检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2022年第12期49卷 4978-4986页

作者：徐肖文项志杰王琛郭爱珍陈颖钰华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物科技学院动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 华中农业大学湖北省兽医流行病学国际科技合作基地湖北武汉430070 华中农业大学湖北洪山实验室湖北武汉430070

【背景】牛呼吸疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)是由病原和环境共同作用所致的以支气管肺炎为主的多病因、多症状性疾病,给国内外肉牛养殖业带来了巨大经济损失。引起BRDC的病毒主要包括牛传染性鼻气管炎病毒(infe... 详细信息

【背景】牛呼吸疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)是由病原和环境共同作用所致的以支气管肺炎为主的多病因、多症状性疾病,给国内外肉牛养殖业带来了巨大经济损失。引起BRDC的病毒主要包括牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)、牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)等,优势病原因地、因时、因畜种而异。【目的】清晰了解我国BRDC的流行现状及流行毒株,是有效防控该病的基础。【方法】自2021年9月到2022年7月间,运用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术对来自湖北、湖南、安徽、河南、广东、广西和贵州等地21个牧场的179头具有呼吸道症状牛的196份样品(167份鼻拭子、13份肺脏组织、1份鼻黏液、5份气管拭子、1份唾液和9份血清)进行BRSV、IBRV、BPIV-3和BVDV这4种病毒的检测。【结果】BRSV、IBRV、BPIV-3、BVDV的样本阳性检出率分别为7.14%(95%CI:3.96,11.69)、0.51%(95%CI:0.01,2.81)、4.08%(95%CI:1.78,7.88)和6.63%(95%CI:3.58,11.07);179头牛检测该4种病毒的阳性检出率分别为7.82%(14/179)(95%CI:4.34,12.77)、0.56%(1/179)(95%CI:0.01,3.07)、4.47%(8/179)(95%CI:1.95,8.62)和7.26%(13/179)(95%CI:3.92,12.10)。0.56%(1/179)(95%CI:0.01,3.07)的牛为BVDV及BRSV共感染。进一步对阳性样品进行了病毒分离,共获得1株BVDV和6株BPIV-3,分型显示BVDV为1d型、BPIV-3为C型。【结论】本研究确定了我国部分地区牛呼吸疾病综合征的优势病毒为BRSV、BVDV及BPIV-3,BVDV及BPIV-3的优势血清型为BVDV-1d、BPIV-3C。研究结果为相关疫苗的研制提供了基础,为牛呼吸疾病综合征的防控提供了参考依据。

关键词：牛呼吸疾病综合征病毒检测分离

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广西某规模化猪场胸膜肺炎放线杆菌血清5型的分离鉴定

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畜牧与兽医 2022年第5期54卷 75-80页

作者：张哲玮袁龙代小童李振李换贝为成华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/动物医学院湖北武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 广西扬翔农牧有限责任公司广西贵港537100 湖北洪山实验室湖北武汉430070

为调查广西地区某规模化猪场疑似患猪传染性胸膜肺炎猪的病原、血清型及有效治疗药物等情况,首先对患病猪进行剖检观察其病理变化,同时无菌采集病猪肺脏等病料,接种平板后纯化培养,然后通过革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA序列比对、... 详细信息

为调查广西地区某规模化猪场疑似患猪传染性胸膜肺炎猪的病原、血清型及有效治疗药物等情况,首先对患病猪进行剖检观察其病理变化,同时无菌采集病猪肺脏等病料,接种平板后纯化培养,然后通过革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA序列比对、血清型及毒素基因分析等方法进行鉴定,并对分离菌株的耐药性和动物致病性进行探究。结果:从病料中分离到1株细菌,其菌落、菌体形态、生理生化特性和16S rRNA基因序列符合胸膜肺炎放线杆菌(APP)特征,该菌株含有ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅣ三种毒素,属于APP血清5型,因此将其命名为APP5-YXLM;药敏试验结果显示,该菌对β-内酰胺类药物和头孢类药物敏感,对红霉素、庆大霉素、多西环素、四环素等6种药物耐药;动物致病性试验表明,该菌株对小鼠具有较强的致病性,其半数致死量(LD_(50))为7.06×10^(8) CFU。试验结果为该发病猪场猪传染性胸膜肺炎的防治提供了理论依据,同时也为掌握胸膜肺炎放线杆菌在广西地区的流行情况提供了数据支持。

关键词：猪传染性胸膜肺炎猪胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定血清5型广西

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猪源艰难梭菌的分离鉴定与生物学特性分析

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中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 27-33页

作者：张悦艾伟诚王斐梁婉谢思思华琳李春辉彭忠吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430070 中南大学湘雅医院感染与控制中心长沙410008

为了了解我国猪源艰难梭菌(Clostridioides difficile,CD)的病原学及分子生物学特征,本研究收集湖北和广东地区疑似患有肠炎的病猪粪便样品,提取基因组DNA,利用已经报道的5重PCR方法对艰难梭菌的16S rDNA基因、毒素A的编码基因tcdA、毒... 详细信息

为了了解我国猪源艰难梭菌(Clostridioides difficile,CD)的病原学及分子生物学特征,本研究收集湖北和广东地区疑似患有肠炎的病猪粪便样品,提取基因组DNA,利用已经报道的5重PCR方法对艰难梭菌的16S rDNA基因、毒素A的编码基因tcdA、毒素B的编码基因tcdB以及二元毒素编码基因cdtA和cdtB进行检测,同时采用厌氧培养法,对PCR检测毒素编码基因为阳性的粪便样品进行艰难梭菌的分离培养,并对所分离到的菌株进行药物敏感性测试和全基因组重测序。结果发现:本研究所采集到的97份粪便样品经PCR检测显示有80份样品为16S rDNA阳性,其中仅有2份样品为tcdA和tcdB阳性。从这两份样品中分离出一株tcdA和tcdB阳性的艰难梭菌,命名为HuB01。药敏试验发现,HuB01对头孢菌素(FOX)、氯霉素(CHL)、克林霉素(CLI)、氨苄西林(AMP)、头孢曲松钠(CRO)耐药,对莫西沙星(MXF)和万古霉素(VAN)表现出中度耐药,而对利福西明(RFX)、甲硝哒唑(MTZ)、非达霉素(FDX)敏感。全基因组重测序发现HuB01的全基因组大小为3.93 Mb,平均GC含量为28.31%,编码3691个蛋白基因及63个tRNA和10个rRNA;3691个基因中含有31个耐药基因和164个毒力相关基因。多序列位点分型(MLST)结果显示HuB01为ST11。由于目前国内对于艰难梭菌的研究大多集中在人医领域,因此本研究可为兽医领域艰难梭菌的相关研究奠定基础。

关键词：艰难梭菌分离鉴定 PCR检测药敏试验全基因组重测序

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2018年湖北省猪源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国兽医学报 2020年第6期40卷 1142-1147,1152页

作者：罗郑彭忠杨迪王湘如杨斓杨丹王斐华琳陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

为了解规模化猪场沙门菌的流行和耐药情况,本研究于2018年10-12月采集湖北武汉、钟祥、大冶、襄阳、黄冈地区5个规模化猪场各年龄段猪的肛门拭子进行沙门菌的分离鉴定,并对所分离的菌株进行耐药表型分析和耐药基因检测。采用沙门菌选择... 详细信息

为了解规模化猪场沙门菌的流行和耐药情况,本研究于2018年10-12月采集湖北武汉、钟祥、大冶、襄阳、黄冈地区5个规模化猪场各年龄段猪的肛门拭子进行沙门菌的分离鉴定,并对所分离的菌株进行耐药表型分析和耐药基因检测。采用沙门菌选择性培养基进行细菌的分离培养,并通过生化试验和PCR扩增invA基因确定所分离的细菌为沙门菌;采用玻片凝集法对所分离的沙门菌进行血清分型;采用微量肉汤稀释法进行6种抗菌药物的耐药表型检测,并采用PCR方法对相关的15种耐药基因的携带情况进行检测。结果显示,从采集的640份肛门拭子分离鉴定出39株沙门菌,分离率为6.09%,其中来源于保育猪的样品中沙门菌的分离率最高,为16.25%;所分离沙门菌的血清型主要为鼠伤寒沙门菌(69.23%),其次是德比沙门菌(15.38%),其他血清型所占比例为15.38%。药敏试验发现所分离的沙门菌至少对1种抗生素耐药,其中94.87%的分离株对氨苄西林表现出耐药性,对氯霉素和卡那霉素表现出耐药性的分离株所占的比例分别为58.97%和53.84%,仅有20.51%的分离株对阿奇霉素表现出耐药性;此外,53.84%的菌株对3种以上的受试抗生素同时表现出抗性,其中20.51%的分离株同时对5种受试抗生素表现出耐药性。用PCR方法共检测出12种耐药基因,其中blaCMY(79.49%)、aph(3′)-Ⅱ(76.92%)、catA1(76.92%)的检出率较高。研究结果为湖北地区猪场制定沙门菌病的综合防控措施提供参考。

关键词：沙门菌分离鉴定血清型耐药性耐药基因

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鸡马立克氏病病毒和疫苗毒株PCR诊断方法的建立及其应用

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现代畜牧兽医 2022年第8期 50-54页

作者：周冬玉李国红靳泽华徐巧霞徐蓉张安定华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 农业农村部兽医诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430070 武汉科前生物股份有限公司湖北武汉430070 科技部动物疫病联合研究中心湖北武汉430070

研究旨在快速有效地诊断鸡马立克氏病(MD),区分MD血清Ⅰ型病毒(MDV-Ⅰ)与疫苗毒株。试验对Gen Bank发表的140余株MDV序列进行全基因组比对,选定MDV-Ⅰ型特有的meq基因设计1对引物,通过优化退火温度等条件建立了MDV-Ⅰ的PCR诊断方法,评... 详细信息

研究旨在快速有效地诊断鸡马立克氏病(MD),区分MD血清Ⅰ型病毒(MDV-Ⅰ)与疫苗毒株。试验对Gen Bank发表的140余株MDV序列进行全基因组比对,选定MDV-Ⅰ型特有的meq基因设计1对引物,通过优化退火温度等条件建立了MDV-Ⅰ的PCR诊断方法,评估该方法的特异性、灵敏度及重复性。结果显示,设定退火温度64℃、35个循环时,以MDV-Ⅰ型毒株为模板可扩增得到286 bp的片段;以CVI988或814疫苗毒株为模板时,可扩增得到463 bp的片段;该方法特异性强、灵敏度高,扩增结果稳定,可区分MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株。应用该方法诊断1例免疫后仍有MD症状的鸡,可同时扩增约286和463 bp的片段;2个片段的测序结果显示,扩增出的片段分别与MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株相匹配。研究表明,试验建立的PCR方法可快速有效地诊断MDV-Ⅰ型毒株感染鸡并筛选免疫失败的鸡群。

关键词：鸡马立克氏病马立克氏病病毒疫苗毒聚合酶链式反应

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猪繁殖与呼吸综合征的研究进展及防控措施

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猪业科学 2021年第11期38卷 78-82页

作者：张哲玮贝为成华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北洪山实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 广西扬翔农牧有限责任公司广西贵港537100 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染引起的一种以妊娠母猪发热流产、仔猪高死亡率和各年龄段猪呼吸功能障碍为主要特征的高度接触性传染病。目前,该病在全球范围内均有分布,对养猪业造成的经济损失不计其数。自1996年我国首次分离PRRSV到如今,该病已在我国横行了25年之久,却依旧无法有效防治。文章对目前国内外猪繁殖与呼吸综合征病原、流行病学、临床症状以及疫苗免疫和综合防控措施等方面的研究进展进行综述,以期为该病的防控提供科学依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗免疫防控措施

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鸡传染性贫血病毒湖北分离株XH16全基因组序列分析

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中国兽医杂志 2020年第12期56卷 1-4,8,I0001页

作者：靳泽华黄英王泽宇张安定华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 农业农村部兽医诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430070 科技部动物疫病联合研究中心湖北武汉430070

为了解鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因组特征及遗传变异情况,本试验对湖北某家禽养殖场中疑似CAV感染的肉鸡进行剖检,从其肝脏中分离得到1株病毒。通过聚合酶链式反应(PCR)试验验证为CAV,并将其命名为CAV-XH16。克隆该毒株全基因组,测序... 详细信息

为了解鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因组特征及遗传变异情况,本试验对湖北某家禽养殖场中疑似CAV感染的肉鸡进行剖检,从其肝脏中分离得到1株病毒。通过聚合酶链式反应(PCR)试验验证为CAV,并将其命名为CAV-XH16。克隆该毒株全基因组,测序拼接得到全基因组序列,并将该毒株与国内外已发表的其他病毒序列进行遗传进化分析。结果显示,该分离株具有高毒力毒株的分子特征,属于亚洲CAV分离株所属的主要亚群A1亚群。与中国分离株JL14023(NCBI登记号KY486145)有99.65%的相似性。本试验为CAV分子流行病学研究和新型疫苗研发提供了参考依据。

关键词：鸡传染性贫血病毒全基因组序列分析

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基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用

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畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 454-460页

作者：王俊伟陈芳洲库旭钢李畅何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料... 详细信息

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌*** BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。

关键词：猪圆环病毒3型 ORF2基因 Cap蛋白原核表达 ELISA检测

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猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医学报 2019年第9期39卷 1667-1673页

作者：刘青芸国师榜周宁华琳陈焕春吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒... 详细信息

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好。该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64%,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54%,2种方法的符合率为81.08%。综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因 TaqMan实时荧光定量PCR

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应用基于重组慢病毒的CRISPR/Cas9技术构建基因突变的鸡DF1细胞

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华中农业大学学报 2019年第3期38卷 83-88页

作者：靳泽华谢梦利易辰阳黄英付磊王晓萍张安定华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/动物医学院/湖北省预防兽医学重点实验室/生猪健康养殖协同创新中心/农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室/科技部动物疫病联合研究中心武汉430070

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否... 详细信息

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否可以用于鸡细胞的基因编辑。扩增sgRNA靶向序列1 220 bp片段,经T7E1酶切琼脂糖凝胶分析可见约300 bp和900 bp大小的条带,表明感染sgRNA慢病毒的细胞mavs产生了突变。序列测定结果表明sgRNA靶向序列发生了多个碱基缺失的突变。以上结果表明基于慢病毒系统的CRISPR/Cas9技术可对鸡基因组进行编辑。

关键词： CRISPR/Cas9 慢病毒鸡DF1细胞基因编辑

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