检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：苏莉李倩倩朱一帆郭爱珍陈颖钰华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院

目的结核病(Tuberculosis, TB)是由结核分枝杆菌引起的一种慢性、消耗性人畜共患病,每年全球新发病例约有1000万,死亡人数上百万,给人类健康带来巨大威胁。致病机制不清、缺乏高效诊断、疫苗、药物耙点是导致结核病防控难的重要因素之... 详细信息

目的结核病(Tuberculosis, TB)是由结核分枝杆菌引起的一种慢性、消耗性人畜共患病,每年全球新发病例约有1000万,死亡人数上百万,给人类健康带来巨大威胁。致病机制不清、缺乏高效诊断、疫苗、药物耙点是导致结核病防控难的重要因素之一。为解决这一问题,本实验室以牛分支杆菌卡介苗为模式细菌,构建了随机插入突变体库,通过前期筛选发现了一株具有低侵袭能力的突变株;为确定该突变株及插入基因是否具有作为结核疫苗、药物靶点的潜在能力,我们对其进行了深入的研宄。方法本研究前期利用携带有Himarl的MycoMarT7转座子系统的噬菌体成功构建了牛分枝杆菌BCG随机突变体库。通过生物信息学KEGG/GO聚类分析以及侵袭模型对突变体库进行筛选,发现了一株具有低侵袭力表型的突变体B2909。通过转座子测序对该突变株所插入失活基因进行了确定。进一步的,为确定该突变体的功能,利用肺上皮细胞A549粘附模型对突变体的毒力进行了检测,并测定了该突变体的生长曲线、菌落形态以及胞内存活能力。此外,为了解突变体引起的炎性应答及其通路变化,将野生型BCG与突变株B2909以M0I为10:1的比例分别感染人THP-1巨噬细胞,通过qRT-PCR、ELISA以及Western blot方法,对炎性因子的mRNA和蛋白水平、信号通路磷酸化激活等情况进行检测。结果研宄结果显示,突变株B2909的突变基因为fadD18,主要编码脂肪酸辅酶A连接酶。与野生株相比,突变株B2909的侵袭及黏附能力显著降低,并具有单菌落变小、索状结构变少、生长速度变慢的生长表型,但颜色无明显改变。胞内存活结果表明,突变株B2909的胞内存活能力显著强于野生型BCG。此外,相比野生型BCG,在mRNA和蛋白表达水平上,突变株B2909能够显著降低炎性细胞因子IL-6和IL-Iβ的表达,而TNF-a虽然在mRNA水平上表达显著降低,但在蛋白水平上无显著性差异。对信号通路的Western blot检测结果显示,BCG突变株B2909能够显著抑制NF-kB和MAPK信号通路的激活。结论本研宄构建了牛分枝杆菌BCG全基因组突变体库,并利用侵袭模型筛选与鉴定BCG突变株B2909的突变基因为fadD18基因,发现该基因毒力降低,并能通过抑制NF-kB和MAPK信号通路激活从而降低巨噬细胞IL-6、IL-Iβ和TNF-a的表达最终促进胞内菌存活。本研宄的发现为进一步阐明结核分枝杆菌致病机制和免疫机理奠定了基础,为结核病疫苗的研发提供了重要靶标。

关键词： BCG突变体库 fadD18基因炎症应答胞内存活

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2018年伪狂犬病病毒的流行特征及其遗传变异分析

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畜牧兽医学报 2020年第3期51卷 584-593页

作者：孙颖王雪莹梁婉谢思思彭忠陈宏建华琳宋文博汤细彪陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了了解当前伪狂犬病病毒(PRV)在我国猪群中的流行现状及其遗传变异情况,本研究利用PCR的方法对2018年1-12月来源于我国28个省、市、自治区的1 328份疑似猪伪狂犬病发病猪的组织样品开展了PRV-gE的检测及病毒的分离鉴定,同时针对所分... 详细信息

为了了解当前伪狂犬病病毒(PRV)在我国猪群中的流行现状及其遗传变异情况,本研究利用PCR的方法对2018年1-12月来源于我国28个省、市、自治区的1 328份疑似猪伪狂犬病发病猪的组织样品开展了PRV-gE的检测及病毒的分离鉴定,同时针对所分离的病毒的gB、gC和gE基因进行PCR扩增和DNA测序,并展开遗传变异分析。结果显示,共有92份样品为PRV-gE基因检测阳性,阳性检出率为6.93%。从92份PRV-gE阳性样品分离到13株PRV。分别基于gB基因部分片段、gC和gE基因进行遗传变异分析发现13株PRV与我国2012年以后流行的毒株(如HeN1等变异株)亲缘关系较近,而与2012年以前所分离的毒株(如Ea等经典毒株)的亲缘关系较远;此外,绝大多数中国分离株与国外分离毒株(如NIA-3、Bartha、Kaplan等)在遗传进化树中位于不同的进化分支;相对于国外分离株及国内早期流行的经典毒株而言,13株PRV分离株的gB、gC和gE蛋白中均存在许多特征性的氨基酸位点变异。本研究对于了解我国PRV流行现状及当前流行的PRV毒株的生物学特征具有十分重要的意义。

关键词：伪狂犬病病毒 PCR检测病毒分离遗传变异分析猪

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牛源A型多杀性巴氏杆菌的免疫检测

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分析科学学报 2020年第5期36卷 765-769页

作者：郑冰洁胡长敏胡涌刚郭爱珍华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

本文建立了一种有效捕获和快速检测牛源A型多杀性巴氏杆菌(Pm)的免疫检测方法。该方法将本实验室筛选的一株单克隆抗体(Mc Ab)作为捕获探针偶联到磁珠表面构建免疫磁珠(IMB),并用于特异性捕获牛源A型Pm,辣根过氧化物酶(HRP)标记的另一株... 详细信息

本文建立了一种有效捕获和快速检测牛源A型多杀性巴氏杆菌(Pm)的免疫检测方法。该方法将本实验室筛选的一株单克隆抗体(Mc Ab)作为捕获探针偶联到磁珠表面构建免疫磁珠(IMB),并用于特异性捕获牛源A型Pm,辣根过氧化物酶(HRP)标记的另一株McAb作为检测探针与捕获的牛源A型Pm相互作用,建立了一种基于磁珠的“双抗夹心”免疫显色方法实现该菌的快速检测。在最优条件下,牛源A型Pm在1.0×10~5~1.0×10~7CFU/m L范围内与信号强度呈良好的线性关系(R^2=0.99),检测限(S/N=3)为1.0×10~5CFU/m L。本方法具有良好的特异性和重现性,对模拟实际样品的检测结果取得了令人满意的效果。

关键词：免疫磁珠多杀性巴氏杆菌牛免疫检测

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牛溶血曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

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中国兽医学报 2020年第6期40卷 1131-1135页

作者：刘心彭清洁彭永崇王子健章恺伦周珊锡陈曦陈颖钰郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微物国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学湖北省兽医流行病学国际科技合作基地湖北武汉430070

对1例不明原因死亡牛肺脏进行了病原学分离及鉴定。根据已报道的溶血曼氏杆菌基因序列,设计合成引物。通过细菌分离、染色、16S rRNA、溶血曼氏杆菌特异性PCR扩增、荚膜血清型及生化试验来确定该菌株。结果确定该牛感染了溶血曼氏杆菌,... 详细信息

对1例不明原因死亡牛肺脏进行了病原学分离及鉴定。根据已报道的溶血曼氏杆菌基因序列,设计合成引物。通过细菌分离、染色、16S rRNA、溶血曼氏杆菌特异性PCR扩增、荚膜血清型及生化试验来确定该菌株。结果确定该牛感染了溶血曼氏杆菌,进一步分型确定为血清6型。成功从牛肺脏中分离到该菌株,从药敏试验结果可以看出该菌对大多数药物敏感。该试验对牛溶血曼氏杆菌病临床用药具有参考意义,也为牛溶血曼氏杆菌病临床诊断与治疗提供了技术参考。

关键词：牛溶血曼氏杆菌血清6型 16S rRNA 药敏试验

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伪狂犬病病毒野毒感染猪场的gE抗体阳性头胎母猪生产成绩调查

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畜牧兽医学报 2020年第11期51卷 2778-2784页

作者：于学祥朱娴静孙琪库旭钢罗锐范盛先何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染多种野生动物及家畜引起的急性、热性的高度接触性传染病。为掌握PRV隐性感染对头胎母猪生产成绩的影响,本研究跟踪调查某一PRV野毒阳性稳定万头母猪场中野毒gE... 详细信息

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染多种野生动物及家畜引起的急性、热性的高度接触性传染病。为掌握PRV隐性感染对头胎母猪生产成绩的影响,本研究跟踪调查某一PRV野毒阳性稳定万头母猪场中野毒gE抗体阴性和阳性的头胎母猪总产仔数、健仔数、弱仔数、死胎数、木乃伊胎数、仔猪初生窝重以及断奶活仔数、断奶合格仔数、仔猪断奶重等不同生产成绩指标,探索相同饲养条件下伪狂犬病对头胎母猪各生产指标的影响。结果发现,每头PRV野毒gE抗体阴性头胎母猪每窝平均可产11.96头活仔猪,比gE抗体阳性母猪每胎次多产活仔0.63头,以及每胎次可多提供0.18头断奶活仔,每胎次多提供0.28头断奶合格仔。虽然PRV野毒gE抗体阳性母猪所产仔猪初生均重及断奶均重均高于gE抗体阴性母猪所产仔猪,但gE抗体阴性母猪所产仔猪断奶合格率高于gE抗体阳性母猪,表明其断奶活仔整齐度更高。综上,PRV野毒gE抗体阳性的头胎母猪生产成绩低于gE抗体阴性母猪,伪狂犬病的净化可为猪场带来更高的经济效益,表明伪狂犬病的净化至关重要。

关键词：伪狂犬病规模化猪场野毒感染生产成绩

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河北省一株猪流行性腹泻病毒S1基因的遗传变异与重组分析

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黑龙江畜牧兽医 2021年第12期 56-62页

作者：翟新国周琼琼郑培培李庆阳陈小霞陈琦石德时李朋辉河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河北工程大学人事处河北邯郸056038 河北大北农农牧食品有限公司河北衡水053900

为了解近年来河北地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的流行性和遗传变异性,试验采集河北省某发病猪场仔猪的小肠组织,提取RNA,对S1基因进行RT-PCR,对扩增的阳性产物进行克隆与测序,对测序结果进行同源性分析... 详细信息

为了解近年来河北地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的流行性和遗传变异性,试验采集河北省某发病猪场仔猪的小肠组织,提取RNA,对S1基因进行RT-PCR,对扩增的阳性产物进行克隆与测序,对测序结果进行同源性分析,对S1蛋白进行亲水性、表面可触性、抗原指标及T细胞基序分析,利用MEGA X 10.0.5软件对PEDV S1基因进行最大似然法(maximum likelihood, ML)遗传进化分析,利用RDP4软件进行PEDV S1基因的重组分析。结果表明:成功克隆出pMD18-T-PEDV-S1,将该毒株命名为HB/HS/2019株,其包含N末端域和C末端域的S1基因近全长序列,长度为2 163 bp,编码721个氨基酸;成功预测S1潜在的B细胞表位和T细胞基序。经同源性分析,HB/HS/2019与四川株CH/SCJY/2018 S1基因的相似性最高,为99.8%;与比利时CV777毒株的基因相似性为91.4%,存在插入和缺失现象。经进化分析,40株PEDV分为GⅠ群和GⅡ群,HB/HS/2019属于GⅡ群。在GⅡ群内,我国流行株均为2010年后出现,HB/HS/2019与市售疫苗株AJ1102和LW/L亲缘关系较近,与CV777和attenuated CV777株亲缘关系较远。经重组分析,未发现HB/HS/2019 S1序列含有潜在的重组事件,发现GⅠ群和GⅡ群的毒株之间S1基因存在3个重组事件。说明HB/HS/2019 S1基因与2010年以后我国报道的变异毒株亲缘关系较近,虽然该基因存在一些核酸位点变异,但是尚未发生基因重组事件。

关键词：河北省猪流行性腹泻病毒 S1基因遗传变异重组分析

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一株多重耐药猪链球菌的分离鉴定与生物学特性研究

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湖北农业科学 2022年第S01期61卷 284-289页

作者：裴嘉琪李晓月刘泽文高婷刘威杨克礼郭锐李畅周丹娜陈文杰田永祥贝为成袁芳艳湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室/畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 华中农业大学动物医学院/生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070

从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试... 详细信息

从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试验结果表明,分离菌株对利福平敏感;对氟苯尼考、头孢噻肟中度敏感;对氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、多西环素、青霉素G、红霉素、万古霉素、克林霉素、磺胺甲恶唑和利奈唑胺12种药物耐药。通过PCR扩增耐药基因,结果表明,分离菌株携带四环素类抗性基因tetO与大环内酯类抗性基因ermB、ermTR。

关键词：猪链球菌分离鉴定药敏试验耐药基因毒力

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一株重组类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及基因组分析

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中国兽药杂志 2021年第8期55卷 1-11页

作者：杨康袁林茂张维达李自力农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 上海新农饲料股份有限公司上海201600

为分离上海地区猪繁殖与呼吸综征病毒(PRRSV)并分析其分子遗传进化关系,对来自该地区某猪场疑似PRRSV感染病猪的2份肺样进行RT-PCR检测,阳性样品接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将盲传3代后出现细胞病变的PAMs经间接免疫荧光鉴定,通过RT-PCR... 详细信息

为分离上海地区猪繁殖与呼吸综征病毒(PRRSV)并分析其分子遗传进化关系,对来自该地区某猪场疑似PRRSV感染病猪的2份肺样进行RT-PCR检测,阳性样品接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将盲传3代后出现细胞病变的PAMs经间接免疫荧光鉴定,通过RT-PCR扩增分离株全基因组序列,测序后与GenBank登录的参考株全基因组序列进行同源性及遗传进化分析,分析了分离株Nsp2、GP5氨基酸序列的遗传进化关系,并对分离株做了重组分析和细胞嗜性试验。结果显示,成功分离出1株PRRSV,命名为SH2019,其全基因组开放阅读框大小为14677 bp,分离株与NADC30的核苷酸同源性最高,属于目前流行于中国的类NADC30 PRRSV,其Nsp2存在131个氨基酸缺失的分子特征;分离株是以谱系1毒株为主要亲本,以谱系3、谱系5或谱系8毒株为次要亲本,在12601~12901 nt(ORF2~ORF4)发生了基因重组的重组毒株,分离株不能感染Marc-145细胞。本研究分离鉴定一株重组类NADC30 PRRSV,可为该地区猪繁殖与呼吸综合征的防控提供参考。

关键词：类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定基因重组:细胞嗜性

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2018年湖北省猪源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国兽医学报 2020年第6期40卷 1142-1147,1152页

作者：罗郑彭忠杨迪王湘如杨斓杨丹王斐华琳陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

为了解规模化猪场沙门菌的流行和耐药情况,本研究于2018年10-12月采集湖北武汉、钟祥、大冶、襄阳、黄冈地区5个规模化猪场各年龄段猪的肛门拭子进行沙门菌的分离鉴定,并对所分离的菌株进行耐药表型分析和耐药基因检测。采用沙门菌选择... 详细信息

为了解规模化猪场沙门菌的流行和耐药情况,本研究于2018年10-12月采集湖北武汉、钟祥、大冶、襄阳、黄冈地区5个规模化猪场各年龄段猪的肛门拭子进行沙门菌的分离鉴定,并对所分离的菌株进行耐药表型分析和耐药基因检测。采用沙门菌选择性培养基进行细菌的分离培养,并通过生化试验和PCR扩增invA基因确定所分离的细菌为沙门菌;采用玻片凝集法对所分离的沙门菌进行血清分型;采用微量肉汤稀释法进行6种抗菌药物的耐药表型检测,并采用PCR方法对相关的15种耐药基因的携带情况进行检测。结果显示,从采集的640份肛门拭子分离鉴定出39株沙门菌,分离率为6.09%,其中来源于保育猪的样品中沙门菌的分离率最高,为16.25%;所分离沙门菌的血清型主要为鼠伤寒沙门菌(69.23%),其次是德比沙门菌(15.38%),其他血清型所占比例为15.38%。药敏试验发现所分离的沙门菌至少对1种抗生素耐药,其中94.87%的分离株对氨苄西林表现出耐药性,对氯霉素和卡那霉素表现出耐药性的分离株所占的比例分别为58.97%和53.84%,仅有20.51%的分离株对阿奇霉素表现出耐药性;此外,53.84%的菌株对3种以上的受试抗生素同时表现出抗性,其中20.51%的分离株同时对5种受试抗生素表现出耐药性。用PCR方法共检测出12种耐药基因,其中blaCMY(79.49%)、aph(3′)-Ⅱ(76.92%)、catA1(76.92%)的检出率较高。研究结果为湖北地区猪场制定沙门菌病的综合防控措施提供参考。

关键词：沙门菌分离鉴定血清型耐药性耐药基因

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猪传染性胸膜肺炎的防控进展

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养殖与饲料 2021年第5期20卷 77-80页

作者：何啟云闫康贝为成华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 广西扬翔农牧有限责任公司广西贵港537100 华中农业大学动物医学院武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的猪的一种严重的呼吸道传染病,导致养猪业严重的经济损失,该病在世界各地广泛分布,在我国的流行日益严重。该病主要经呼吸道传播发病,猪和带菌猪是主要传染源;病猪临床表现以呼吸道症状为主,... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的猪的一种严重的呼吸道传染病,导致养猪业严重的经济损失,该病在世界各地广泛分布,在我国的流行日益严重。该病主要经呼吸道传播发病,猪和带菌猪是主要传染源;病猪临床表现以呼吸道症状为主,分为急性型、亚急性型和慢性型3种;急性和亚急性病例以纤维素性出血性胸膜肺炎为特点,慢性病例以纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征和隐性感染。随着养猪业的规模化发展,该病造成的危害日益严重,因此如何有效防控该病的发生,以此减少经济损失非常重要。本文就近年来猪传染性胸膜肺炎的防控进展进行综述,为提高猪传染性胸膜肺炎的防控效果、减少经济损失提供理论参考。

关键词：猪传染性胸膜肺炎胸膜肺炎放线杆菌防控

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