检索结果-内蒙古大学图书馆

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素抗病毒活性分别约4.26×10～5 U/IⅡL,8.91×10～4 U/mL。结果表明重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛α-干扰素类生物制品研发奠定了基础。

关键词：奶牛 α-干扰素融合蛋白抗病毒活性

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奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100... 详细信息

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×10～5 U/mL,7.5×10～4 U/mL。结果表明重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活件比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。

关键词：奶牛 β-干扰素融合蛋白抗病毒活性

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肉牛传染性牛支原体(Mycoplasma bovis)肺炎的综合防治

肉牛传染性牛支原体(Mycoplasma bovis)肺炎的综合防治

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：郭爱珍赵俊龙胡长敏彭清洁华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室国家肉牛产业技术体系疾病控制研究室

牛支原体(Mycoplasma bovis,***)是危害养牛业的一种重要的致病性支原体。早在1961年,美国首次从乳腺炎患牛中分离到牛支原体,1976年报道与牛呼吸系统疾病有关。目前已证实该病原除导致牛肺炎、乳腺炎外,还导致关节炎、角膜结膜炎、耳... 详细信息

牛支原体(Mycoplasma bovis,***)是危害养牛业的一种重要的致病性支原体。早在1961年,美国首次从乳腺炎患牛中分离到牛支原体,1976年报道与牛呼吸系统疾病有关。目前已证实该病原除导致牛肺炎、乳腺炎外,还导致关节炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎症、流产与不孕等多种病症。该病呈世界性分布。在欧洲,约有25%-33%的犊牛肺炎是由牛支原体引起的,相当于每年损失1.44-1.92亿欧元,其中英国每年有190万头牛患牛支原体肺炎,约死亡15.7万头。在美国,每年由于牛支原体导致的牛呼吸

关键词：牛支原体呼吸系统疾病 Mycoplasma bovis 牛支原体肺炎综合防治

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牛支原体病研究进展

牛支原体病研究进展

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：胡长敏石磊龚瑞白智迪郭爱珍华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实该病给养牛业造成巨大的经济损失。牛支原体对许多常用抗生素不敏感,缺少有效的疫苗和诊断方法,其毒力因子及免疫机理均不十分清楚,给临... 详细信息

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实该病给养牛业造成巨大的经济损失。牛支原体对许多常用抗生素不敏感,缺少有效的疫苗和诊断方法,其毒力因子及免疫机理均不十分清楚,给临床防治带来很大困难。我国自2008年首次报道了牛支原体肺炎,但对牛支原体病危害的认识还很不全面,妨碍了该病的有效防治。本文分析归纳了牛支原体病的国内外研究进展,从病原学、流行病学、临床症状与病理变化、诊断、毒力因子、免疫与疫苗、防治措施等方面进行了系统综述,以便为我国牛支原体病的防治提供参考依据。

关键词：牛支原体牛肺炎诊断疫苗毒力因子

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金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 nuc1的构建

金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 nuc1的构建

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中国食品科学技术学会第六届年会暨第五届东西方食品业高层论坛

作者：唐俊妮周锐康名松陈焕春史贤明上海交通大学农业与生物学院食品科学与工程系陆伯勋食品安全研究中心华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室四川大学生命科学学院四川大学动物疾病防控生物工程研究中心华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一... 详细信息

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。本研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2nuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了七轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220 nuc1。

关键词：金黄色葡萄球菌 nuc1 nuc2同源重组突变株构建

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人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用

人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室武汉市结核病医院武汉市结核病防治所华中农业大学校医院

本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFNγ7基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA,... 详细信息

本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFNγ7基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到31.25 pg/mL。采集111位结核病阳性病人与292位临床健康对照者肝素抗凝全血,利用结核菌特异性抗原ESAT-6/CFP-10融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA及商品化试剂盒平行检测所有样本,结果两种方法的检测结果相符。结核患者的检测灵敏度为95.5%,健康对照的阳性检出率为16.7%,患者与健康对照的阳性检出率差异极显著(P<0.01),证实所建立的方法灵敏度与特异性均很高,具有良好的应用前景。

关键词：结核病 IFN-γ 诊断 ELISA ESAT-6/CFP-10 单克隆抗体

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免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病的研究

免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病的研究

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第七届全国生物医学体视学学术会议、第十届全军军事病理学学术会议、第六届全军定量病理学学术会议

作者：林涛汪开毓邓桦何启盖马春全四川农业大学动物医学学院四川雅安 625014 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山 528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室武汉 430070 农业微生物学国家重点实验室武汉 430070

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2，pcv2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic waxing syndrome，PWMS)的病原。目前pcv2已经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一，并给世界各地的养猪业造成了巨大的经济损... 详细信息

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2，pcv2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic waxing syndrome，PWMS)的病原。目前pcv2已经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一，并给世界各地的养猪业造成了巨大的经济损失。猪圆环病毒存在pcv1和pcv2两种血清型。其中pcv1没有致病性，但却普通存在于猪群和各种猪源传代细胞中，但是pcv2具有致病性，常和prrs，ppv，pnds等混合感染，引起免疫失败。pcv1和pcv2的ORF2编码的病毒结构蛋白具有良好的抗原性，且不发生血清学交叉反应。所以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白是很好的免疫原。以该抗原作为研究对象建立临床简单有效的检测方法。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型免疫组织化学法重组蛋白

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金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 △nuc1的构建

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畜牧市场 2009年第1期 21-24页

作者：唐俊妮周锐史贤明康名松陈焕春上海交通大学农业与生物学院食品科学与工程系陆伯勋食品安全研究中心华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室四川大学生命科学学院四川大学动物疾病防控生物工程研究中心

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcalnuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个... 详细信息

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcalnuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2△nuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220△nuc1。

关键词：金黄色葡萄球菌nuc1 nuc2 同源重组突变株构建

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胸膜肺炎放线杆菌萘啶酸抗性菌株的选育和信号标签突变株的构建

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微生物学报 2008年第1期48卷 73-79页

作者：商霖李薇李良军黎璐张四化李婷婷李耀坤刘磊郭志伟周锐陈焕春农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

胸膜肺炎放线杆菌(APP)是重要的猪呼吸道病原菌,给世界养猪业造成严重的经济损失.信号标签突变(STM)技术是在宿主动物体内鉴定病原菌毒力因子的高通量方法.通过体外传代选育出APP血清1型和3型萘啶酸抗性菌株,再以萘啶酸抗性菌株为受体菌... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌(APP)是重要的猪呼吸道病原菌,给世界养猪业造成严重的经济损失.信号标签突变(STM)技术是在宿主动物体内鉴定病原菌毒力因子的高通量方法.通过体外传代选育出APP血清1型和3型萘啶酸抗性菌株,再以萘啶酸抗性菌株为受体菌,以携带mini-Tn10的标签质粒(pLOF/TAG1-48)的*** CC118 λ pir或S17-1λpir为供体菌,在或不在*** DH5α(pRK2073)的辅助下,进行三亲本或两亲本接合,通过抗性筛选、PCR和Southern杂交鉴定转座突变株.结果表明:体外萘啶酸加压传代很容易选育出萘啶酸抗性APP菌株,该抗性的产生与DNA促旋酶A亚基基因gyrA的突变有关.在APP与E. coli接合实验中,两亲本接合比三亲本接合操作更简单,效率也较高;APP不同菌株在接合和转座效率上存在很大差异,血清1型菌株高于血清3型菌株,3型标准菌株高于地方分离株JL03-R.本研究为APP STM突变体库的构建与毒力基因的鉴定奠定了基础.

关键词：胸膜肺炎放线杆菌萘啶酸抗性信号标签突变细菌接合

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