检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 508-512页

作者：张永亮陈颖钰熊学凯祁明普郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

牛分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）是结核分枝杆菌复合群（Mycobacteriumtuberculosiscomplex，MTC）中的重要成员，是引起牛结核病（Bovinetuberculosis）的主要病原菌。牛结核病在2016年被国际兽医局列为须申报的14类牛传染病之一，... 详细信息

牛分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）是结核分枝杆菌复合群（Mycobacteriumtuberculosiscomplex，MTC）中的重要成员，是引起牛结核病（Bovinetuberculosis）的主要病原菌。牛结核病在2016年被国际兽医局列为须申报的14类牛传染病之一，它不仅影响了养牛业的健康发展，还严重地威胁动物性食品安全和人类的健康。

关键词：牛分枝杆菌基因分型技术动物性食品安全结核分枝杆菌牛结核病复合群病原菌传染病

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表达乙型脑炎病毒PrM-E基因慢病毒载体的构建

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 342-346页

作者：陈龙杨晓红徐敏朱碧波陈焕春曹胜波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导29... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导293FT细胞。通过报告基因EGFP表达、间接免疫荧光和Western-blot检测,结果表明,上述三质粒共转染293FT细胞后,获得了假病毒,并且该假病毒可以高效转导正常293FT细胞。同时,PrM-E基因可以在被转导细胞中正确表达,从而为研制基于慢病毒载体的乙型脑炎病毒新型疫苗奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒慢病毒载体 PrM-E基因

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弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 527-531页

作者：江涛周艳琴刘琴聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

应用PCR技术从刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2(rhpotry protein 2)的部分基因,构建pGEX-KG-ROP2重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转入*** BL21CodonPlus中,在IPTG诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果表明,扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9%,该基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000,可被兔抗弓形虫免疫血清识别。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白ROP2 基因克隆原核表达

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乙型脑炎病毒E基因自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答

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中国兽医科学 2009年第2期39卷 130-134页

作者：刘学芹李么明曹胜波叶静孙敏轩肖少波陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中... 详细信息

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pCDE)分别免疫试验小鼠,进行体液免疫和细胞免疫检测。结果表明,在诱导体液免疫方面,pCDE要优于pSE,但pSE却可以诱导更强的细胞免疫反应,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒自杀性DNA疫苗免疫

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猪IFN-β启动子及其NF-κB结合位点萤光素酶报告载体的构建与活性检测

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中国兽医学报 2010年第1期30卷 107-109,136页

作者：王荡方六荣罗锐谢立兰江云波陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或p... 详细信息

通过PCR的方法从猪基因组DNA中克隆IFN-β基因启动子片段,分别构建了含有猪β干扰素基因启动子萤光素酶报告质粒及其4个重复的NF-κB结合位点序列的萤光素酶报告质粒。脂质体基因转染法将萤光素酶报告质粒转染PK-15细胞,在poly(I∶C)或poly(dAT∶dAT)的刺激下,萤光素酶表达显著增加。本试验为进一步探讨猪β干扰素信号转导通路的研究奠定了基础。

关键词：猪β干扰素启动子 NF-κB结合位点萤光素酶报告质粒

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检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 220-225页

作者：汪招雄何启盖刘丽娜刘正飞黄红亮陈焕春华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏... 详细信息

以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏度达15.6ng(0.156μg/mL),与乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪流感病毒(SIV)等无交叉反应。批间和批内变异系数较小,分别为6.39%和4.1%。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测,发现二者的符合率可达到77.4%,比PCR敏感。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可广泛应用于动物组织中PrV的检测。

关键词：双抗体夹心间接ELISA 单克隆抗体猪伪狂犬病毒Ea株

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抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定

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华中农业大学学报 2005年第3期24卷 222-225页

作者：汪招雄何启盖黄红亮刘正飞陈焕春华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1... 详细信息

将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1:212、1:212及1:100×212、1:100×212。特异性试验和免疫荧光结果显示,3G7E3和4A6F5仅与PRV反应,而与PPV、PRRSV、JEV和HCV等病毒不发生交叉反应;用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这2株分泌抗PRV单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。

关键词：伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体间接免疫荧光试验

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P58IPK通过PERK/eIF2α通路调控猪圆环病毒2型所诱导的细胞自噬

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畜牧兽医学报 2017年第11期48卷 2125-2134页

作者：杨了寒王凯许苏童张敏胡林何启盖张淑君华中农业大学动物科学技术学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

旨在研究猪圆环病毒2型(PCV2)感染激活的PERK/eIF2α通路是否与细胞自噬相关,以及过表达分子伴侣蛋白P58IPK在其中的作用。首先通过PERK特异性抑制剂GSK2606414和siRNA及蛋白免疫印迹检测磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、LC3-Ⅱ和ATG5-ATG12蛋... 详细信息

旨在研究猪圆环病毒2型(PCV2)感染激活的PERK/eIF2α通路是否与细胞自噬相关,以及过表达分子伴侣蛋白P58IPK在其中的作用。首先通过PERK特异性抑制剂GSK2606414和siRNA及蛋白免疫印迹检测磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、LC3-Ⅱ和ATG5-ATG12蛋白表达,研究PCV2感染PK-15细胞24h后PERK/eIF2α通路与细胞自噬的关系;然后通过构建和瞬时转染P58IPK真核过表达质粒及蛋白免疫印迹研究过表达P58IPK对PCV2感染PK-15诱导的PERK/eIF2α通路及细胞自噬的影响。结果显示,PERK特异性抑制剂GSK2606414和siRNA干扰PERK可极显著抑制PCV2诱导的p-eIF2α(P<0.01)和LC3-Ⅱ(P<0.01)表达;而过表达P58IPK同样可以极显著下调PCV2诱导的p-eIF2α(P<0.01)、ATG5-ATG12(P<0.01)及LC3-Ⅱ(P<0.01),且能极显著下调PCV2拷贝数(P<0.01)。结果表明,PCV2感染PK-15通过激活PERK/eIF2α通路诱导细胞自噬,过表达P58IPK通过抑制PERK通路抑制PCV2诱导的细胞自噬,从而抑制病毒复制。

关键词： P58IPK 内质网应激细胞自噬 PERK PCV2 ATG12

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猪Beclin1基因调控伪狂犬病病毒诱导细胞自噬和凋亡的机制分析

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1274-1281页

作者：胡林南良康张敏许苏童杨了寒李帅峰王凯刘正飞张淑君华中农业大学动物科学技术学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)感染后细胞自噬和凋亡情况,进一步分析鉴定PRV感染条件下与Beclin1互作的猪宿主凋亡家族蛋白。利用免疫印迹(WB)方法检测PRV感染细胞的自噬水平;利用流式细胞术探讨凋亡水平;最后利用免疫共沉淀试验分析PRV感... 详细信息

旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)感染后细胞自噬和凋亡情况,进一步分析鉴定PRV感染条件下与Beclin1互作的猪宿主凋亡家族蛋白。利用免疫印迹(WB)方法检测PRV感染细胞的自噬水平;利用流式细胞术探讨凋亡水平;最后利用免疫共沉淀试验分析PRV感染PK-15细胞中Beclin1与Bcl-2和Bcl-xL的结合水平。结果显示,PRV感染导致LC3-Ⅱ的表达明显增多,而P62显著下降,且AKT(S473)磷酸化水平显著减少;其次,PRV感染诱导细胞凋亡且显著上调剪切型Caspase-9/8的表达水平;最后,免疫共沉淀结果显示PRV感染条件下Beclin1能与Bcl-2和Bcl-xL结合,但结合的水平明显降低。PRV感染诱导的细胞自噬可能依赖于PI3K-Ⅰ/AKT信号通路,PRV感染可能同时激活了线粒体凋亡途经和死亡受体途经从而诱导细胞凋亡,而PRV感染诱导的细胞自噬和细胞凋亡可能通过抑制Beclin1和Bcl-2、Bcl-xL结合而相互关联。

关键词： PRV 细胞自噬细胞凋亡 Beclin1

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多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌

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畜牧兽医学报 2009年第8期40卷 1222-1228页

作者：薛云赵战勤陈杨邹浩勇何启盖李文洁熊金凤陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一... 详细信息

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一PCR条件进行系统优化后建立5重PCR方法。该多重PCR方法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板进行扩增,且在5种病原菌之间没有交叉反应;对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的检测结果均为阴性;对5种病原菌DNA模板检出的最小量均低于160 pg,且能从攻毒小鼠(App、Hps、Bb和T+Pm)肺脏组织8 h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌。对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明,5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在,且混合感染情况十分严重。这些试验结果表明该多重PCR方法可用于猪呼吸道病原菌App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查。

关键词：猪呼吸道病原多重PCR 检测

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