检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2019年第9期39卷 1868-1872页

作者：张文劲张文皓唐鑫李雨芮陈曦陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

牛支原体是一种能够感染任何年龄牛的致病微生物,导致患牛严重的呼吸系统疾病、生殖系统疾病、角膜炎、乳腺炎及关节炎等。1961年,首次从美国乳腺炎患牛中分离到了牛支原体[1],全球范围内均报道了由牛支原体感染导致奶牛乳房炎所造成的... 详细信息

牛支原体是一种能够感染任何年龄牛的致病微生物,导致患牛严重的呼吸系统疾病、生殖系统疾病、角膜炎、乳腺炎及关节炎等。1961年,首次从美国乳腺炎患牛中分离到了牛支原体[1],全球范围内均报道了由牛支原体感染导致奶牛乳房炎所造成的经济损失案例。在我国,于2008年首次在重症肺炎的患牛中发现了牛支原体[2],并在2011年完成了测序[3],比较基因组学分析表明牛支原体不同分离株之间毒力存在着明显差异[4-7]。

关键词：牛支原体牛支原体病传染病免疫学诊断研究进展

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表达H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-optiHA的构建及生物学特性

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中国兽医学报 2019年第7期39卷 1303-1309,1335页

作者：范桂芳徐守兴杨斓宋文博华琳吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 预防兽医学湖北省重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒r... 详细信息

为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA。对获得的重组病毒在多种细胞上的增殖特性、一步生长曲线、遗传稳定性以及对小鼠的安全性等生物学特性进行了研究。结果表明,构建的rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA重组病毒能够稳定表达HA蛋白,并且经过优化后,目的基因的表达量有明显提高。该重组病毒在ST、PK-15、Vero和BHK-21细胞上的增殖滴度均高于10-7.0/0.1mL,对PK-15细胞的敏感性最高。一步生长曲线结果表明,重组病毒的增殖特性未受影响。连续传代20代后,该重组病毒依然具有较好的遗传稳定性,并且对小鼠安全性良好。本研究为重组病毒rPRV-optiHA的进一步研究与应用奠定了基础。

关键词： PRV变异毒株猪流感病毒 HA基因生物学特性

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基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用

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畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 454-460页

作者：王俊伟陈芳洲库旭钢李畅何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料... 详细信息

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌*** BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。

关键词：猪圆环病毒3型 ORF2基因 Cap蛋白原核表达 ELISA检测

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关于当前人间新型冠状病毒肺炎疫情防控对我国养牛企业生产影响及其应对措施建议

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中国奶牛 2020年第2期 5-9页

作者：郭爱珍彭清洁胡长敏陈颖钰曹永强李家奎华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 武汉科前生物股份有限公司武汉430070 随州市弘大畜牧有限责任公司随州441300

自2020年1月以来,新型冠状病毒(简称“新冠”)肺炎疫情在局地爆发,隔离、封锁和交通管制已成为阻断人间传染源传播的重要防控措施。为摸清现阶段这些疫情防控措施对养牛业的影响,我们对全国38个养殖单位进行调查。调查结果显示,交通管... 详细信息

自2020年1月以来,新型冠状病毒(简称“新冠”)肺炎疫情在局地爆发,隔离、封锁和交通管制已成为阻断人间传染源传播的重要防控措施。为摸清现阶段这些疫情防控措施对养牛业的影响,我们对全国38个养殖单位进行调查。调查结果显示,交通管制给绝大部分养牛场饲料、兽药和疫苗等生产物资的供应带来障碍,湖北省尤其严重;并且产品(奶、牛、肉)加工和上市受阻。同时,有可能因牛群防疫计划不能正常实施、牛病不能及时处置等原因导致动物疫病爆发、长期倒奶导致环境污染等次生灾害。据此,我们对相关部门和养殖企业提出了应对措施和政策建议,以期为当前新型冠状病毒肺炎疫情下保持养牛业稳定发展提供数据和政策支持。

关键词：新型冠状病毒养牛业调查控制疾病

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应用基于重组慢病毒的CRISPR/Cas9技术构建基因突变的鸡DF1细胞

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华中农业大学学报 2019年第3期38卷 83-88页

作者：靳泽华谢梦利易辰阳黄英付磊王晓萍张安定华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/动物医学院/湖北省预防兽医学重点实验室/生猪健康养殖协同创新中心/农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室/科技部动物疫病联合研究中心武汉430070

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否... 详细信息

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否可以用于鸡细胞的基因编辑。扩增sgRNA靶向序列1 220 bp片段,经T7E1酶切琼脂糖凝胶分析可见约300 bp和900 bp大小的条带,表明感染sgRNA慢病毒的细胞mavs产生了突变。序列测定结果表明sgRNA靶向序列发生了多个碱基缺失的突变。以上结果表明基于慢病毒系统的CRISPR/Cas9技术可对鸡基因组进行编辑。

关键词： CRISPR/Cas9 慢病毒鸡DF1细胞基因编辑

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猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医学报 2019年第9期39卷 1667-1673页

作者：刘青芸国师榜周宁华琳陈焕春吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒... 详细信息

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好。该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64%,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54%,2种方法的符合率为81.08%。综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因 TaqMan实时荧光定量PCR

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浙江金华地区PCV2分子流行病学调查及遗传变异分析

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中国兽医学报 2019年第10期39卷 1890-1896页

作者：吴明臻江云波敖超杰于学祥库旭钢陈芳洲孙琪吴昊何启盖赵青华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 金华职业技术学院浙江金华321017

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)主要引起猪的多系统功能障碍性疾病,同时,还可侵害猪的免疫系统,造成猪免疫抑制,容易继发细菌及其他病毒感染,大大增加猪群的死亡率。为了解PCV2在浙江金华猪群中的分布与流行状况以及PCV... 详细信息

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)主要引起猪的多系统功能障碍性疾病,同时,还可侵害猪的免疫系统,造成猪免疫抑制,容易继发细菌及其他病毒感染,大大增加猪群的死亡率。为了解PCV2在浙江金华猪群中的分布与流行状况以及PCV2变异规律,对从浙江省金华猪场收集的3 433份血清进行PCR检测,结果显示,2012-2018年PCV2阳性率分别为10.16%,11.95%,8.50%,9.94%,6.19%,5.94%,8.28%,母猪阳性率最高为13.49%。本研究发现在2012年浙江金华地区PCV2优势毒株已经由PCV2b变为PCV2d,且全部为PCV2d-2。将得到的ORF2序列同已知的疫苗序列对比后,发现SH株与浙江金华目前PCV2主流毒株序列一致性最高,但抗原位点比较仍有5处差异,这可能会对疫苗效果产生影响,需要进一步验证。另外只有PCV2d在免疫显性诱饵表位上发生了突变,这可能是PCV2d成为主流的原因。

关键词：猪圆环病毒2型流行病学调查遗传变异分析

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4株猪流行性腹泻病毒的HA和HI试验

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中国动物检疫 2019年第9期36卷 78-82页

作者：郭恒科谭鑫库旭钢范盛先何启盖孟宪荣华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血... 详细信息

为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血凝(HA)试验;用已经鉴定为PEDV抗体阳性的血清和乳清分别进行血凝抑制(HI)试验。结果显示:4株PEDV毒株只与兔红细胞发生凝集反应;CV777、DR13毒株的HA现象需要用5μg/mL的胰蛋白酶进行预处理,但是YN13和YN144毒株的HA现象不需要胰蛋白酶作用;该凝集现象能够被PEDV抗体特异性抑制。结果表明,PEDV能够凝集兔的红细胞,不能凝集鸡和猪的红细胞,因而可以用兔红细胞建立PEDV的HA和HI试验方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒红细胞血凝试验血凝抑制试验红细胞醛化特异性

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转录组测序技术在猪繁殖与呼吸综合征病毒研究中的应用

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中国畜牧兽医 2019年第1期46卷 37-44页

作者：梁婉周丹娜彭忠杨克礼段正赢郭锐刘威吴斌陈文杰孟丽田永祥湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430064 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)能导致母猪繁殖障碍及仔猪呼吸困难等症状,严重威胁全球养猪业的健康发展。目前,PRRSV的致病机制及其与宿主的互作机理并不完全清楚。近年来,随着... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)能导致母猪繁殖障碍及仔猪呼吸困难等症状,严重威胁全球养猪业的健康发展。目前,PRRSV的致病机制及其与宿主的互作机理并不完全清楚。近年来,随着高通量测序技术的快速发展,转录组测序技术已被广泛应用于PRRSV的研究中,为深入解析PRRSV的致病机理及其与宿主的互作机制提供了一种全新的研究工具。作者从感染应答、蛋白功能、毒株、疫苗、抗病品种5个方面对近年来转录组测序技术在PRRSV研究中的应用进行了综述分析,对其筛选的差异表达基因(DEGs)和通路进行总结,以期为未来PRRSV转录组学研究提供参考。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 转录组测序差异表达基因通路

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我国猪群中多杀性巴氏杆菌的基因型分析

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畜牧兽医学报 2019年第5期50卷 1064-1072页

作者：彭忠梁婉艾伟诚王斐华琳汤细彪陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430070

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、... 详细信息

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、气管、肝等样品中分离鉴定的Pm进行基因型分析,并对23种主要毒力基因进行检测。结果表明,当前在我国猪群中流行的Pm的荚膜基因型为A(48.85%)、D(42.75%)、F(2.67%),优势基因型为A和D;LPS基因型为L3(25.00%)和L6(75.00%)型,优势基因型为L6;MLST基因型为ST3(21.25%)、ST10(27.50%)、ST11(42.50%)、ST12(2.50%)、ST16(2.50%)、ST74(1.25%)及ST75(2.50%),优势基因型为ST3、ST10和ST11。如果将荚膜基因型、LPS基因型和MLST基因型组合起来看,当前在我国猪群中流行的Pm的主要基因型为荚膜:脂多糖:MLST基因型A:L3:ST3(20.00%)、A:L6:ST10(26.25%)及D:L6:ST11(42.50%)。毒力基因检测的结果发现部分毒力基因的分布表现出一定的"基因型偏好性"。结果提示,D:L6:ST11是我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌的主要基因型,可能与我国猪群中由多杀性巴氏杆菌导致的呼吸道疾病密切相关。

关键词：猪多杀性巴氏杆菌荚膜基因型脂多糖基因型 MLST基因型毒力基因

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