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中国兽医科学 2016年第2期46卷 149-156页

作者：吴美洲陈芳洲周春陵朱银杏库旭钢刘洋谭鑫姚丽何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

2015年10月,曾免疫过猪流行性腹泻-传染性胃肠炎-轮状病毒三联活疫苗的某规模化猪场中50多头母猪出现腹泻症状,大约有600头新生仔猪的死亡,其中1周龄发病仔猪的死亡率达到95%。主要的临床症状是消瘦、被毛粗乱无光泽、水样腹泻及呕吐。... 详细信息

2015年10月,曾免疫过猪流行性腹泻-传染性胃肠炎-轮状病毒三联活疫苗的某规模化猪场中50多头母猪出现腹泻症状,大约有600头新生仔猪的死亡,其中1周龄发病仔猪的死亡率达到95%。主要的临床症状是消瘦、被毛粗乱无光泽、水样腹泻及呕吐。通过临床调查、病理解剖观察、抗体检测、PCR检测和Sl基因、ORF3基因序列分析,确诊该病是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株引起,通过对仔猪血液中针对猪流行性腹泻(PED)的IgA和IgG抗体的ELISA方法检测发现,这些样品中IgA和IgG抗体水平较高,但仍然不能提供较好的免疫保护。采取母猪紧急接种YN144变异毒株制成的疫苗,配合迅速隔离发病猪只,加强保温和消毒等综合措施,迅速控制了该病。

关键词：猪流行性腹泻新型猪流行性腹泻病毒诊断控制分子特征

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丁型冠状病毒我国猪源株的遗传变异分析

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中国兽医科学 2016年第6期46卷 689-694页

作者：吴美洲陈芳洲朱银杏李中华库旭钢刘洋何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

猪丁型冠状病毒病(PDCo VD)是新近报道的呈现世界流行性的猪肠道病毒病。为掌握我国猪丁型冠状病毒(PDCo V)的遗传变异特征,本研究对2014年11月至2015年5月之间采集的我国3个省的10个猪场的64份样品进行了检测,并对8个PDCo V毒株的S基... 详细信息

猪丁型冠状病毒病(PDCo VD)是新近报道的呈现世界流行性的猪肠道病毒病。为掌握我国猪丁型冠状病毒(PDCo V)的遗传变异特征,本研究对2014年11月至2015年5月之间采集的我国3个省的10个猪场的64份样品进行了检测,并对8个PDCo V毒株的S基因全长以及其中一个毒株的全基因组序列进行了测序分析,PDCo V的检测率为23.4%,比猪流行性腹泻病毒(PEDV)的检测率17.2%要高,同时PDCo V的单独感染率为17.2%,与PEDV混合感染率是6.4%,系统进化树表明本试验中的SXD1毒株与之前我国香港报道的毒株HKU15-44和HKU15-155的同源性最近,而这些毒株可能来自于中国大陆地区,且Song等进行的回溯性检测检到了PDCo V,表明PDCo V是一种重要的猪病毒性腹泻病病原,早就存在但未被检出。S蛋白的第52位氨基酸编码基因的缺失可以作为区分我国PDCo V毒株和韩国以及美国PDCo V毒株的标记。同时PDCo V毒株基因组上的ORF1a、S基因和N基因的变异提示我国应加强PDCo V的监控,尽快研制出针对PDCo VD的疫苗。

关键词：猪丁型冠状病毒病猪丁型冠状病毒 S基因全基因组遗传变异

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基于16S rDNA高通量测序技术分析受水灾影响猪场水样的菌群特征

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2092-2100页

作者：洪勃孙琪李栋凡于学祥库旭钢何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括1... 详细信息

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括19份猪饮用水、22份场内积雨水和7份废弃污水,采用菌落计数和高通量测序技术,对样品的细菌总数和菌群丰度进行分析研究,同时对采集的水样开展消毒剂杀菌试验。结果发现:饮用水、积雨水和污水中的平均含菌量分别为1.55×10^(5)、1.88×10^(8)和3.70×10^(9)CFU·mL^(-1),其中污水中的细菌总数最多,其次为积雨水,饮用水中的细菌总数最少,但远超国家饮用水的安全标准。本研究在不同种类的水样中均检测到了链球菌属、埃希氏杆菌属、弓形杆菌属、不动杆菌属和假单胞菌属等潜在的致病菌属,以及嗜低温弓形杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和豚鼠气单胞菌等致病菌。杀菌试验显示,氯制剂终浓度达到2500mg·L^(-1),作用30 min即可杀灭积雨水和污水中所有的细菌。本研究发现,水灾后养猪场内的水样中含有多种致病菌,规模化猪场可选用含氯消毒剂对场内污染的水体进行消杀,以确保人和猪群的健康安全。

关键词： 16S rDNA 猪场洪水细菌

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细胞致死膨胀毒素的结构,功能及应用前景

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 247-250页

作者：陈西申果张舒吴玉丛徐晓娟蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

细胞致死膨胀毒素（Cytolethaldistendingtoxin，CDT）是细菌毒素家族最新发现的一员^[1]，它是目前发现的唯一能够引起真核细胞分裂前期和静止期DNA双链断裂的细菌毒素，可导致真核细胞周期的不可逆性阻滞或者靶细胞凋亡^[2-4]。该毒... 详细信息

细胞致死膨胀毒素（Cytolethaldistendingtoxin，CDT）是细菌毒素家族最新发现的一员^[1]，它是目前发现的唯一能够引起真核细胞分裂前期和静止期DNA双链断裂的细菌毒素，可导致真核细胞周期的不可逆性阻滞或者靶细胞凋亡^[2-4]。该毒素是由Johnson和Lior首先发现于大肠杆菌（Eschenchiacoli）的培养液上清，

关键词：细菌毒素细胞分裂膨胀 DNA双链断裂结构应用功能细胞凋亡

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检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争ELISA方法的建立

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农业生物技术学报 2008年第4期16卷 555-561页

作者：卢顺向敏吴斌赵战勤汤细彪但汉并张建民何华陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗... 详细信息

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体。经实验确定抗原包被浓度223 ng/mL,待检血清最佳稀释度1∶2,酶标单抗AH12工作浓度1∶3 200,血清抑制率大于50%为阳性。稳定性试验表明,批间和批内变异系数均小于10%。应用竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时检测50份已知血清和82份未知血清,已知血清检测结果显示两者阳性符合率为90%,阴性符合率为100%;未知血清检测结果显示竞争ELISA的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%。表明所建立的单抗竞争ELISA方法具有敏感、特异、稳定和简便等特点,在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值。

关键词：多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体单抗竞争ELISA 抗体检测

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致猪水肿病大肠杆菌毒力因子二重PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2008年第9期28卷 996-999页

作者：杨明柳吴斌汤细彪蔡利军刘国平蔡旭旺陈焕春华中农业大学动物医学院湖北省重点实验室/农业微生物国家重点实验室湖北武汉430070

本试验分别针对志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)B亚基和F18ab菌毛fedA亚基保守序列设计2对引物,扩增长度分别为230 bp和510 bp,通过条件优化,建立了一种快速鉴定致猪水肿病大肠杆菌同时确定其致病因子的二重聚合酶链式反应(PCR)检测方法... 详细信息

本试验分别针对志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)B亚基和F18ab菌毛fedA亚基保守序列设计2对引物,扩增长度分别为230 bp和510 bp,通过条件优化,建立了一种快速鉴定致猪水肿病大肠杆菌同时确定其致病因子的二重聚合酶链式反应(PCR)检测方法,对阳性扩增产物测序,结果都有很高的保守性。特异性试验和灵敏性试验表明:与其他6种猪常见致病菌(产毒多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、沙门菌和链球菌)无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为101cfu(D600为0.002)。通过该二重PCR检测方法对2004—2006年自猪肺、脑组织中分离的216株大肠杆菌进行鉴定,得到6株致猪水肿病大肠杆菌,其中3株既具有菌毛又产水肿毒素,另外3株仅产水肿毒素;菌毛阳性菌株占毒素阳性菌株的50%。

关键词：致猪水肿病大肠杆菌聚合酶链式反应水肿毒素 F18ab菌毛

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H5N1亚型禽流感病毒血凝素HA1蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面的展示及其对小鼠的免疫原性

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农业生物技术学报 2007年第3期15卷 371-377页

作者：刘梅卢林静黄军艳张书环毕丁仁孙明华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)S-层蛋白CTC表面展示系统研究了H5N1亚型禽流感病毒HA1蛋白在Bt细胞表面展示的可行性及其免疫原性。用部分血凝素基因(halp)替换S-层蛋白基因ctc中部且位于表面锚定序列slh下游的片段,构... 详细信息

利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)S-层蛋白CTC表面展示系统研究了H5N1亚型禽流感病毒HA1蛋白在Bt细胞表面展示的可行性及其免疫原性。用部分血凝素基因(halp)替换S-层蛋白基因ctc中部且位于表面锚定序列slh下游的片段,构建2个重组质粒pCTC-HA1P(含融合基因ctc-halp)和pCSHA1P(含融合基因csa-ctc-halp,csa表csaAB操纵元,其与S-层蛋白在细胞表面的锚定密切相关)。用电脉冲转化法将重组质粒转入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株BMB171中,获得2个重组菌株CH(含pCSHA1P)和BCCH(含pCTC-HA1P和pMIL-CSA(含csaAB操纵元))。用CH和BCCH的营养细胞作血凝和血凝抑制试验,结果表明CH和BCCH均成功地在细胞表面展示了目标外源抗原HA1。用CH和BCCH的营养细胞通过腹腔注射途径免疫小鼠,用ELISA测定血清抗体效价,结果显示2个重组菌株均具有免疫原性,其中CH的免疫效果强于BCCH。

关键词：苏云金芽胞杆菌 S-层表面展示 H5N1亚型禽流感病毒HA1蛋白热稳定性口服疫苗

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猪支原体肺炎亚单位疫苗的免疫应答

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中国兽医学报 2012年第4期32卷 529-533页

作者：马丰英姚睿玉邹浩勇刘新军何启盖华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐... 详细信息

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐剂为空白对照组来免疫BALB/c小鼠。检测小鼠血清、肺脏以及经蛋白刺激脾淋巴细胞的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4。结果显示,Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体水平极显著高于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.01);Ⅱ组IFN-γ水平极显著高于Ⅲ组,而Ⅱ组与Ⅰ组、Ⅰ组与Ⅲ组的IFN-γ水平无显著差异(P<0.05);但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的IL-4水平差异不显著(P<0.05),但都极显著高于对照组(P<0.01);肺的检测结果中猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4水平呈现一致性,都为Ⅱ组>Ⅰ组>Ⅲ组>对照组;而经刺激脾淋巴细胞检测结果为Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体和IFN-γ水平最高,而IL-4水平为Ⅲ组最高。由此可见,Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫途径,产生的猪支原体肺炎抗体水平最高;Ⅰ组亦能通过这2种免疫途径达到与Ⅲ组同样的免疫效果。

关键词：猪支原体肺炎亚单位疫苗免疫效果抗体 IFN-γ IL-4

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猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株的生物学特性及作为活疫苗表达载体的应用

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生物工程学报 2009年第1期25卷 29-36页

作者：赵战勤徐引弟吴斌程相朝李银聚汤细彪张春杰陈焕春河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C... 详细信息

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C500一致,符合猪霍乱沙门氏菌的表型特征;携带平衡表达质粒pYA3493的重组菌株ΔasdC500(pYA3493)与C500的生长速度没有明显差别;根据Reed-Muench法,测定ΔasdC500(pYA3493)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为1.1×107CFU,毒力稍低于C500;口服接种ΔasdC500(pYA3493)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别;携带重组质粒pYA-F1P2(含有支气管败血波氏杆菌抗原基因fhaB的TypeI区域和prn的R2区域)的重组菌株ΔasdC500(pYA-F1P2)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达外源保护性抗原。由此表明,ΔasdC500保留了亲本菌株C500的一系列生物学特征,并可高效表达外源抗原,可作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统开发基因工程重组疫苗。

关键词：沙门氏菌活疫苗载体 Asd^+平衡表达系统支气管败血波氏杆菌

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华中地区鸡源沙门菌分离鉴定及耐药性分析

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中国畜牧兽医 2019年第3期46卷 931-939页

作者：王迪轩高东阳张天姿刘维周祖涛徐晓娟蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了探明华中地区种鸡场沙门菌(Salmonella)的优势血清型和耐药情况,本研究从湖北、河南、湖南等省市22个规模化鸡场采集病鸡、死胚及弱雏组织样品3 724份,通过分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型试验确定分离菌种属及其血清型,并采用... 详细信息

为了探明华中地区种鸡场沙门菌(Salmonella)的优势血清型和耐药情况,本研究从湖北、河南、湖南等省市22个规模化鸡场采集病鸡、死胚及弱雏组织样品3 724份,通过分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型试验确定分离菌种属及其血清型,并采用Kirby-Bauer法对分离菌株进行了耐药性分析。结果显示,本试验从3 724份病料中共分离鉴定出124株沙门菌,其中79株为D群肠炎沙门菌(63.71%,79/124),34株为D群鸡白痢沙门菌(27.42%,34/124),8株为B群鼠伤寒沙门菌(6.45%,8/124),有3株沙门菌未能确定血清型。O抗原鉴定79株肠炎沙门菌和34株鸡白痢沙门菌为O9,8株鼠伤寒沙门菌为O4。H抗原鉴定79株肠炎沙门菌为Hg,m,8株鼠伤寒沙门菌为Hi。药敏试验结果显示,124株分离菌株对萘啶酸、氨苄青霉素、四环素和多西环素耐药率分别为95.97%(119/124)、91.94%(114/124)、57.26%(71/124)和70.16%(87/124);对复方新诺明和红霉素耐药率分别为25.81%(32/124)和12.10%(15/124);对氯霉素、庆大霉素、头孢噻肟和卡那霉素耐药率分别为6.45%(8/124)、1.61%(2/124)、1.61%(2/124)和0.81%(1/124);对左氧氟沙星、阿米卡星和多黏菌素B完全敏感。99.19%(123/124)的分离株至少对一种药物耐药,87.10%(108/124)的分离株表现多重耐药。本研究为华中地区养鸡场沙门菌的诊断及防控提供了数据支撑。

关键词：沙门菌分离鉴定血清型耐药性

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