检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2010年第2期41卷 135-140页

作者：王荡方六荣梅小伟谢立兰陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本研究旨在探讨猪维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构特征及其在Ⅰ型干扰素信号通路中的作用.从猪外周血单核细胞中克隆猪RIG-Ⅰ全长cDNA,进一步构建猪RIG-Ⅰ全长及不同区域缺失突变体的真核表达载体,通过IFN-β,IRF3和NF-κB的荧光素酶报... 详细信息

本研究旨在探讨猪维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构特征及其在Ⅰ型干扰素信号通路中的作用.从猪外周血单核细胞中克隆猪RIG-Ⅰ全长cDNA,进一步构建猪RIG-Ⅰ全长及不同区域缺失突变体的真核表达载体,通过IFN-β,IRF3和NF-κB的荧光素酶报告系统分析猪RIG-Ⅰ在诱导Ⅰ型干扰素中的作用.结果表明,猪RIG-Ⅰ开放读码框全长为2 832 bp,编码943个氨基酸,与鸭嘴兽、大鼠、小鼠、猴、黑猩猩、人、马和牛RIG-Ⅰ相应序列的同源性为53.2%～83.2%.猪RIG-Ⅰ超表达能显著激活转录因子IRF3和NF-κB,并诱导IFN-β的产生.缺失猪RIG-Ⅰ的CARD区不仅不能激活下游信号,而且还负调控poly(I:C)诱导IFN-β的能力.结果提示RIG-Ⅰ是猪天然免疫系统中的一个模式识别受体,在Ⅰ型干扰素诱导的信号通路中具有重要作用.

关键词：猪 RIG-Ⅰ 克隆序列分析干扰素信号通路

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猪链球菌2型溶血素基因缺失菌株的构建及生物学特性的研究

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畜牧兽医学报 2010年第7期41卷 854-858页

作者：王雅张安定李冉胡攀刘成陈焕春金梅林华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

溶血素(SLY)在猪链球菌2型(SS2)侵入和裂解细胞的过程中发挥重要作用,被认为是SS2的一种重要的毒力相关因子。为了探讨SLY在2005年中国四川资阳分离强毒株SS205ZY致病过程中的作用,作者利用同源重组基因敲除法成功构建了SS205ZY的sly基... 详细信息

溶血素(SLY)在猪链球菌2型(SS2)侵入和裂解细胞的过程中发挥重要作用,被认为是SS2的一种重要的毒力相关因子。为了探讨SLY在2005年中国四川资阳分离强毒株SS205ZY致病过程中的作用,作者利用同源重组基因敲除法成功构建了SS205ZY的sly基因敲除突变菌株(Δsly)。并比较了菌株的溶血能力以及对小鼠的致病力。结果表明sly基因敲除后可导致猪链球菌裂解红细胞的能力显著下降,对小鼠的致病力也有一定程度的减弱,但仍表现较高的致病力。本研究结果提示SLY是猪链球菌裂解细胞的重要毒力相关因子,但造成SS205ZY的高致病性很显然与多种毒力相关因子的协同作用有关。

关键词：猪链球菌2型溶血素溶血活性致病力

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猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用

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畜牧兽医学报 2010年第8期41卷 1001-1005页

作者：张坤何启盖华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本试验旨在建立能同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(GAR)的多重RT-PCR检测方法。根据GenBank收录的PEDVM基因、TGEVN基因、GARVP7基因,利用软件Pri mer 5.0设计合成能分别特异性扩增PEDV、TGEV... 详细信息

本试验旨在建立能同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(GAR)的多重RT-PCR检测方法。根据GenBank收录的PEDVM基因、TGEVN基因、GARVP7基因,利用软件Pri mer 5.0设计合成能分别特异性扩增PEDV、TGEV、GAR相应基因的引物。利用这3对引物,作者建立了一种新的能够同时检测PEDV、TGEV和GAR的多重RT-PCR方法,并将这种方法和常规的RT-PCR进行了比较。实验室检测中,多重RT-PCR检测方法能够检测到35 pg的TGEV-PEDV-GAR三联苗的混合RNA。应用该方法检测了华中地区75份腹泻猪粪样,同时利用常规RT-PCR检测方法对该检测方法的敏感性和特异性进行了分析,结果表明该方法检测PEDV、TGEV、GAR的敏感性分别为92%、100%、100%,特异性均为100%。该方法敏感性高、特异性强,是一种新的检测PEDV、TGEV和GAR的方法。

关键词：多重RT-PCR PEDV TGEV GAR

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表达T^+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学特性

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微生物学报 2010年第1期50卷 91-97页

作者：赵战勤王臣丁轲李晓峰吴斌卢顺张春杰程相朝河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南农业大学牧医工程学院郑州450002

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其... 详细信息

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501,构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。研究结果表明重组菌株C501(pYA-PmtC)的生化特性、血清型和生长速度与亲本菌株C500一致;在没有选择压力的条件下,C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达30.5kDa的外源保护性抗原rPmtC。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106CFU,毒力稍低于C500(LD50为4.4×106CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别。【结论】本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC),为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。

关键词：猪霍乱沙门氏菌C500株产毒巴氏杆菌 Asd+平衡致死系统重组疫苗

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慢病毒载体介导的西尼罗河病毒prME蛋白的表达

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中国兽医科学 2010年第8期40卷 778-782页

作者：徐敏杨晓红陈龙李么明叶静陈焕春毕丁仁曹胜波华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

将西尼罗河病毒(WNV)的主要免疫原性基因prME插入HIV-1慢病毒载体pHR中,构建了转移质粒pHR-WNV/prME。在脂质体介导下,将该质粒与p△8.2、pVSV/G共转染293T细胞,48h后收获细胞上清。将上清转导正常的293T细胞,通过报告基因荧光观察、间... 详细信息

将西尼罗河病毒(WNV)的主要免疫原性基因prME插入HIV-1慢病毒载体pHR中,构建了转移质粒pHR-WNV/prME。在脂质体介导下,将该质粒与p△8.2、pVSV/G共转染293T细胞,48h后收获细胞上清。将上清转导正常的293T细胞,通过报告基因荧光观察、间接免疫荧光检测。结果表明,利用HIV-1慢病毒载体系统包装得到了假型病毒,可以高效转导293T细胞,并实现了WNVprME基因在被转导细胞中的表达,从而为基于慢病毒载体的WNV新型疫苗的研制奠定基础。

关键词：西尼罗河病毒 prME蛋白慢病毒载体表达

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利用单抗免疫组化技术检测PCV-2 WH株在人工感染猪组织中的分布

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中国兽医学报 2010年第12期30卷 1576-1579页

作者：刘英玉刘晓丽廖荣斌郭海兵陈冬焕汪洋何启盖华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

将猪圆环病毒2型(PCV-2)WH株通过颈部肌注和滴鼻感染26日龄PCV抗体阴性仔猪,于攻毒后28 d剖杀,采集相关的神经组织、消化器官及免疫器官进行免疫组化SABC法检测、病理学观察及PCR检测。免疫组化结果显示,在攻毒猪的大脑和小脑、胃、十... 详细信息

将猪圆环病毒2型(PCV-2)WH株通过颈部肌注和滴鼻感染26日龄PCV抗体阴性仔猪,于攻毒后28 d剖杀,采集相关的神经组织、消化器官及免疫器官进行免疫组化SABC法检测、病理学观察及PCR检测。免疫组化结果显示,在攻毒猪的大脑和小脑、胃、十二指肠、淋巴结、脾脏、扁桃体、肺、肾、肝存在阳性信号,心脏无阳性信号。阳性信号主要位于淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆中,偶尔出现在细胞核内和上皮细胞中。免疫组化结果与病理学变化和PCR检测基本相符。结果表明,本试验建立的免疫组化SABC法,可用于定位PCV-2 WH株在体内不同组织器官中的分布情况。

关键词：猪圆环病毒2型免疫组化技术 HE染色 PCR技术

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猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点萤光素酶报告载体的构建与活性检测

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中国兽医学报 2010年第1期30卷 107-109,136页

作者：王荡方六荣罗锐谢立兰江云波陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或p... 详细信息

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或poly(dAT∶dAT)的刺激下,萤光素酶表达显著增加。本试验为进一步探讨猪β干扰素信号转导通路的研究奠定了基础。

关键词：猪β干扰素启动子 NF-κB结合位点萤光素酶报告质粒

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奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析

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中国兽医学报 2010年第11期30卷 1495-1499页

作者：刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物科技学院湖北武汉430070

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同... 详细信息

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素对VSV的抗病毒活性为4.26×105U/mL,对IBRV的抗病毒活性为8.91×104U/mL。结果表明,重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。

关键词：奶牛 α-干扰素融合蛋白抗病毒活性

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梅花鹿γ-干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

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中国畜牧兽医 2010年第5期37卷 85-89页

作者：刘颖王冰于清龙熊家军杨利国陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室武汉430070 华中农业大学动物科技学院武汉430070

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上。利用磷酸... 详细信息

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI-neo-CerIFN-γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK-21)和牛肾细胞(MDBK)中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。

关键词：梅花鹿 γ-干扰素细胞系真核表达

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大肠杆菌P4 FliC蛋白结构分析及同源建模

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生物技术通报 2010年第10期26卷 143-148页

作者：李任峰田香勤何启盖胡建和赵坤李学斌王三虎河南科技学院动物科学学院新乡453003 新乡医学院医学研究中心新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室武汉430070

为了进一步认识大肠杆菌鞭毛蛋白(Escherichia coliFliC)的结构及功能,深入研究细菌鞭毛的生物学特性,采用生物信息学方法,对组成Escherichia coliP4 FliC蛋白质的理化性质、二级结构及三级结构等进行生物信息学分析,并在三级结构的基... 详细信息

为了进一步认识大肠杆菌鞭毛蛋白(Escherichia coliFliC)的结构及功能,深入研究细菌鞭毛的生物学特性,采用生物信息学方法,对组成Escherichia coliP4 FliC蛋白质的理化性质、二级结构及三级结构等进行生物信息学分析,并在三级结构的基础上进行同源建模。理化性质分析结果表明,***4 FliC蛋白为酸性结构蛋白,与沙门氏菌鞭毛蛋白性质较为接近,二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主要构件,其空间结构与Salmonella typhimurium的3a5xA蛋白相似性较高,以此为模板成功构建了可靠的三维结构分子模型。FliC蛋白为多种细菌的鞭毛蛋白,与细菌的运动功能关系密切,本研究为深入研究细菌的运动机制及致病机理奠定基础。

关键词：大肠杆菌鞭毛蛋白同源建模

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