检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：武文清杨豪刘松涛赵梦菲彭忠吴斌华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心农业微生物学国家重点实验室

引言嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是一种气单胞菌属的革兰氏阴性菌,在水体环境中广泛存在,可以感染鱼类,引起大规模的急性传染病,除此之外还可以感染哺乳动物,鸟类,两栖类[1],有资料证实可以感染人类[2],导致动物中毒、腹泻、败血...

引言嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是一种气单胞菌属的革兰氏阴性菌,在水体环境中广泛存在,可以感染鱼类,引起大规模的急性传染病,除此之外还可以感染哺乳动物,鸟类,两栖类[1],有资料证实可以感染人类[2],导致动物中毒、腹泻、败血症,是一种严重的"人-兽-鱼"共患病[3]。该菌不仅能给养殖业造成巨大的经济损失,对人类的健康也有损害。

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猪传染性胸膜肺炎的防控进展

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养殖与饲料 2021年第5期20卷 77-80页

作者：何啟云闫康贝为成华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 广西扬翔农牧有限责任公司广西贵港537100 华中农业大学动物医学院武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的猪的一种严重的呼吸道传染病,导致养猪业严重的经济损失,该病在世界各地广泛分布,在我国的流行日益严重。该病主要经呼吸道传播发病,猪和带菌猪是主要传染源;病猪临床表现以呼吸道症状为主,... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的猪的一种严重的呼吸道传染病,导致养猪业严重的经济损失,该病在世界各地广泛分布,在我国的流行日益严重。该病主要经呼吸道传播发病,猪和带菌猪是主要传染源;病猪临床表现以呼吸道症状为主,分为急性型、亚急性型和慢性型3种;急性和亚急性病例以纤维素性出血性胸膜肺炎为特点,慢性病例以纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征和隐性感染。随着养猪业的规模化发展,该病造成的危害日益严重,因此如何有效防控该病的发生,以此减少经济损失非常重要。本文就近年来猪传染性胸膜肺炎的防控进展进行综述,为提高猪传染性胸膜肺炎的防控效果、减少经济损失提供理论参考。

关键词：猪传染性胸膜肺炎胸膜肺炎放线杆菌防控

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鸡马立克氏病病毒和疫苗毒株PCR诊断方法的建立及其应用

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现代畜牧兽医 2022年第8期 50-54页

作者：周冬玉李国红靳泽华徐巧霞徐蓉张安定华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 农业农村部兽医诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430070 武汉科前生物股份有限公司湖北武汉430070 科技部动物疫病联合研究中心湖北武汉430070

研究旨在快速有效地诊断鸡马立克氏病(MD),区分MD血清Ⅰ型病毒(MDV-Ⅰ)与疫苗毒株。试验对Gen Bank发表的140余株MDV序列进行全基因组比对,选定MDV-Ⅰ型特有的meq基因设计1对引物,通过优化退火温度等条件建立了MDV-Ⅰ的PCR诊断方法,评... 详细信息

研究旨在快速有效地诊断鸡马立克氏病(MD),区分MD血清Ⅰ型病毒(MDV-Ⅰ)与疫苗毒株。试验对Gen Bank发表的140余株MDV序列进行全基因组比对,选定MDV-Ⅰ型特有的meq基因设计1对引物,通过优化退火温度等条件建立了MDV-Ⅰ的PCR诊断方法,评估该方法的特异性、灵敏度及重复性。结果显示,设定退火温度64℃、35个循环时,以MDV-Ⅰ型毒株为模板可扩增得到286 bp的片段;以CVI988或814疫苗毒株为模板时,可扩增得到463 bp的片段;该方法特异性强、灵敏度高,扩增结果稳定,可区分MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株。应用该方法诊断1例免疫后仍有MD症状的鸡,可同时扩增约286和463 bp的片段;2个片段的测序结果显示,扩增出的片段分别与MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株相匹配。研究表明,试验建立的PCR方法可快速有效地诊断MDV-Ⅰ型毒株感染鸡并筛选免疫失败的鸡群。

关键词：鸡马立克氏病马立克氏病病毒疫苗毒聚合酶链式反应

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猪繁殖与呼吸综合征的研究进展及防控措施

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猪业科学 2021年第11期38卷 78-82页

作者：张哲玮贝为成华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北洪山实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 广西扬翔农牧有限责任公司广西贵港537100 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染引起的一种以妊娠母猪发热流产、仔猪高死亡率和各年龄段猪呼吸功能障碍为主要特征的高度接触性传染病。目前,该病在全球范围内均有分布,对养猪业造成的经济损失不计其数。自1996年我国首次分离PRRSV到如今,该病已在我国横行了25年之久,却依旧无法有效防治。文章对目前国内外猪繁殖与呼吸综合征病原、流行病学、临床症状以及疫苗免疫和综合防控措施等方面的研究进展进行综述,以期为该病的防控提供科学依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗免疫防控措施

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鸡传染性贫血病毒湖北分离株XH16全基因组序列分析

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中国兽医杂志 2020年第12期56卷 1-4,8,I0001页

作者：靳泽华黄英王泽宇张安定华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 农业农村部兽医诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430070 科技部动物疫病联合研究中心湖北武汉430070

为了解鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因组特征及遗传变异情况,本试验对湖北某家禽养殖场中疑似CAV感染的肉鸡进行剖检,从其肝脏中分离得到1株病毒。通过聚合酶链式反应(PCR)试验验证为CAV,并将其命名为CAV-XH16。克隆该毒株全基因组,测序... 详细信息

为了解鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因组特征及遗传变异情况,本试验对湖北某家禽养殖场中疑似CAV感染的肉鸡进行剖检,从其肝脏中分离得到1株病毒。通过聚合酶链式反应(PCR)试验验证为CAV,并将其命名为CAV-XH16。克隆该毒株全基因组,测序拼接得到全基因组序列,并将该毒株与国内外已发表的其他病毒序列进行遗传进化分析。结果显示,该分离株具有高毒力毒株的分子特征,属于亚洲CAV分离株所属的主要亚群A1亚群。与中国分离株JL14023(NCBI登记号KY486145)有99.65%的相似性。本试验为CAV分子流行病学研究和新型疫苗研发提供了参考依据。

关键词：鸡传染性贫血病毒全基因组序列分析

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基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用

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畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 454-460页

作者：王俊伟陈芳洲库旭钢李畅何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料... 详细信息

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌*** BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。

关键词：猪圆环病毒3型 ORF2基因 Cap蛋白原核表达 ELISA检测

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三基因缺失重组弱毒株(PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2)不同途径免疫的效果分析

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中国预防兽医学报 2019年第12期41卷 1261-1267页

作者：吴昊牛伟杰王久红胡耀方姚伦库旭钢何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

为评价口服免疫猪伪狂犬病毒三基因缺失重组弱毒株PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2对母源抗体阳性保育猪的保护效果,本研究将该重组弱毒株通过口服和颈部肌肉注射两种不同途径免疫母源抗体阳性的断奶仔猪,通过ELISA方法测定血清PRV g... 详细信息

为评价口服免疫猪伪狂犬病毒三基因缺失重组弱毒株PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2对母源抗体阳性保育猪的保护效果,本研究将该重组弱毒株通过口服和颈部肌肉注射两种不同途径免疫母源抗体阳性的断奶仔猪,通过ELISA方法测定血清PRV gB抗体、PCV2 Cap抗体和IFN-γ水平,利用固定病毒-稀释血清的中和试验方法检测PRV中和抗体水平;免疫结束后攻毒,记录各组猪临床表现和病理变化、测定其鼻拭子和肛拭子中病毒排毒时间、病毒载量等指标。结果显示,整个免疫试验过程中,口服组与注射组猪的PRV gB抗体均维持阳性、血清中PRV中和抗体效价均高于1:4、IFN-γ含量在免疫后均能达到300 pg/mL以上,PCV2抗体阳性率则出现下降;而未免疫组猪在第7 d后gB抗体转阴,中和抗体效价低于1:4、IFN-γ含量维持在约250 pg/mL,PCV2抗体阳性率(母源抗体)持续到二免后28 d才开始下降。免疫后攻毒,检测结果显示,口服组与注射组比对照组猪提前2 d体温下降,提前7 d恢复采食,而对照组猪出现高温、打喷嚏、咳嗽、流鼻涕、食欲不振、精神沉郁和神经症状并持续至攻毒后第8 d,并于攻毒后第12 d开始采食;口服组与注射组猪排毒高峰在攻毒后第2 d^6 d,第12 d后均停止排毒,对照组猪排毒持续期大于14 d;脑组织病理切片观察可见,口服组与注射组猪脑组织中仅少量小胶质细胞和淋巴细胞增多,而对照组猪脑组织中出现胶质细胞结节、血管袖套现象、卫星现象、噬神经元现象等病理变化,对照组猪扁桃体隐窝腔内含有大量脱落的隐窝上皮细胞、白细胞和炎性渗出液,并有燕麦细胞增多。以上结果表明口服方式免疫该三基因缺失重组弱毒株能够使保育猪产生针对PRV的有效免疫应答,但并不能诱导高水平的PCV2抗体。本研究为PRV疫苗研发带来了新的方向,也为免疫途径提供了更多选择,同时首次证实了该缺失弱毒株口服和肌注均能提供相似的免疫保护效果。

关键词： PRV缺失弱毒株口服免疫免疫效果评价

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猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医学报 2019年第9期39卷 1667-1673页

作者：刘青芸国师榜周宁华琳陈焕春吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒... 详细信息

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好。该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64%,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54%,2种方法的符合率为81.08%。综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因 TaqMan实时荧光定量PCR

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应用基于重组慢病毒的CRISPR/Cas9技术构建基因突变的鸡DF1细胞

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华中农业大学学报 2019年第3期38卷 83-88页

作者：靳泽华谢梦利易辰阳黄英付磊王晓萍张安定华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/动物医学院/湖北省预防兽医学重点实验室/生猪健康养殖协同创新中心/农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室/科技部动物疫病联合研究中心武汉430070

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否... 详细信息

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否可以用于鸡细胞的基因编辑。扩增sgRNA靶向序列1 220 bp片段,经T7E1酶切琼脂糖凝胶分析可见约300 bp和900 bp大小的条带,表明感染sgRNA慢病毒的细胞mavs产生了突变。序列测定结果表明sgRNA靶向序列发生了多个碱基缺失的突变。以上结果表明基于慢病毒系统的CRISPR/Cas9技术可对鸡基因组进行编辑。

关键词： CRISPR/Cas9 慢病毒鸡DF1细胞基因编辑

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我国猪群中多杀性巴氏杆菌的基因型分析

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畜牧兽医学报 2019年第5期50卷 1064-1072页

作者：彭忠梁婉艾伟诚王斐华琳汤细彪陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430070

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、... 详细信息

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、气管、肝等样品中分离鉴定的Pm进行基因型分析,并对23种主要毒力基因进行检测。结果表明,当前在我国猪群中流行的Pm的荚膜基因型为A(48.85%)、D(42.75%)、F(2.67%),优势基因型为A和D;LPS基因型为L3(25.00%)和L6(75.00%)型,优势基因型为L6;MLST基因型为ST3(21.25%)、ST10(27.50%)、ST11(42.50%)、ST12(2.50%)、ST16(2.50%)、ST74(1.25%)及ST75(2.50%),优势基因型为ST3、ST10和ST11。如果将荚膜基因型、LPS基因型和MLST基因型组合起来看,当前在我国猪群中流行的Pm的主要基因型为荚膜:脂多糖:MLST基因型A:L3:ST3(20.00%)、A:L6:ST10(26.25%)及D:L6:ST11(42.50%)。毒力基因检测的结果发现部分毒力基因的分布表现出一定的"基因型偏好性"。结果提示,D:L6:ST11是我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌的主要基因型,可能与我国猪群中由多杀性巴氏杆菌导致的呼吸道疾病密切相关。

关键词：猪多杀性巴氏杆菌荚膜基因型脂多糖基因型 MLST基因型毒力基因

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