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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第6期32卷 478-482页

作者：何莉赵俊龙胡敏华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院武汉430070

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA诱发而导致的同源m RNA高效特异性降解技术,已广泛运用于生命科学的各个领域。本文就RNAi的发现及其生物学意义、发生机制、在动物寄生线虫研究中的应用及其局限性等方面作一综述。

关键词： RNA干扰寄生线虫

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中药对奶牛乳腺炎作用机理及其防治研究进展

中药对奶牛乳腺炎作用机理及其防治研究进展

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第七届全国牛病防制及产业发展大会

作者：赖金伦刘玉辉陈颖钰胡长敏郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室湖北武汉430070

奶牛乳腺炎是奶牛场危害最大、花费最多、防治最难的疾病,长期阻碍我国乃至全球奶牛业的健康发展.抗生素疗法是世界各地治疗乳腺炎的首选疗法,但抗生素滥用导致病原微生物耐药及乳中抗生素残留,制约乳腺炎的防治并严重威胁人类食品及生... 详细信息

奶牛乳腺炎是奶牛场危害最大、花费最多、防治最难的疾病,长期阻碍我国乃至全球奶牛业的健康发展.抗生素疗法是世界各地治疗乳腺炎的首选疗法,但抗生素滥用导致病原微生物耐药及乳中抗生素残留,制约乳腺炎的防治并严重威胁人类食品及生命安全.中药是我国传统医学的瑰宝,生物成分多样,疗效确切,已广泛用于奶牛乳腺炎的临床防治.本文综述了中药在抑制病原微生物、解除乳腺炎症、调控炎性信号通路、促进乳腺上皮细胞增殖、增强机体免疫力,以及中药在防治奶牛乳腺炎应用方面的研究进展,供同行参考.

关键词：奶牛乳腺炎中药治疗药理机制疗效评价

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日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立

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生物工程学报 2014年第2期30卷 194-202页

作者：周景云汪雪裴超宋云峰陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的... 详细信息

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的编码区,构建了原核表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到可溶性的NS3蛋白酶,用镍亲和层析方法进行了纯化。建立了基于荧光共振能量转移的NS3蛋白酶活性检测方法,并确定了最佳的反应条件,对113个化合物进行了筛选,发现其中两个化合物对JEV NS3蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究为JEV NS3蛋白酶的活性研究及抑制剂筛选提供了一种操作方便、成本低廉的方法。

关键词：日本脑炎病毒 NS3蛋白酶可溶性表达酶活性抑制剂高通量筛选

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猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

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畜牧与兽医 2014年第11期46卷 1-5页

作者：丁振江库旭钢闫贵伟陈淑华何启盖农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释... 详细信息

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释度为1∶10。该检测方法敏感性高,可重复性好。该研究建立的间接ELISA方法为母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒IgA抗体的检测提供了一种快速简便的诊断方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S1D蛋白乳汁 IgA 间接ELISA

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猪A群轮状病毒VP6的表达及IgG抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

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动物医学进展 2014年第7期35卷 1-6页

作者：陈淑华库旭钢闫贵伟丁振江何启盖农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为建立猪A群轮状病毒抗体间接ELISA检测方法,用于开展对该病毒感染的流行病学调查和免疫抗体评估,进行了猪A群轮状病毒TM-a株内衣壳VP6基因的表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析。目的蛋白得到表达,大小约70ku,Western blot表明,该... 详细信息

为建立猪A群轮状病毒抗体间接ELISA检测方法,用于开展对该病毒感染的流行病学调查和免疫抗体评估,进行了猪A群轮状病毒TM-a株内衣壳VP6基因的表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析。目的蛋白得到表达,大小约70ku,Western blot表明,该蛋白与猪A群轮状病毒阳性血清反应。用该蛋白作为包被抗原,通过对条件优化,包被抗原浓度为2μg/mL,待检血清稀释倍数为1∶40倍,标记抗体的稀释倍数为1∶4 000倍,建立了检测猪轮状病毒血清IgG抗体的间接ELISA方法。用该方法检测临床样品142份,并与间接免疫荧光试验(IFA)对比,结果显示,两者阳性符合率为94.6%,阴性符合率为83.4%,总符合率为91.5%,表明该方法有效可行。用建立的方法检测临床上不同年龄阶段的猪血清639份,分析其临床感染情况。结果证明该方法可用于猪轮状病毒流行病学调查、猪群抗体水平评估。

关键词：猪轮状病毒内衣壳蛋白间接ELISA

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羊口疮病毒ORF125基因编码蛋白的结构预测及其在真核表达质粒转染细胞中的定位

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畜牧兽医学报 2014年第8期45卷 1375-1380页

作者：孔汉金张克山刘永杰尚佑军刘湘涛吴斌华中农业大学农业微生物国家重点实验室动物医学院武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在预测羊口疮病毒(ORFV)ORF125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位。设计引物PCR扩增ORF125基因,并将其定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pEGFP—ORF125。利用DNAStar和MEGA4.0元... 详细信息

旨在预测羊口疮病毒(ORFV)ORF125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位。设计引物PCR扩增ORF125基因,并将其定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pEGFP—ORF125。利用DNAStar和MEGA4.0元件分析不同毒株间ORF125基因的遗传进化关系,接着通过在线Expasy工具预测其二级结构并与Bcl-2家族成员进行比较。利用脂质体介导法转染山羊皮肤成纤维细胞(GSFs),经DAPI染色后在激光共聚焦显微镜下观察ORF125的亚细胞定位。结果显示:本次克隆的ORFV ORF125基因与国外公布的其他羊口疮毒株核苷酸水平相似性为97.1%~98.1%,与同属另外2株羊伪牛痘病毒相比,核苷酸相似性分别为84.1%(GQ329669)和85.6%(GQ329670);蛋白二级结构预测分析发现ORF125与Bcl-2家族成员α-螺旋位置相近,预测空间结构有很大的相似性;激光共聚焦显微镜观察发现ORF125在GSFs细胞质中呈弥散性分布。结果提示,羊口疮病毒ORF125基因非常保守,预测与Bcl-2蛋白有着相似的功能,重组质粒pEGFP-ORF125构建成功,ORF125基因在GSFs中得到表达,定位于细胞质中。

关键词：羊口疮病毒 ORF125序列分析亚细胞定位基因结构

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羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2014年第7期44卷 704-709页

作者：孔汉金张克山刘永杰尚佑军刘湘涛吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院湖北武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为制备抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体,应用PCR扩增羊口疮病毒B2L基因并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果显示,获得了4株稳定分泌抗羊口疮病毒... 详细信息

为制备抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体,应用PCR扩增羊口疮病毒B2L基因并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果显示,获得了4株稳定分泌抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体细胞株,其抗体亚类均为IgG1。Western-blot鉴定结果和间接荧光抗体试验表明,4株单克隆抗体均能特异性识别羊口疮病毒。经鉴定,4株单克隆抗体细胞培养上清效价为1∶640~1∶1 280,腹水效价为1∶25×211~1∶25×212。染色体计数表明,4株杂交瘤细胞均是SP2/0细胞与脾细胞的杂交产物。结果表明,抗羊口疮病毒单克隆抗体的成功制备,为进一步研究羊口疮病毒的生物学特性及羊口疮快速诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：羊口疮病毒杂交瘤单克隆抗体 ELISA 鉴定

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猪用疫苗种类与应用

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兽医导刊 2014年第1期 54-55页

作者：何启盖库旭钢吴斌陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

灭活疫苗、弱毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗与合成肽疫苗、转基因植物可饲疫苗，不同疫苗不同优缺点，一起认识猪用疫苗。

关键词：疫苗种类猪用应用基因工程疫苗弱毒活疫苗合成肽疫苗亚单位疫苗转基因植物

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现代奶业奶牛卫生保健体系建设

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中国奶牛 2014年第6期 1-5页

作者：郭爱珍华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

现代奶业是一种高度集约化的生产模式,该模式下的奶牛疾病更体现出宿主、病因、环境三联因素的共同作用,呈现一种旧病未除、新病不断出现的复杂局面,因此,牛病防控必须贯彻"预防为主,重点优先,统筹兼顾,综合防控"的基本原则... 详细信息

现代奶业是一种高度集约化的生产模式,该模式下的奶牛疾病更体现出宿主、病因、环境三联因素的共同作用,呈现一种旧病未除、新病不断出现的复杂局面,因此,牛病防控必须贯彻"预防为主,重点优先,统筹兼顾,综合防控"的基本原则。在此原则下的现代奶业奶牛卫生保健体系涉及保障动物健康的所有要素,如兽医卫生管理体制、保障动物健康的政策法规制度、兽医卫生行政管理系统和基本兽医卫生服务体系,其特点主要体现在分级防治、管办分离和专业服务三方面,着重建设基本兽医服务体系,企业或政府可采取外包或托管形式获得专业化兽医服务,最终目标是:拥有健全的奶业健康保健体系,保障养殖户/企业能普遍得到良好的兽医服务,保障重大疫病不再是主要的健康威胁和保障高效优质的奶业生产。

关键词：现代奶业奶牛卫生保健体系兽医卫生服务兽医卫生管理三联因素防控

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牛结核病防控技术研究进展

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中国奶牛 2014年第16期 1-7页

作者：陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物科技学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

随着牛结核病的控制和根除计划启动以来,牛结核病的防控技术也得到了较大的发展。最为传统的单一皮试法已不能满足高准确性的需求。目前较为成熟的技术包括比较皮试法、IFN-γ体外释放法、ELISA抗体检测法和胶体金抗体检测法。在根除计... 详细信息

随着牛结核病的控制和根除计划启动以来,牛结核病的防控技术也得到了较大的发展。最为传统的单一皮试法已不能满足高准确性的需求。目前较为成熟的技术包括比较皮试法、IFN-γ体外释放法、ELISA抗体检测法和胶体金抗体检测法。在根除计划中,对于牛结核病高风险国家,采用的检测手段应为具有高敏感性的技术,或通过多方法的平行试验减少漏诊的阳性个体;而对低风险国家,则应该采用具有高特异性的技术手段或通过多方法的系列试验进行监测,避免错杀阴性个体。此外,野生动物和屠宰场的监控在牛结核病的控制中也起着不容忽视的作用。本文就以上几种方法和目前各国较常用的防控策略进行了具体的阐述。

关键词：牛结核病防控技术防控策略皮试法 IFN-γ体外释放法抗体法

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