检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2009年第3期17卷 381-385页

作者：达来宝力格金卉刘璨颖陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

在筛选胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)转座突变体库时,发现hns基因缺失突变可显著增强APP血清1型生物被膜的形成,该基因编码一种DNA结合蛋白(组蛋白样类核结构蛋白,H-NS)。为了进一步研究H-NS对APP生物被膜形... 详细信息

在筛选胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)转座突变体库时,发现hns基因缺失突变可显著增强APP血清1型生物被膜的形成,该基因编码一种DNA结合蛋白(组蛋白样类核结构蛋白,H-NS)。为了进一步研究H-NS对APP生物被膜形成的影响,实验以APP血清1型4074株基因组DNA为模板,PCR扩增了408bp的hns基因编码区,并克隆到原核表达载体pET-28c中获得重组质粒pET28c-hns,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达和组氨酸亲和层析柱纯化获得大小约19kD的重组蛋白rH-NS。将不同浓度的rH-NS添加到hns突变株1-21及其亲本菌株4074的培养基中,用微孔板法测定生物被膜的形成。结果显示,在不添加rH-NS时,4074株不能形成可见的生物被膜,而1-21株形成明显的生物被膜;在添加0.1～0.3μmol/LrH-NS的情况下,1-21株生物被膜的形成量随着rH-NS浓度的升高而降低,而4074株随着rH-NS浓度的升高而升高;rH-NS添加量超过0.4μmol/L对两个菌株生物被膜形成未见明显影响。结果表明H-NS蛋白负调控APP生物被膜的形成,并呈现一定的剂量效应。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌重组组蛋白样类核结构蛋白(H-NS) 生物被膜形成

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猪流行性腹泻病毒变异株(CH/YNKM-8/2013)的分离鉴定和全基因组序列分析

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华中农业大学学报 2016年第4期35卷 93-99页

作者：吴美洲陈芳洲李中华万胜锋叶十一何启盖农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株特性,通过细胞培养、细胞病变(CPE)观察、RT-PCR、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定1株PEDV变异株(CH/YNKM-8/2013株)并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法,测得该毒株的全基因组序... 详细信息

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株特性,通过细胞培养、细胞病变(CPE)观察、RT-PCR、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定1株PEDV变异株(CH/YNKM-8/2013株)并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法,测得该毒株的全基因组序列(GenBank登录号为KF761675.1)。该毒株S基因N端比CV777毒株S基因的N端长9bp,包括15bp的插入和6bp的缺失,表明CH/YNKM-8/2013为变异毒株。同源性分析显示,该毒株的基因组序列与我国广东2011年分离毒株LC的同源关系最近,相似性为99.6%,与韩国毒株KNU-1305和美国毒株USA/Minnesota84/2013的序列相似性均为99.0%,而与CV777疫苗毒株的相似性较低,为96.7%。序列进化树分析表明该毒株和我国新近毒株、韩国及美国的变异毒株进化关系较近,而与我国之前流行的PEDV毒株以及疫苗毒株CV777处于不同分支。

关键词：猪流行性腹泻病毒变异毒株分离鉴定全基因组序列分析

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副猪嗜血杆菌Apd-ELISA抗体检测试剂盒的制备和初步应用

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畜牧兽医学报 2020年第9期51卷 2227-2237页

作者：田杨刘云宝马辉潘其聪肖静陈焕春蔡旭旺徐晓娟华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

旨在对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的黏附素蛋白(autotransporter passenger domain,Apd)ELISA抗体检测方法进行参数优化、临界值确定和应用评价,获得性能稳定的副猪嗜血杆菌病抗体检测试剂盒。首先通过猪的免疫攻毒试验获... 详细信息

旨在对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的黏附素蛋白(autotransporter passenger domain,Apd)ELISA抗体检测方法进行参数优化、临界值确定和应用评价,获得性能稳定的副猪嗜血杆菌病抗体检测试剂盒。首先通过猪的免疫攻毒试验获得HPS阴、阳性对照血清,优化Apd-ELISA的反应参数;然后用背景确认的阴、阳性血清确定其临界值,并对封闭液及酶标板的包装方式进行选择;最后用Apd-ELISA试剂盒对临床样品进行检测并与荷兰Biocheck的OppA-ELISA试剂盒进行比较。结果表明,抗原包被质量浓度为0.5μg·mL^-1、被检血清以1:200倍稀释后反应45 min以及二抗稀释度为1:15000时,Apd-ELISA的反应背景下降,区分度提高。根据背景确认的27份阳性和40份阴性血清的OD630 nm值以及临界值计算公式(S-N)/(P-N),得到Apd-ELISA的阴阳性临界值是0.33。证实用封闭液K封闭和真空包装的酶标板可以在50℃保存4 d(相当于在4℃保存22个月)。用Apd-ELISA试剂盒检测1179份临床血清,表明母猪、后备和育肥猪以及仔猪的HPS血清阳性率分别为83.76%、61.09%和27.48%。与荷兰的Biocheck试剂盒进行比较,发现Apd-ELISA与Biocheck试剂盒(OppA-ELISA)对HPS临床阴性血清和疫苗免疫血清检测的符合率为100%,对HPS临床阳性血清的符合率仅为4.76%(6/126)。然而,Apd-ELISA与OppA Western blot的阳性符合率可达到73.02%(92/126)。本研究获得了能有效区分HPS阴、阳性血清和稳定保存的Apd-ELISA抗体检测试剂盒,可用于HPS灭活疫苗免疫后的抗体检测和副猪嗜血杆菌病的血清抗体检测。

关键词：副猪嗜血杆菌 ELISA试剂盒抗体检测临界值封闭液

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猪链球菌2型PCR快速检测试剂盒的研制及初步应用

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中国兽医学报 2008年第7期28卷 787-790页

作者：赵战勤向敏薛云吴斌胡睿铭汤细彪金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和... 详细信息

根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和稳定性。试剂盒能从病料8 h增菌的混合菌群中快速检测出猪链球菌2型菌株。试剂盒对临床样本的检测结果表明,猪链球菌2型在我国猪群发生的链球菌病例中不占主导地位。

关键词：猪链球菌2型 PCR 试剂盒特异性敏感性

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Bt伴胞晶体毒素对小鼠体内不同时期日本血吸虫的作用

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华中农业大学学报 2005年第5期24卷 492-494页

作者：周艳琴姚宝安夏雪山赵俊龙孙明喻子牛华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物国家重点实验室武汉430070

血吸虫病是世界上最重要的人畜共患寄生虫病之一[1],当今世界上仍有74个国家6亿多人口在血吸虫的威胁之中,这些国家分布在亚洲、非洲、南美洲.……

关键词：苏云金杆菌杀虫晶体蛋白毒素日本血吸虫

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规模化猪场戊型肝炎病毒感染状况的调查与分析

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畜牧兽医学报 2010年第10期41卷 1268-1273页

作者：张厚勇陈东升张懿伍宜权何启盖刘正飞华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为调查规模化猪场中戊型肝炎病毒（HEV）感染和流行特征，首先在4个猪场采集血样80份，用酶联免疫吸附试验（EusA）检测抗-HEVIgG抗体。在此基础上，作者于2007—2009年采集规模化猪场肛拭子样品415份，及规模化猪场送检的临床病猪肝脏... 详细信息

为调查规模化猪场中戊型肝炎病毒（HEV）感染和流行特征，首先在4个猪场采集血样80份，用酶联免疫吸附试验（EusA）检测抗-HEVIgG抗体。在此基础上，作者于2007—2009年采集规模化猪场肛拭子样品415份，及规模化猪场送检的临床病猪肝脏样品135份，应用巢式PCR（RT—nPCR）方法进行HEVRNA检测，将PCR扩增产物测序，利用Neighbour—joining法进行进化分析。结果：4个猪场80份血清中HEV阳性血清56份，抗一HEV抗体阳性率高达60．0％以上。8个规模化猪场中有5个猪场的肛拭子检测到HEV，肛拭子阳性率8．43％（35／415）；从临床送检的发病猪采集的肝脏样品中HEV阳性率为15．55％（21／135）；HEVRNA最早检出日龄为7d，最晚检出日龄为84d。遗传进化分析表明：测序的38株阳性毒株之间同源性为92％～100％，均属于HEV基因4型。其中，从肛拭子中分离的毒株（FJ445406）与猪源毒株DQ279091株处在同一分支上；而肝脏中分离的毒株（GQ202266．1）和人源毒株处在一个亚支，属于4型中的同一亚型，表明该毒株与人源毒株亲缘关系较近。本研究表明华中地区猪群中普遍存在HEV感染，阳性率较高。本研究为规模化猪场HEV的防控提供了依据。

关键词：规模化猪场 HEV 流行病学

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用于单细胞转录组测序的紫花苜蓿根和叶原生质体提取方法研究

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中国草地学报 2023年第4期45卷 74-81页

作者：闫振飞何勇孙娟苗福泓马利超李硕林琳王增裕杨国锋青岛农业大学草业学院山东青岛266109 华中农业大学动物医学院农业微生物国家重点实验室湖北武汉430070

以紫花苜蓿种子为材料,研究了不同的酶解液浓度、渗透压、离心力对叶和根原生质体分离的影响,旨在获得高产量、高活性的原生质体悬浮液,以便能够使用10×Genomics平台进行单细胞转录组测序,进而了解植物细胞分化的轨迹。结果表明:... 详细信息

以紫花苜蓿种子为材料,研究了不同的酶解液浓度、渗透压、离心力对叶和根原生质体分离的影响,旨在获得高产量、高活性的原生质体悬浮液,以便能够使用10×Genomics平台进行单细胞转录组测序,进而了解植物细胞分化的轨迹。结果表明:适用于根的最佳酶解液浓度、甘露醇浓度、离心力分别为2%纤维素酶+1%离析酶、0.5 mol/L、300 g;适用于叶的最佳酶解液浓度、甘露醇浓度和离心力分别为1.25%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.5%离析酶、0.4 mol/L、180 g。在此条件下,根原生质体的产量和活性分别达到3.95×10^(6)个/g和81%,叶原生质体的产量和活性分别达到7.09×10^(6)个/g和71%,达到10×Genomics平台的上机标准,为进一步开展紫花苜蓿发育的分子细胞生物学研究奠定基础。

关键词：紫花苜蓿原生质体分离单细胞转录组测序 10×Genomics平台

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猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型RTX毒素I的N-端表达多肽具有良好的免疫原性

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生物工程学报 2006年第1期22卷 39-45页

作者：梅岭周锐卢海松贝为成刘维红林荔雯洪文洲陈焕春农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表... 详细信息

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表达产物ApxIA和ApxIAN均以包涵体的形式存在,Westem-blot检测证实两种表达产物均具有免疫反应性.将纯化的重组蛋白(rApxIA和rApxIAN)和提取的天然毒素ApxI(nApxI)分别经腹腔免疫BALB/c小鼠,于免疫前、免疫2周和4周后分别检测了ELISA抗体和毒素中和抗体水平,结果表明,rApxIAN免疫组的ELISA抗体显著低于rApxIA免疫组和nApxI免疫组,但rApxIAN免疫组血清中和试验中测定的溶血素单位与rApxIA及天然nApxI免疫组没有显著差异.第二次免疫2周后,用1个LD50的APP血清1型J101株和2型标准菌株攻击试验动物,rApxIAN免疫组对血清1型和2型菌株的保护率分别为80%和100%.

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxI毒素 N-端多肽原核表达免疫原性

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黄病毒入侵中枢神经系统的分子机制研究进展

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华中农业大学学报 2021年第4期40卷 85-93页

作者：陈浩威崔旻华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

临床上黄病毒可以引起中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病,易造成神经系统的后遗症。黄病毒可以通过血源性途径、特洛伊木马途径和神经轴突转运的方式跨越血脑屏障(blood brain barrier,BBB)。病毒穿越BBB进入CNS后,被病毒... 详细信息

临床上黄病毒可以引起中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病,易造成神经系统的后遗症。黄病毒可以通过血源性途径、特洛伊木马途径和神经轴突转运的方式跨越血脑屏障(blood brain barrier,BBB)。病毒穿越BBB进入CNS后,被病毒激活的内皮细胞、胶质细胞和神经细胞会释放大量的炎性因子和上调表达黏附分子,将白细胞募集到CNS,白细胞浸润携带更多病毒进入CNS。普遍认为胶质细胞和神经细胞产生的炎性因子是导致BBB通透性增大的主要诱因。本文对黄病毒破坏BBB入侵CNS的分子机制研究进展进行综述,以便更好地了解黄病毒的致病机制,更有效地防范黄病毒的蔓延。

关键词：黄病毒血脑屏障内皮细胞血液途径特洛伊木马途径神经炎症嗜神经性病毒虫媒传播疾病

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特异性抑制伪狂犬病毒EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选

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中国病毒学 2006年第6期21卷 565-570页

作者：习杨周锐郭洪胡勤芹方六荣陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP0... 详细信息

EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5’端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP。将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EP0基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。

关键词： siRNA 伪狂犬病毒 EPO

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