检索结果-内蒙古大学图书馆

华中农业大学学报 2025年第1期44卷 183-190页

作者：陈俊峰王璟靳玮柴进张家庆任巧玲邢宝松河南省畜禽繁育及营养调控重点实验室/河南省农业科学院畜牧兽医研究所郑州450002 农业农村部猪遗传育种重点开放实验室/农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/华中农业大学动物科技学院武汉430070

为进一步开展淮南猪分子选育,提升其生长速度和瘦肉率等经济性状,选取淮南猪胚胎期(days post coitus, dpc)第38、58、78天和出生后第21天4个发育阶段的淮南公猪背最长肌,开展全基因组甲基化测序并通过信号通路富集分析筛选调控肌肉发... 详细信息

为进一步开展淮南猪分子选育,提升其生长速度和瘦肉率等经济性状,选取淮南猪胚胎期(days post coitus, dpc)第38、58、78天和出生后第21天4个发育阶段的淮南公猪背最长肌,开展全基因组甲基化测序并通过信号通路富集分析筛选调控肌肉发育的甲基化差异的候选基因。结果显示,基因主体的CpG甲基化程度高于基因上下游2 kb序列的CpG甲基化,基因组元件中内含子、3'UTR和重复序列等甲基化程度最高。随着发育时间的增加,基因主体的CpG甲基化水平逐渐下降,上下游2 kb则是下降-上升-下降趋势。基因组元件中内含子区、3'UTR区和重复序列的甲基化水平都逐渐下降,启动子区则为下降-上升-下降趋势。信号通路富集分析显示,在淮南猪相邻的发育阶段38~58 dpc、58~78 dpc、78 dpc~21 d三者间的差异化均达到极显著水平,黏着斑信号通路存在CpG甲基化差异基因,且达到极显著水平(P值分别为0.000 9、0.000 4、0.000 1),细胞黏附连接信号通路存在CHH甲基化差异基因,且分别达到显著或极显著水平(P值分别为0.013 2、0.012 8、0.000 5),生物信息学分析结果显示,在2个信号通路中筛选到辅肌动蛋白Α4基因(actinin-4, ACTN4)和成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR1)基因。ACTN4基因调节肌动蛋白结合过程,在4个发育阶段的甲基化水平分别为55.75%、11.18%、10.18%、59.75%,FGFR1基因和肌肉细胞分化相关,在4个发育阶段的甲基化水平分别为0.81%、0.78%、7.52%、0.44%。以上结果表明,在淮南猪肌肉组织不同发育阶段筛选到的2个甲基化差异基因ACTN4和FGFR1可作为淮南猪肌肉发育候选基因进行分子育种。

关键词：淮南猪甲基化差异基因肌肉组织肌肉发育

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锌指蛋白核酸酶的作用原理及其应用

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遗传 2011年第2期33卷 123-130页

作者：钟强赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070

锌指蛋白核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)因其能特异性识别并切割DNA序列以及可设计性,被用于基因定点突变和外源基因定点整合。目前,ZFN技术以其准确的靶位点设计能力和诱发高效率基因打靶的优势,越来越受到基因改造研究者的重视,... 详细信息

锌指蛋白核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)因其能特异性识别并切割DNA序列以及可设计性,被用于基因定点突变和外源基因定点整合。目前,ZFN技术以其准确的靶位点设计能力和诱发高效率基因打靶的优势,越来越受到基因改造研究者的重视,已经成功应用于动植物细胞、胚胎的基因改造。随着鉴定靶DNA高亲和力的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)实验技术日渐成熟,可以预见到不久的将来这项技术会在基因工程和育种中得到广泛应用。文章介绍了锌指蛋白识别DNA靶位点和ZFN介导的基因打靶(Double strand break gene targeting,DSB-GT)的原理,同时还综述了目前ZFN技术用于基因改造的研究进展。

关键词：锌指结构域锌指蛋白锌指蛋白核酸酶同源重组基因打靶

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shRNAs介导的Smad2基因在小鼠成纤维细胞NIH/3T3中表达的沉默

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解剖学报 2008年第5期39卷 661-665页

作者：郑嵘熊琪蒋思文左波李凤娥徐德全任竹青熊远华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

目的通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制。方法针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表... 详细信息

目的通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制。方法针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表达质粒,将shRNA表达质粒转染NIH/3T3细胞,采用半定量RT-PCR和Western blotting方法,检测shRNA表达质粒对Smad2表达的抑制效果。结果编号为2.4的shRNA-Smad2表达质粒能够显著降低Smad2的表达,同时发现由不同的shRNA-Smad2表达质粒组成的RNAi池,产生的抑制效果比单个RNAi表达质粒的抑制效果明显提高。结论成功地构建了特异、高效抑制Smad2表达的shRNA表达质粒。

关键词： RNA干扰基因沉默短发夹状RNA 转化生长因子β Smad2 免疫印迹法小鼠

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猪Suv39h2基因的cDNA克隆及原核表达

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畜牧兽医学报 2009年第5期40卷 611-616页

作者：刘丽娜彭健郑嵘刘敏蒋思文华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室&农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

以人Suv39h2基因mRNA序列为基础,利用"电子克隆"获得猪的部分cDNA序列,并用RT-PCR技术从肌肉组织中扩增得到猪Suv39h2基因1 291 bp的cDNA序列,将其重组于pGEX-KG原核表达载体中,经酶切、序列鉴定正确后,用该重组质粒转化大肠... 详细信息

以人Suv39h2基因mRNA序列为基础,利用"电子克隆"获得猪的部分cDNA序列,并用RT-PCR技术从肌肉组织中扩增得到猪Suv39h2基因1 291 bp的cDNA序列,将其重组于pGEX-KG原核表达载体中,经酶切、序列鉴定正确后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21,经异丙基B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并用SDS-PAGE电泳进行检测,优化后的最佳条件为IPTG诱导4 h,其浓度为0.7 mmol.L-1,并主要以包涵体的形式存在。Western blotting检测发现在约66 ku处有一条特异带,与预测的大小一致。猪Suv39h2基因的克隆和表达研究,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。

关键词：组蛋白赖氨酸甲基转移酶猪Suv39h2基因克隆表达

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猪miR-206前体的克隆、表达及生物信息学分析

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畜牧兽医学报 2007年第5期38卷 425-431页

作者：陈俭海魏文娟肖骁赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070

研究骨骼肌中表达的miRNAs对深入探明骨骼肌生长发育的调控机制具有十分重要的意义。采用比较基因组学与生物信息学相结合的方法,从猪骨骼肌中克隆了猪miR-206的前体(Precursor),对该miRNA前体的二级结构及与其它物种序列的同源性进行... 详细信息

研究骨骼肌中表达的miRNAs对深入探明骨骼肌生长发育的调控机制具有十分重要的意义。采用比较基因组学与生物信息学相结合的方法,从猪骨骼肌中克隆了猪miR-206的前体(Precursor),对该miRNA前体的二级结构及与其它物种序列的同源性进行了分析。RT-PCR结果显示,该前体miRNA在猪大多数组织中均有表达,在骨骼肌中表达量最高。生物信息学分析表明miR-206前体序列在不同物种间具有较高的保守性。

关键词：猪 miR-206前体克隆表达

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褪黑素的添加减轻猪精原干细胞的氧化损伤

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畜牧兽医学报 2021年第7期52卷 1880-1890页

作者：黄诚彧徐德全冯哲周玲刘敏华中农业大学动物医学院武汉430070 农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070 农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

旨在研究褪黑素(melatonin,MT)对体外培养猪精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的作用机制。本研究采集3头7日龄健康大白公猪睾丸,利用差速贴壁法获得SSCs。后经形态学观察、碱性磷酸酶染色、标记基因检测及免疫荧光染色鉴定后... 详细信息

旨在研究褪黑素(melatonin,MT)对体外培养猪精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的作用机制。本研究采集3头7日龄健康大白公猪睾丸,利用差速贴壁法获得SSCs。后经形态学观察、碱性磷酸酶染色、标记基因检测及免疫荧光染色鉴定后以SSCs作为试验材料,设置MT浓度梯度(0、50、250、500、1000μmol·mL^(-1))组处理SSCs,每组设3个重复(n=3),空白对照组加入0.1%DMSO处理,分别检测添加MT后猪SSCs的细胞活力、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及凋亡基因表达变化。结果显示:1)分离的克隆团细胞具有SSCs的生长特性,可被碱性磷酸酶染色并表达干细胞标志基因OCT4、SOX2和SSCs标志基因NANOG、PLZF、UCHL1;2)50μmol·mL^(-1)以上的MT在处理48 h后可显著提高SSCs的细胞活力(P<0.05);3)MT可显著降低猪SSCs内ROS水平(P<0.05),极显著增加细胞内GSH含量(P<0.01);4)MT可显著抑制猪SSCs内凋亡蛋白Bax和Caspase3的表达(P<0.05)。MT具有清除猪SSCs中的ROS,提高总GSH含量,抑制凋亡基因表达进而提高细胞活力的作用,可为养殖过程中提高公猪繁殖性能提供参考。

关键词：精原干细胞分离鉴定褪黑素氧化损伤细胞活力细胞凋亡

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MicroRNA调控哺乳动物骨骼肌发育

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遗传 2017年第11期39卷 1046-1053页

作者：李新云付亮亮程会军赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

Micro RNA(mi RNA)是一类长度大约为22 bp的小分子非编码RNA,广泛存在于哺乳动物中,部分mi RNA表达具有时空和组织特异性。哺乳动物中mi RNA主要通过与靶基因3?UTR区结合抑制其翻译,调控机体生物学功能。mi RNA在哺乳动物骨骼肌发育中... 详细信息

Micro RNA(mi RNA)是一类长度大约为22 bp的小分子非编码RNA,广泛存在于哺乳动物中,部分mi RNA表达具有时空和组织特异性。哺乳动物中mi RNA主要通过与靶基因3?UTR区结合抑制其翻译,调控机体生物学功能。mi RNA在哺乳动物骨骼肌发育中发挥重要调节作用。哺乳动物骨骼肌发育是一个复杂的生物学过程,包括骨骼肌干细胞增殖、迁移、分化,成肌细胞增殖、分化、肌管融合,肌纤维肥大,能量代谢,纤维类型转换等。mi RNA参与骨骼肌发育的各个环节,通过靶向各个时期的关键因子调控骨骼肌发育。本文对mi RNA在骨骼肌发育中的调控作用进行了综述,以期为深入理解骨骼肌发育规律提供参考。

关键词： miRNA 骨骼肌肌源性祖细胞卫星细胞成肌细胞

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猪骨骼肌单根肌纤维的分离与鉴定方法

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农业生物技术学报 2017年第10期25卷 1714-1720页

作者：候晔胡岸张巧霞杜小勇李长春赵书红王海燕华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/农业部猪遗传育种重点开放实验室/生猪健康养殖协同创新中心华中农业大学信息学院

肌纤维是构成肌肉组织的基本结构单位,肉质主要受到肌纤维类型及其组成的影响。为丰富骨骼肌生长发育的体外研究模型,本研究选取刚出生的大白猪(Sus scrofa)后肢肌肉,利用胶原酶消化法分离出单根肌纤维,并采用RT-PCR和免疫荧光染色鉴定... 详细信息

肌纤维是构成肌肉组织的基本结构单位,肉质主要受到肌纤维类型及其组成的影响。为丰富骨骼肌生长发育的体外研究模型,本研究选取刚出生的大白猪(Sus scrofa)后肢肌肉,利用胶原酶消化法分离出单根肌纤维,并采用RT-PCR和免疫荧光染色鉴定不同肌纤维类型。对Ⅰ型胶原酶分离的单根肌纤维进行高倍镜镜检,肌纤维表面光滑并且有卵圆形凸起,其为前体骨骼肌卫星细胞,说明肌纤维具有良好活性并且其RNA未降解,可进行后续RNA微量提取实验。逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)结果表明,通过胶原酶消化法分离趾长伸肌的8根肌纤维为单根肌纤维,主要类型为快速酵解型(Ⅱb);并且通过慢速氧化型(Ⅰ)抗体对单根肌纤维进行免疫荧光染色验证RT-PCR结果的可靠性。本研究建立了一种简单、低成本的猪骨骼肌单根肌纤维的分离与鉴定方法,为进一步研究成熟骨骼肌细胞发育过程及其生物学功能提供了体外模型。

关键词：猪单根肌纤维胶原酶消化 RT-PCR 免疫荧光染色

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猪Pitx2c基因4个SNPs的鉴定及其与肉质性状的关联分析

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中国科学：生命科学 2011年第3期41卷 210-218页

作者：吴望军左波任竹青 Hapsari A.A.R 雷明刚徐德全李凤娥熊远华中农业大学动物科技学院农业部猪遗传育种重点开放实验室农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 Faculty of Animal Agriculture Diponegoro UniversityTembalang Campus-Semarang50275Indonesia

为研究猪Pitx2c基因与肉质性状的关系,在猪Pitx2c基因中共发现了8个SNPs位点,对其中的4个SNPs位点在4个商业猪种及8个中国地方猪种进行了等位基因频率检测,并在大白×梅山猪F2资源家系中进行了性状关联分析.结果显示,位点c.474C>... 详细信息

为研究猪Pitx2c基因与肉质性状的关系,在猪Pitx2c基因中共发现了8个SNPs位点,对其中的4个SNPs位点在4个商业猪种及8个中国地方猪种进行了等位基因频率检测,并在大白×梅山猪F2资源家系中进行了性状关联分析.结果显示,位点c.474C>T(P<0.01)及c.636C>T(P<0.05)与肉色(MCV1)存在显著或极显著相关;位点c.*37G>A及c.*47G>A与滴水损失(DLR)、系水力(WHC)及肉色(MCV1)均存在显著相关(P<0.05).连锁不平衡分析表明,临近的位点两两之间存在连锁不平衡(LD).单倍型分析显示,存在两种主要单倍型,并且两拷贝的单倍型-CCGG-有利于肉质的改善.

关键词：关联分析单倍型 Pitx2c 肉质猪

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Otterlace软件在猪全基因组序列人工注释分析中的应用

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遗传 2012年第10期34卷 1339-1347页

作者：张杰尚宗民曹建华樊斌赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070 湖北省襄阳职业技术学院生物工程学院生物工程系襄阳441050

2009年11月,美、英等国科学家宣布首次绘制出家猪的基因组草图。近两年,随着全基因组序列陆续释放,越来越多的测序片段得到正确拼接组装,从全基因组水平上对猪功能基因进行注释分析显得尤为迫切。文章以丝切蛋白1(Cofilin 1,CFL1)基因... 详细信息

2009年11月,美、英等国科学家宣布首次绘制出家猪的基因组草图。近两年,随着全基因组序列陆续释放,越来越多的测序片段得到正确拼接组装,从全基因组水平上对猪功能基因进行注释分析显得尤为迫切。文章以丝切蛋白1(Cofilin 1,CFL1)基因的注释过程为例,介绍了运用Sanger研究所开发的Otterlace软件对猪全基因组的免疫基因序列进行人工分析与注释。通过详细说明Zmap、Blixem和Dotter 3个注释工具的使用方法,并给出了注释过程的主要步骤,以期对Otterlace的应用起一个抛砖引玉的作用。运用Otterlace软件对243个免疫相关基因进行分析,其中180个基因得到完整或部分注释,这为后续深入开展这些基因的功能研究奠定了基础。

关键词：猪全基因组人工注释 Otterlace

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