检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2021年第1期48卷 117-123页

作者：林昌杰李婷唐鑫陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

乳腺癌是犬、猫等伴侣动物与人类常发疾病,作为人类及动物常患恶性肿瘤和主要致死肿瘤之一,其疾病负担仍呈逐步加重趋势,乳腺癌的预防及治疗形势愈加严峻。上皮间质转化(EMT)是乳腺癌发生发展中重要的生物学过程。EMT还可促进恶性肿瘤... 详细信息

乳腺癌是犬、猫等伴侣动物与人类常发疾病,作为人类及动物常患恶性肿瘤和主要致死肿瘤之一,其疾病负担仍呈逐步加重趋势,乳腺癌的预防及治疗形势愈加严峻。上皮间质转化(EMT)是乳腺癌发生发展中重要的生物学过程。EMT还可促进恶性肿瘤的侵袭、扩散及耐药,因此它在肿瘤的研究中日益受到关注,靶向于EMT是治疗乳腺癌的重要研究方向与热点。文章就EMT发生过程中细胞形态功能及标志物的变化、EMT分类及EMT与乳腺癌的关系分别展开论述,详细解析了EMT相关TGF-β/Smad、NF-κB及Wnt信号通路转导途径;随后对乳腺癌治疗药物研究进展,包括TGF-β/Smad通路抑制剂开发,相关药物、基因及细胞因子治疗前景、NF-κB通路与Wnt通路抑制剂的动物试验研究结果进行了详细论述;最后对乳腺癌的治疗发展与趋势进行了展望。深入认识信号通路调控乳腺癌EMT的生物学过程,明确其发生发展机制,寻找关键靶点及开发靶向药物,将为乳腺癌的精准治疗带来曙光。

关键词：乳腺癌上皮间质转化靶向治疗 TGF-β/Smad NF-κB Wnt

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禽多杀性巴氏杆菌脂蛋白E基因的原核表达及其对小鼠的免疫原性

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湖北农业科学 2011年第4期50卷 854-857页

作者：崔卫涛胡思顺王延昭周晓芬李自力肖运才毕丁仁华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

根据禽多杀性巴氏杆菌ATCC12 948株脂蛋白E基因(plpE)序列设计一对特异性引物,经PCR从禽多杀性巴氏杆菌C48-1株中扩增获得了全长plpE基因,大小约1kb。将plpE基因片段插入原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-plpE。转化大肠杆... 详细信息

根据禽多杀性巴氏杆菌ATCC12 948株脂蛋白E基因(plpE)序列设计一对特异性引物,经PCR从禽多杀性巴氏杆菌C48-1株中扩增获得了全长plpE基因,大小约1kb。将plpE基因片段插入原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-plpE。转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达获得了重组蛋白plpE。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白plpE约为37.8kD,与预期大小相符。Western blot检测结果表明,重组蛋白plpE能与C48-1菌体阳性血清发生特异性反应,用重组蛋白plpE免疫小鼠,二免后2周用10LD50 C48-1菌株攻毒即获得了100%的保护,表明该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步的交叉保护性试验研究和禽霍乱亚单位疫苗研制奠定了基础。

关键词：禽巴氏杆菌原核表达免疫原性

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检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 220-225页

作者：汪招雄何启盖刘丽娜刘正飞黄红亮陈焕春华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏... 详细信息

以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏度达15.6ng(0.156μg/mL),与乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪流感病毒(SIV)等无交叉反应。批间和批内变异系数较小,分别为6.39%和4.1%。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测,发现二者的符合率可达到77.4%,比PCR敏感。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可广泛应用于动物组织中PrV的检测。

关键词：双抗体夹心间接ELISA 单克隆抗体猪伪狂犬病毒Ea株

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抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定

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华中农业大学学报 2005年第3期24卷 222-225页

作者：汪招雄何启盖黄红亮刘正飞陈焕春华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1... 详细信息

将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1:212、1:212及1:100×212、1:100×212。特异性试验和免疫荧光结果显示,3G7E3和4A6F5仅与PRV反应,而与PPV、PRRSV、JEV和HCV等病毒不发生交叉反应;用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这2株分泌抗PRV单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。

关键词：伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体间接免疫荧光试验

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利用单抗免疫组化技术检测PCV-2 WH株在人工感染猪组织中的分布

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中国兽医学报 2010年第12期30卷 1576-1579页

作者：刘英玉刘晓丽廖荣斌郭海兵陈冬焕汪洋何启盖华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

将猪圆环病毒2型(PCV-2)WH株通过颈部肌注和滴鼻感染26日龄PCV抗体阴性仔猪,于攻毒后28 d剖杀,采集相关的神经组织、消化器官及免疫器官进行免疫组化SABC法检测、病理学观察及PCR检测。免疫组化结果显示,在攻毒猪的大脑和小脑、胃、十... 详细信息

将猪圆环病毒2型(PCV-2)WH株通过颈部肌注和滴鼻感染26日龄PCV抗体阴性仔猪,于攻毒后28 d剖杀,采集相关的神经组织、消化器官及免疫器官进行免疫组化SABC法检测、病理学观察及PCR检测。免疫组化结果显示,在攻毒猪的大脑和小脑、胃、十二指肠、淋巴结、脾脏、扁桃体、肺、肾、肝存在阳性信号,心脏无阳性信号。阳性信号主要位于淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆中,偶尔出现在细胞核内和上皮细胞中。免疫组化结果与病理学变化和PCR检测基本相符。结果表明,本试验建立的免疫组化SABC法,可用于定位PCV-2 WH株在体内不同组织器官中的分布情况。

关键词：猪圆环病毒2型免疫组化技术 HE染色 PCR技术

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狂犬病新型基因工程疫苗研究进展

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华中农业大学学报 2021年第3期40卷 75-84页

作者：柴本杰黄菲裴捷周明田大勇傅振芳赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070 上海青赛生物科技有限公司上海201506

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领... 详细信息

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。

关键词：狂犬病狂犬病病毒灭活疫苗弱毒疫苗核酸疫苗亚单位疫苗病毒样颗粒疫苗口服疫苗基因工程

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小鼠抑制素α亚基在杆状病毒表达系统中的表达和纯化

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中国兽医科学 2015年第12期45卷 1295-1299页

作者：李悦陈伟贞陈建国胡长敏刘东明丁明星韩丽华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf... 详细信息

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf9细胞,获得第一代重组杆状病毒(P1)。然后病毒连续传代2次,用RT-PCR鉴定重组的杆状病毒,用SDS-PAGE验证纯化后蛋白质的表达,并使用BCA蛋白质浓度检测试剂盒检测纯化后的蛋白质样品的质量浓度。结果表明,感染重组杆状病毒后的Sf9细胞能够明显看到细胞皱缩、碎裂等感染症状;RT-PCR能够扩增出1 272bp的条带,证明重组的杆状病毒构建正确;SDS-PAGE结果表明重组的杆状病毒能够表达出45ku的条带,与理论大小一致;利用BCA蛋白质浓度检测试剂盒测得纯化样品中蛋白质的质量浓度为(216.05±10.02)μg/mL。小鼠抑制素α亚基成功地在杆状病毒表达系统中被表达,为今后抑制素的广泛应用奠定了基础。

关键词：抑制素α亚基杆状病毒表达系统表达纯化

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牛分枝杆菌基因分型技术的研究进展

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 508-512页

作者：张永亮陈颖钰熊学凯祁明普郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

牛分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）是结核分枝杆菌复合群（Mycobacteriumtuberculosiscomplex，MTC）中的重要成员，是引起牛结核病（Bovinetuberculosis）的主要病原菌。牛结核病在2016年被国际兽医局列为须申报的14类牛传染病之一，... 详细信息

牛分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）是结核分枝杆菌复合群（Mycobacteriumtuberculosiscomplex，MTC）中的重要成员，是引起牛结核病（Bovinetuberculosis）的主要病原菌。牛结核病在2016年被国际兽医局列为须申报的14类牛传染病之一，它不仅影响了养牛业的健康发展，还严重地威胁动物性食品安全和人类的健康。

关键词：牛分枝杆菌基因分型技术动物性食品安全结核分枝杆菌牛结核病复合群病原菌传染病

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弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 527-531页

作者：江涛周艳琴刘琴聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

应用PCR技术从刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2(rhpotry protein 2)的部分基因,构建pGEX-KG-ROP2重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转入*** BL21CodonPlus中,在IPTG诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果表明,扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9%,该基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000,可被兔抗弓形虫免疫血清识别。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白ROP2 基因克隆原核表达

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猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点萤光素酶报告载体的构建与活性检测

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中国兽医学报 2010年第1期30卷 107-109,136页

作者：王荡方六荣罗锐谢立兰江云波陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或p... 详细信息

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或poly(dAT∶dAT)的刺激下,萤光素酶表达显著增加。本试验为进一步探讨猪β干扰素信号转导通路的研究奠定了基础。

关键词：猪β干扰素启动子 NF-κB结合位点萤光素酶报告质粒

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