检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第5期46卷 789-795页

作者：贾爱卿刘维红郭爱珍陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着... 详细信息

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着质粒的消除而被消除。所鉴定的耐药基因有blaTEM、blaOXA-1、cat1、tet(B)、aacC2、aadA8b、dhfrXⅡ和sul1等。喹诺酮类药物的靶基因gyrA与parC位于染色体上。GyrA在耐药决定区第87位氨基酸突变(N78D),导致了喹诺酮类药物的耐药性逆转。敏感菌中扩增不到质粒毒力基因spv与rck。耐药性消除后的菌株17S1对小鼠的毒力降低(LD50增加10倍),在小鼠体内的增长与散速度也显著降低(P<0.05)。以上证据表明,鼠伤寒沙门氏菌的多重耐药性主要由质粒决定,研究开发新型质粒消除剂将对克服鼠伤寒沙门氏菌多重耐药性具有重要意义。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌耐药性质粒消除细菌毒力整合子

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猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株的生物学特性及作为活疫苗表达载体的应用

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生物工程学报 2009年第1期25卷 29-36页

作者：赵战勤徐引弟吴斌程相朝李银聚汤细彪张春杰陈焕春河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C... 详细信息

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C500一致,符合猪霍乱沙门氏菌的表型特征;携带平衡表达质粒pYA3493的重组菌株ΔasdC500(pYA3493)与C500的生长速度没有明显差别;根据Reed-Muench法,测定ΔasdC500(pYA3493)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为1.1×107CFU,毒力稍低于C500;口服接种ΔasdC500(pYA3493)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别;携带重组质粒pYA-F1P2(含有支气管败血波氏杆菌抗原基因fhaB的TypeI区域和prn的R2区域)的重组菌株ΔasdC500(pYA-F1P2)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达外源保护性抗原。由此表明,ΔasdC500保留了亲本菌株C500的一系列生物学特征,并可高效表达外源抗原,可作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统开发基因工程重组疫苗。

关键词：沙门氏菌活疫苗载体 Asd^+平衡表达系统支气管败血波氏杆菌

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日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立

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生物工程学报 2014年第2期30卷 194-202页

作者：周景云汪雪裴超宋云峰陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的... 详细信息

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的编码区,构建了原核表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到可溶性的NS3蛋白酶,用镍亲和层析方法进行了纯化。建立了基于荧光共振能量转移的NS3蛋白酶活性检测方法,并确定了最佳的反应条件,对113个化合物进行了筛选,发现其中两个化合物对JEV NS3蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究为JEV NS3蛋白酶的活性研究及抑制剂筛选提供了一种操作方便、成本低廉的方法。

关键词：日本脑炎病毒 NS3蛋白酶可溶性表达酶活性抑制剂高通量筛选

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三黄鸡CD154基因的克隆、序列分析与表达

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畜牧兽医学报 2007年第10期38卷 1032-1037页

作者：方亮肖少波江云波袁明涛马朝志李彬方六荣陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

CD154在抗原特异的T淋巴细胞和抗原提呈细胞的相互作用中发挥非常重要的作用。利用RT—PCR方法从三黄鸡的外周血单核细胞（PBMC）中克隆了鸡CD154基因全长cDNA，序列分析显示该基因cDNA全长819bp，可编码272个氨基酸。将克隆的鸡CD154全... 详细信息

CD154在抗原特异的T淋巴细胞和抗原提呈细胞的相互作用中发挥非常重要的作用。利用RT—PCR方法从三黄鸡的外周血单核细胞（PBMC）中克隆了鸡CD154基因全长cDNA，序列分析显示该基因cDNA全长819bp，可编码272个氨基酸。将克隆的鸡CD154全长cDNA克隆到原核表达载体pET-28a中获得表达质粒pET-28a—CD154，转化BL21（DE3）后未检测到特异性表达蛋白。进一步通过PCR获得去除信号肽（1～22aa）和跨膜区（23～46aa）的CD154基因片段（CD154d），并将其克隆到pQE80的6×His下游，在大肠杆菌中成功表达，获得分子量约27ku的融合表达蛋白6×His—CD154d。Western—blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。同时，将CD154基因全长cDNA插入真核表达载体pEGFP-C1的EGFP基因下游，获得真核表达质粒pEGFP—CD154，转染Hela细胞，荧光显微镜观察发现EGFP—CD154融合蛋白表达在细胞膜上，证实了鸡CD154的膜定位特性。本研究为进一步研究鸡CD154的结构与功能及其免疫佐剂效应奠定了基础。

关键词：鸡 CD154 克隆表达定位

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猪源产毒素多杀性巴氏杆菌HN-13株外膜蛋白H的基因克隆与特征(英文)

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农业生物技术学报 2007年第2期15卷 183-191页

作者：李良军黎璐李健张四化吴斌陈焕春周锐农业微生物学国家重点实验室动物病原分室华中农业大学动物医学院

传染性萎缩性鼻炎是养猪业中的一种重要的呼吸道传染病,产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是其重要的病原之一,外膜蛋白H(OmpH)在该菌的致病和免疫中发挥重要作用。以产毒素多杀性巴氏杆菌血清D型菌株HN-13基因组为模板,扩增... 详细信息

传染性萎缩性鼻炎是养猪业中的一种重要的呼吸道传染病,产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是其重要的病原之一,外膜蛋白H(OmpH)在该菌的致病和免疫中发挥重要作用。以产毒素多杀性巴氏杆菌血清D型菌株HN-13基因组为模板,扩增了ompH基因1020bp编码区,经过序列测定和生物信息学分析,发现OmpH蛋白具有典型的膜通道蛋白的特征。将ompH基因克隆到原核表达载体pET-28a中构建了重组表达质粒pET-ompH,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。用纯化的重组蛋白免疫家兔制备OmpH的抗血清,Western杂交显示抗血清能够与菌体蛋白发生特异性反应。以重组OmpH为包被抗原建立了间接ELISA方法,方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为2.89μg/mL,用56份参考阴性猪血清确定阴阳界限值为0.36(OD630)。用建立的ELISA方法对192份临床猪血清样品进行检测,结果显示OmpH抗体阳性率为51.6%(99/192),阴性率为48.4%(93/192)。研究为OmpH的进一步应用奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H 克隆表达结构预测

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素的细胞毒性研究

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畜牧兽医学报 2011年第12期42卷 1750-1755页

作者：陈西王湘如徐晓娟郭凤娟陈焕春蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列... 详细信息

本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列,针对cdtA、cdtB和cdtC基因序列设计引物,扩增的基因片段大小分别约为681、834和531bp。将靶基因克隆到原核表达载体pET28a中,再转化到*** BL21(DE3),IPTG诱导表达3h,SDS-PAGE和Western blot检测证实表达产物以包涵体形式存在,大小分别约36、34和28ku。通过体外重构毒素与PIEC细胞作用3h,继续培养72h观察细胞形态学变化。结果表明,CdtABC全毒素致PIEC细胞膨胀、空泡形成、细胞凋亡等,而其他试验组变化不显著。结果提示,CDT毒素可能在细菌感染与致病中发挥着重要作用。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素毒素细胞毒性

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沙门菌脂多糖的结构修饰及其效应的研究进展

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1392-1402页

作者：田艳红于江旭焦宇洲高东阳蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

沙门菌(Salmonella)是一种人畜共患病病原菌,对人类和动物的健康具有重大影响,同时给畜牧业造成了重大经济损失,因此其致病机制的深入研究是目前亟待解决的问题。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)位于沙门菌外膜,是一种重要的毒力因子,... 详细信息

沙门菌(Salmonella)是一种人畜共患病病原菌,对人类和动物的健康具有重大影响,同时给畜牧业造成了重大经济损失,因此其致病机制的深入研究是目前亟待解决的问题。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)位于沙门菌外膜,是一种重要的毒力因子,其结构的修饰会影响沙门菌免疫逃逸能力、抗性和毒力等多种特性。利用这一现象,人为修饰脂多糖后得到的突变体菌株可应用于沙门菌病的防控。此外,经修饰后的低毒性脂多糖因其具有免疫刺激性,因此可应用于疫苗佐剂。基于以上内容,本文将对沙门菌脂多糖的结构修饰及其效应、生物合成与转运、以及脂多糖的应用等方面进行综述,对于此研究进展的掌握有利于沙门菌致病机制的深入研究及沙门菌病的预防与控制。

关键词：沙门菌脂多糖结构修饰及效应生物合成及转运应用

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伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

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畜牧兽医学报 2008年第5期39卷 645-651页

作者：龙晓婷刘俊磊郭洪习杨邱德新陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化... 详细信息

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。

关键词：伪狂犬病毒潜伏感染地塞米松组织分布免疫组织化学染色

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重组蛋白H-NS对胸膜肺炎放线杆菌生物被膜形成的影响

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农业生物技术学报 2009年第3期17卷 381-385页

作者：达来宝力格金卉刘璨颖陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

在筛选胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)转座突变体库时,发现hns基因缺失突变可显著增强APP血清1型生物被膜的形成,该基因编码一种DNA结合蛋白(组蛋白样类核结构蛋白,H-NS)。为了进一步研究H-NS对APP生物被膜形... 详细信息

在筛选胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)转座突变体库时,发现hns基因缺失突变可显著增强APP血清1型生物被膜的形成,该基因编码一种DNA结合蛋白(组蛋白样类核结构蛋白,H-NS)。为了进一步研究H-NS对APP生物被膜形成的影响,实验以APP血清1型4074株基因组DNA为模板,PCR扩增了408bp的hns基因编码区,并克隆到原核表达载体pET-28c中获得重组质粒pET28c-hns,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达和组氨酸亲和层析柱纯化获得大小约19kD的重组蛋白rH-NS。将不同浓度的rH-NS添加到hns突变株1-21及其亲本菌株4074的培养基中,用微孔板法测定生物被膜的形成。结果显示,在不添加rH-NS时,4074株不能形成可见的生物被膜,而1-21株形成明显的生物被膜;在添加0.1～0.3μmol/LrH-NS的情况下,1-21株生物被膜的形成量随着rH-NS浓度的升高而降低,而4074株随着rH-NS浓度的升高而升高;rH-NS添加量超过0.4μmol/L对两个菌株生物被膜形成未见明显影响。结果表明H-NS蛋白负调控APP生物被膜的形成,并呈现一定的剂量效应。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌重组组蛋白样类核结构蛋白(H-NS) 生物被膜形成

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猪流行性腹泻病毒变异株(CH/YNKM-8/2013)的分离鉴定和全基因组序列分析

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华中农业大学学报 2016年第4期35卷 93-99页

作者：吴美洲陈芳洲李中华万胜锋叶十一何启盖农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株特性,通过细胞培养、细胞病变(CPE)观察、RT-PCR、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定1株PEDV变异株(CH/YNKM-8/2013株)并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法,测得该毒株的全基因组序... 详细信息

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株特性,通过细胞培养、细胞病变(CPE)观察、RT-PCR、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定1株PEDV变异株(CH/YNKM-8/2013株)并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法,测得该毒株的全基因组序列(GenBank登录号为KF761675.1)。该毒株S基因N端比CV777毒株S基因的N端长9bp,包括15bp的插入和6bp的缺失,表明CH/YNKM-8/2013为变异毒株。同源性分析显示,该毒株的基因组序列与我国广东2011年分离毒株LC的同源关系最近,相似性为99.6%,与韩国毒株KNU-1305和美国毒株USA/Minnesota84/2013的序列相似性均为99.0%,而与CV777疫苗毒株的相似性较低,为96.7%。序列进化树分析表明该毒株和我国新近毒株、韩国及美国的变异毒株进化关系较近,而与我国之前流行的PEDV毒株以及疫苗毒株CV777处于不同分支。

关键词：猪流行性腹泻病毒变异毒株分离鉴定全基因组序列分析

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