检索结果-内蒙古大学图书馆

猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点萤光素酶报告载体的构建与活性检测

中国兽医学报 2010年第1期30卷 107-109,136页

作者：王荡方六荣罗锐谢立兰江云波陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或p... 详细信息

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或poly(dAT∶dAT)的刺激下,萤光素酶表达显著增加。本试验为进一步探讨猪β干扰素信号转导通路的研究奠定了基础。

关键词：猪β干扰素启动子 NF-κB结合位点萤光素酶报告质粒

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动物寄生线虫遗传多样性的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第5期33卷 387-392页

作者：殷方媛李法财赵俊龙胡敏华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

动物寄生线虫分子遗传标记的发展对兽医寄生虫学中的基础和应用研究领域有着重要意义。通过对线虫种群遗传多样性的研究,不仅能够为抗药性等位基因的扩散提供理论依据,而且对线虫病防治策略的制定具有指导作用。因此,本文就分子遗传标记... 详细信息

动物寄生线虫分子遗传标记的发展对兽医寄生虫学中的基础和应用研究领域有着重要意义。通过对线虫种群遗传多样性的研究,不仅能够为抗药性等位基因的扩散提供理论依据,而且对线虫病防治策略的制定具有指导作用。因此,本文就分子遗传标记(RFLP、RAPD、PCR-SSCP、AFLP、SSR和线粒体DNA)在寄生线虫遗传多样性研究中的应用进行综述。

关键词：动物寄生线虫遗传多样性分子遗传标记

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乙型脑炎病毒E基因自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答

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中国兽医科学 2009年第2期39卷 130-134页

作者：刘学芹李么明曹胜波叶静孙敏轩肖少波陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中... 详细信息

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pCDE)分别免疫试验小鼠,进行体液免疫和细胞免疫检测。结果表明,在诱导体液免疫方面,pCDE要优于pSE,但pSE却可以诱导更强的细胞免疫反应,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒自杀性DNA疫苗免疫

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表达乙型脑炎病毒PrM-E基因慢病毒载体的构建

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 342-346页

作者：陈龙杨晓红徐敏朱碧波陈焕春曹胜波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导29... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导293FT细胞。通过报告基因EGFP表达、间接免疫荧光和Western-blot检测,结果表明,上述三质粒共转染293FT细胞后,获得了假病毒,并且该假病毒可以高效转导正常293FT细胞。同时,PrM-E基因可以在被转导细胞中正确表达,从而为研制基于慢病毒载体的乙型脑炎病毒新型疫苗奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒慢病毒载体 PrM-E基因

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探索染色质三维构象的“工具箱”研究进展

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中国科学：生命科学 2020年第5期50卷 497-505页

作者：林达张斯姮张智慧徐伟泽洪萍李国亮曹罡华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物科学技术学院动物医学院武汉430070 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室武汉430070 华中农业大学信息学院武汉430070

三维基因组学是研究基因组三维空间结构与功能的一门学科.基于不同的研究目的和生物学问题,目前发展出了各种各样的三维基因组学研究方法,这些方法对推动三维基因组学发展有积极的影响.本文以三维基因组学的提出和发展过程为线索,对三... 详细信息

三维基因组学是研究基因组三维空间结构与功能的一门学科.基于不同的研究目的和生物学问题,目前发展出了各种各样的三维基因组学研究方法,这些方法对推动三维基因组学发展有积极的影响.本文以三维基因组学的提出和发展过程为线索,对三维基因组学的主要研究方法进行了系统地归类与介绍,包括基于测序技术(基于邻近连接)的Hi-C, capture Hi-C, single-cell Hi-C, DLO Hi-C, ChIA-PET, Hi-ChIP等;基于测序技术(不基于邻近连接)的ChIA-Drop, SPRITE, GAM;以及基于影像技术的seqFISH, CRISPRainbow, SABER amplifies FISH.最后,本文对染色体构象捕获技术的发展方向进行了简单的展望.

关键词：三维基因组学染色体构象 Hi-C DLO Hi-C ChIA-PET FISH

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四甲基秋兰姆二硫化物对肉鸡胫骨生长板超微结构的影响

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畜牧兽医学报 2013年第6期44卷 965-971页

作者：田文霞李家奎王瑞覃平宁官保乔建钢李宏全毕丁仁潘思轶郭定宗华中农业大学动物医学院武汉430070 山西农业大学动物科技学院太谷030801 华中农业大学食品科技学院武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本研究拟研究四甲基秋兰姆二硫化物(福美双)对肉鸡胫骨生长板超微结构的时序性影响。7日龄AA肉鸡饲喂含100mg·kg-1福美双的饲料48h,分别在8、9、13日龄剖杀试验鸡,迅速采取胫骨生长板放入2.5%戊二醛溶液于4℃固定,制备超薄切片,用... 详细信息

本研究拟研究四甲基秋兰姆二硫化物(福美双)对肉鸡胫骨生长板超微结构的时序性影响。7日龄AA肉鸡饲喂含100mg·kg-1福美双的饲料48h,分别在8、9、13日龄剖杀试验鸡,迅速采取胫骨生长板放入2.5%戊二醛溶液于4℃固定,制备超薄切片,用透射电镜做超微结构观察。结果发现:8日龄鸡增殖软骨细胞变圆、坏死,线粒体增多、稍肿胀、出现致密颗粒,内质网断裂扩张呈泡状,而9日龄时更为严重;在8、9日龄时,前肥大软骨细胞多数无完整的细胞结构、细胞质溶解、有疑似凋亡细胞,13日龄时,前肥大软骨细胞已有完整的细胞结构,但细胞器仍呈坏死状、分泌旺盛。由此可见,福美双在短时间内可导致胫骨生长板增殖细胞、前肥大软骨细胞坏死,且前肥大软骨细胞更易受损,影响了软骨细胞的正常发育,推测其可能引发能量代谢障碍,并干扰了细胞内信号转导,使细胞周期紊乱,从而引发肉鸡胫骨软骨发育不良。

关键词：福美双肉鸡胫骨生长板超微结构软骨细胞

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检测牛血吸虫病的重组LHD-Sj23蛋白乳胶凝集试验的建立

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湖北农业科学 2009年第9期48卷 2061-2065页

作者：赵清兰李友聂浩赵俊龙华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

利用原核表达的日本血吸虫重组LHD-Sj23蛋白作为抗原致敏乳胶,建立诊断牛血吸虫病的乳胶凝集试验(LAT)。用制备的乳胶抗原分别检测牛结核杆菌、牛泰勒虫、牛巴贝斯虫、牛口蹄疫、牛边虫、牛传染性支气管炎阳性血清,结果均为阴性,说明建... 详细信息

利用原核表达的日本血吸虫重组LHD-Sj23蛋白作为抗原致敏乳胶,建立诊断牛血吸虫病的乳胶凝集试验(LAT)。用制备的乳胶抗原分别检测牛结核杆菌、牛泰勒虫、牛巴贝斯虫、牛口蹄疫、牛边虫、牛传染性支气管炎阳性血清,结果均为阴性,说明建立的乳胶凝集方法具有良好的特异性。用所建立的LAT方法与ELISA方法同时检测169份牛血清,结果表明,建立的LAT方法的特异性为94.29%,敏感性为93.10%,两种方法的符合率为94.08%(P>0.05),差异不显著。用同一批乳胶抗原检测7份牛血清,5次检测结果一致,说明致敏的乳胶抗原是稳定的。保存期试验结果表明,致敏乳胶在25℃可保存1个月,在4℃可保存3个月。这表明建立的LAT方法稳定、特异性强、灵敏度高、操作简便快速,无需昂贵仪器,适宜在临床上推广应用。

关键词：牛血吸虫病重组LHD-Sj23蛋白乳胶凝集试验诊断

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猪水肿毒素A亚基基因表达产物的生物学特性及抗体检测ELISA方法的建立

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农业生物技术学报 2007年第3期15卷 378-382页

作者：赵战勤卢顺吴斌刘国平张建民何华何启盖金梅林陈焕春武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

根据TMpred生物学软件对SLT-ⅡeA亚基的蛋白质结构分析结果,表达了猪水肿毒素(SLT-Ⅱe)A亚基。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达产物以可溶形式存在,易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明,表达产物不能致死小白鼠,也... 详细信息

根据TMpred生物学软件对SLT-ⅡeA亚基的蛋白质结构分析结果,表达了猪水肿毒素(SLT-Ⅱe)A亚基。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达产物以可溶形式存在,易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明,表达产物不能致死小白鼠,也不具有Vero细胞毒性。体外细胞毒性中和试验表明,表达产物的兔抗血清能中和天然SLT-Ⅱe(中和度90.4℅)。在小鼠免疫保护力试验中,表达产物作为免疫原不能提供任何保护力。以表达产物为抗原建立检测SLT-Ⅱe抗体的间接ELISA方法,结果该方法对猪萎缩性鼻炎等9种常见细菌性疾病阳性血清的检测均为阴性,能特异性检测到人工感染猪水肿毒素8d仔猪的血清抗体IgG,对临床送检的1083份猪血清的检测阳性率为20.9℅。

关键词：猪水肿病猪水肿毒素生物学特性 ELISA

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猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

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畜牧与兽医 2014年第11期46卷 1-5页

作者：丁振江库旭钢闫贵伟陈淑华何启盖农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释... 详细信息

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释度为1∶10。该检测方法敏感性高,可重复性好。该研究建立的间接ELISA方法为母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒IgA抗体的检测提供了一种快速简便的诊断方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S1D蛋白乳汁 IgA 间接ELISA

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新疆伊犁地区捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性调查

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中国兽医杂志 2018年第9期54卷 8-11,I0002页

作者：杨新雷卫强邸文达王春群周彩显张宗泽方瑞周艳琴赵俊龙胡敏华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

为了了解新疆伊犁地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗药性情况,本课题组对该地区某绵羊场捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性进行了调查。在通过捻转血矛线虫ITS-2种特异性PCR鉴定为捻转血矛线虫... 详细信息

为了了解新疆伊犁地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗药性情况,本课题组对该地区某绵羊场捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性进行了调查。在通过捻转血矛线虫ITS-2种特异性PCR鉴定为捻转血矛线虫的基础上,分别扩增了27条捻转血矛线虫雄虫的Ⅰ型β微管蛋白基因,测序后对抗药性相关的167,198位点和200位点的单核苷酸多态性进行了调查研究。结果表明,该羊场的捻转血矛线虫种群的抗药性突变只发生在198位点和200位点,以198位点的抗药性突变为主,没有在167位点发现抗药性突变。共发现了4种基因型,198纯合敏感型及200位点纯合敏感型(20; 74. 07%)、198杂合抗药型及200位点纯合敏感型(3; 11. 11%)、198纯合敏感型及200位点杂合抗药型(2; 7. 41%)和198纯合抗药型及200位点纯合敏感型(2; 7. 41%)。该羊场捻转血矛线虫种群中存在198位点的纯合抗药型突变,说明有抗药性的风险,需要引起注意。本研究首次从分子水平报道了新疆伊犁地区捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因存在苯并咪唑抗药性突变,这对该地区以及其他类似地区的捻转血矛线虫病的防控以及抗药性的管理具有一定的指导意义。

关键词：捻转血矛线虫苯并咪唑抗药性 Ⅰ型β微管蛋白单核苷酸多态性

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