检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2009年第7期25卷 104-108,116页

作者：李任峰田香勤何启盖王自良赵坤李学斌王三虎河南科技学院动物科学学院新乡453003 新乡医学院医学研究中心新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室武汉430070

摘要：为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌（Actionobacillus pleuropneumoniae，App）ApxⅡA基因的结构和功能，选取GenBank中6株不同App分离株，采用生物信息学方法对其ApxⅡA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对，并选择其中AY23228... 详细信息

摘要：为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌（Actionobacillus pleuropneumoniae，App）ApxⅡA基因的结构和功能，选取GenBank中6株不同App分离株，采用生物信息学方法对其ApxⅡA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对，并选择其中AY232288．1菌株（湖北分离株）ApxⅡA基因为研究对象，分析该基因所编码蛋白质的理化性质，并对其可能形成的二级结构及B细胞表位进行预测和分析。结果表明，6株不同App分离株ApxⅡA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为65．56％和88．42％，在AY232288．1菌株ApxⅡA蛋白的肽链中，745—751和801—807区段可能是其B细胞表位优势区。本研究首次利用生物信息学方法对ApxⅡA基因及其蛋白质结构进行了分析和预测，为ApxⅡA基因功能的深入研究及APP多表住疫苗的设计奠定了基础。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxIIA基因 B细胞表位

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梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定

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动物医学进展 2009年第11期30卷 1-5页

作者：刘颖刘冬光廖娟红于清龙熊家军杨利国陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学动物科技学院湖北武汉430070

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。... 详细信息

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104U/mL和4.61×104U/mL。结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。

关键词：梅花鹿 γ干扰素抗病毒活性

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检测多种动物弓形虫抗体的SPA-ELISA方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2009年第9期29卷 1163-1166页

作者：张东林惠煜周艳琴董海岚方瑞聂浩王正松赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 河南省南阳市兽医站河南南阳473010

利用重组弓形虫MIC3作为包被抗原，SPA作为偶联物建立了可检测多种动物弓形虫抗体的SPA—ELISA方法。确定了抗原最适包被质量浓度为2．6mg／L；血清最适稀释度为1：160，作用时间为45min；优化了酶标SPA工作浓度，作用时间及底物显色时... 详细信息

利用重组弓形虫MIC3作为包被抗原，SPA作为偶联物建立了可检测多种动物弓形虫抗体的SPA—ELISA方法。确定了抗原最适包被质量浓度为2．6mg／L；血清最适稀释度为1：160，作用时间为45min；优化了酶标SPA工作浓度，作用时间及底物显色时间。对已知阳性血清的检测下限可达1：6400，其敏感性是IHAT方法的50～100倍。对临床4种动物共332份血清进行检测，阳性率由高到低依次为：SPA-ELISA（39．4％）〉MAT（39．1％）〉IHAT（13．1％）。以上结果表明，SPA-ELISA不失为一种适用于多种动物弓形虫抗体检测的理想方法。

关键词：弓形虫重组MIC3 SPA—ELISA

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌flic基因的原核表达与生物学活性分析

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生物技术通报 2009年第2期25卷 103-106页

作者：李任峰田香勤何启盖王三虎郑玉姝胡建和赵坤河南科技学院动物科学学院新乡453003 新乡医学院形态学研究室新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室武汉430070

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型菌株基因组为模板,根据其鞭毛区与其它细菌高度同源性设计引物,利用PCR方法扩增鞭毛蛋白基因flic片段,将其亚克隆到pMD-18T载体中并进行PCR和酶切鉴定,再将其亚克隆与载体pGEX-kG分别双酶切和连接,构... 详细信息

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型菌株基因组为模板,根据其鞭毛区与其它细菌高度同源性设计引物,利用PCR方法扩增鞭毛蛋白基因flic片段,将其亚克隆到pMD-18T载体中并进行PCR和酶切鉴定,再将其亚克隆与载体pGEX-kG分别双酶切和连接,构建重组表达载体pGEX-flic,并将其转化大肠杆菌工程菌BL21进行原核表达。结果表明,目的基因片段长度为528bp,在大肠杆菌BL21中获得成功表达,且表达蛋白能与猪抗APP血清发生反应。为进一步研究细菌鞭毛的抗原性及其他功能提供参考。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌鞭毛蛋白诊断抗原

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猪胸膜肺炎放线杆菌flic蛋白二级结构与B细胞表位预测

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生物技术 2009年第4期19卷 13-15页

作者：李任峰田香勤何启盖赵坤姜金庆胡建和王三虎河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 新乡医学院医学研究中心河南新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室湖北武汉430070

目的:预测和分析猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,APP)鞭毛蛋白(flic)的二级结构和B细胞表位。方法:利用生物信息学方法对flic基因推导的氨基酸序列进行结构特征和B细胞表位预测分析。结果:flic蛋白为非稳定型脂蛋... 详细信息

目的:预测和分析猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,APP)鞭毛蛋白(flic)的二级结构和B细胞表位。方法:利用生物信息学方法对flic基因推导的氨基酸序列进行结构特征和B细胞表位预测分析。结果:flic蛋白为非稳定型脂蛋白,含有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点(39-42 SirD,164-167 SvkD)和3个蛋白质激酶C磷酸化位点(39-41 SiR,161-163 TsR、164-166 SvK)。该蛋白无信号肽,在21Ala^38Ala处存在跨膜区的可能性最大。flic蛋白的二级结构主要由无规卷曲区域、α-螺旋和β-折叠组成,而形成较少的转角结构。该蛋白的B细胞表位可能位于55~61和152~158区段内或其附近区域。结论:预测结果将有助于确定flic蛋白的B细胞表位,为进一步研究flic基因功能及研制APP基因工程疫苗提供参考。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌二级结构 B细胞抗原表位

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重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究

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安徽农业科学 2009年第34期37卷 17286-17287页

作者：江涛姚宝安赵俊龙长江大学动物科学学院湖北荆州434025 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

[目的]探讨检测猪弓形虫病的新方法。[方法]应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3(rMIC3)作为包被抗原建立间接ELISA方法,用于猪弓形虫抗体的检测。[结果]该法所用最佳抗原浓度为3.40μg/ml,最适宜的血清稀释倍数为1∶160,与猪瘟病毒等阳性... 详细信息

[目的]探讨检测猪弓形虫病的新方法。[方法]应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3(rMIC3)作为包被抗原建立间接ELISA方法,用于猪弓形虫抗体的检测。[结果]该法所用最佳抗原浓度为3.40μg/ml,最适宜的血清稀释倍数为1∶160,与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应,与LAT的符合率为92.56%。[结论]该方法快速、特异、重复性好,可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。

关键词：刚地弓形虫 rMIC3 ELISA 检测

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牛支原体病研究进展

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动物医学进展 2009年第8期30卷 73-77页

作者：胡长敏石磊龚瑞白智迪郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室湖北武汉430070

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实,该病给养牛业造成巨大的经济损失。目前,对牛支原体的毒力因子及免疫机理均不十分清楚,缺少其相应的有效疫苗和检测方法,而且,牛支原体... 详细信息

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实,该病给养牛业造成巨大的经济损失。目前,对牛支原体的毒力因子及免疫机理均不十分清楚,缺少其相应的有效疫苗和检测方法,而且,牛支原体对许多常用抗生素不敏感,从而,给临床防治带来很大困难。我国自2008年首次报道了牛支原体肺炎,但对牛支原体病危害的认识还很不全面,妨碍了对该病的有效防治。论文分析归纳了牛支原体病的国内外研究概况,从病原学、流行病学、临床症状与病理变化、诊断、毒力因子、免疫与疫苗、防治措施等方面进行了系统综述,以期为我国牛支原体病的防治提供参考。

关键词：牛支原体肺炎诊断疫苗毒力因子

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东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26全长cDNA克隆及蛋白特性分析

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中国血吸虫病防治杂志 2009年第2期21卷 111-114页

作者：刘琴周丹娜张颖贺兰周艳琴赵俊龙中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所上海200025 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

目的克隆东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26(RPL26)全长cDNA序列,对编码的蛋白特性进行分析,并探讨它们在研究系统发育中的应用。方法采用经EST测序获得的东方巴贝斯虫RPL26的5′特异性引物及文库载体3′通用引物对东方巴贝斯虫cDNA文库进行扩... 详细信息

目的克隆东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26(RPL26)全长cDNA序列,对编码的蛋白特性进行分析,并探讨它们在研究系统发育中的应用。方法采用经EST测序获得的东方巴贝斯虫RPL26的5′特异性引物及文库载体3′通用引物对东方巴贝斯虫cDNA文库进行扩增,测序获得东方巴贝斯虫RPL26全长cDNA序列。用BLASTX程序搜索相似性序列及保守结构域,所获序列在GenBank中登记,并用Neighbor-Joining(N-J)法构建基于L26氨基酸序列的系统发育树。结果东方巴贝斯虫RPL26全长cDNA序列(GenBank登录号为FJ492804)长度为716 bp,开放阅读框为414 bp,编码137个氨基酸;同源性分析结果表明东方巴贝斯虫RPL26序列较保守,与牛巴贝斯虫(Babesia bovis)、小泰勒虫(Theileria par-va)等亲缘关系较近,在系统发育树中的遗传距离也较近。结论首次获得东方巴贝斯虫RPL26基因,其可能作为分子指标应用于研究生物系统发育。

关键词：东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26 特性分析克隆系统发育树

来源：评论

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猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG的制备

引用

黑龙江畜牧兽医 2009年第8期 74-76页

作者：陆英杰钱君娣何启盖马春全邓桦佛山科学技术学院生命科学学院动物医学系广东佛山528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室/农业部微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定。结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和... 详细信息

应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定。结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和Western-blot的鉴定显示该特异性抗体IgG具有很好的免疫原性,特异性强,仅与该病毒毒株的ORF5发生特异性结合。说明兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体具有良好的免疫原性和特异性,可与猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5特异性结合,可以作为诊断试剂和诊断试剂盒的一抗。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG 制备

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免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病

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四川农业大学学报 2009年第4期27卷 475-478页

作者：林涛汪开毓邓桦何启盖马春全四川农业大学动物医学院四川雅安625014 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织... 详细信息

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织切片进行检测。试验结果证明,该免疫组织化学方法具有良好的特异性、直观性,简单易行,可以对猪肺巨噬细胞中的存在的PCV2病毒抗原进行准确的定性和定位诊断。

关键词：免疫组织化学猪圆环病毒Ⅱ型诊断定位

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