机制。本研究采集3头7日龄健康大白公猪睾丸,利用差速贴壁法获得SSCs。后经形态学观察、碱性磷酸酶染色、标记基因检测及免疫荧光染色鉴定后以SSCs作为试验材料,设置MT浓度梯度(0、50、250、500、1000μmol·mL^(-1))组处理SSCs,每组设3个重复(n=3),空白对照组加入0.1%DMSO处理,分别检测添加MT后猪SSCs的细胞活力、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及凋亡基因表达变化。结果显示:1)分离的克隆团细胞具有SSCs的生长特性,可被碱性磷酸酶染色并表达干细胞标志基因OCT4、SOX2和SSCs标志基因NANOG、PLZF、UCHL1;2)50μmol·mL^(-1)以上的MT在处理48 h后可显著提高SSCs的细胞活力(P<0.05);3)MT可显著降低猪SSCs内ROS水平(P<0.05),极显著增加细胞内GSH含量(P<0.01);4)MT可显著抑制猪SSCs内凋亡蛋白Bax和Caspase3的表达(P<0.05)。MT具有清除猪SSCs中的ROS,提高总GSH含量,抑制凋亡基因表达进而提高细胞活力的作用,可为养殖过程中提高公猪繁殖性能提供参考。

关键词：精原干细胞分离鉴定褪黑素氧化损伤细胞活力细胞凋亡

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