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畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1370-1375页

作者：吴庭才赵战勤王臣张春杰吴斌程相朝何启盖河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS... 详细信息

百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实2种表达产物GST-R1和GST-PRN均具有良好的免疫学反应活性。在主动免疫保护试验中,GST-R1和GST-PRN免疫组小鼠均能产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的Bb强毒株HH0809进行鼻腔攻毒后,其保护率均为100%(9/9);当使用10 LD50HH0809攻毒时,其保护率分别为33.3%(3/9)和77.8%(7/9)。在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-R1和GST-PRN兔抗血清均能100%(10/10)保护小鼠抵抗10 LD50HH0809的腹腔攻击,但经PRN吸附后的2种兔抗血清均失去了保护力(0/5)。这些研究结果表明,重组PRN的N端R1区多肽具有良好的免疫原性。

关键词：支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素免疫原性

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牛支原体病研究进展

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动物医学进展 2009年第8期30卷 73-77页

作者：胡长敏石磊龚瑞白智迪郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室湖北武汉430070

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实,该病给养牛业造成巨大的经济损失。目前,对牛支原体的毒力因子及免疫机理均不十分清楚,缺少其相应的有效疫苗和检测方法,而且,牛支原体... 详细信息

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实,该病给养牛业造成巨大的经济损失。目前,对牛支原体的毒力因子及免疫机理均不十分清楚,缺少其相应的有效疫苗和检测方法,而且,牛支原体对许多常用抗生素不敏感,从而,给临床防治带来很大困难。我国自2008年首次报道了牛支原体肺炎,但对牛支原体病危害的认识还很不全面,妨碍了对该病的有效防治。论文分析归纳了牛支原体病的国内外研究概况,从病原学、流行病学、临床症状与病理变化、诊断、毒力因子、免疫与疫苗、防治措施等方面进行了系统综述,以期为我国牛支原体病的防治提供参考。

关键词：牛支原体肺炎诊断疫苗毒力因子

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌flic基因的克隆表达及生物信息学分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2009年第10期37卷 25-30页

作者：李任峰田香勤何启盖王自良赵坤李学斌王三虎河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 新乡医学院医学研究中心河南新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室湖北武汉430070

【目的】构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,App)鞭毛蛋白(flic)编码基因的重组表达质粒,对其编码蛋白进行生物信息学分析,并将其在原核细胞中进行表达。【方法】利用PCR方法扩增flic基因片段,将其克隆至p... 详细信息

【目的】构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,App)鞭毛蛋白(flic)编码基因的重组表达质粒,对其编码蛋白进行生物信息学分析,并将其在原核细胞中进行表达。【方法】利用PCR方法扩增flic基因片段,将其克隆至pMD-18T载体后测序,利用生物信息学软件对其编码蛋白的二级结构及跨膜区进行预测。构建重组表达质粒pGEX-flic,转化大肠杆菌工程菌BL21,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE及Western-blo对表达蛋白进行鉴定。【结果】获得的目的基因片段长度为528 bp,测序表明其序列与GenBank公布的一致;软件预测结果显示,该蛋白具有多个明显的二级结构成分及跨膜区;SDS-PAGE检测表明,在约50 ku处有一特异性条带;Western-blot检测表明,表达蛋白具有良好的抗原活性。【结论】成功获得了App的flic基因,其编码的蛋白质具有较多的α螺旋区和无规则卷曲区域,表达的鞭毛蛋白具有生物学活性。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 flic基因鞭毛蛋白生物信息学

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猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIIA基因的序列分析及其B细胞表位预测

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生物技术通报 2009年第7期25卷 104-108,116页

作者：李任峰田香勤何启盖王自良赵坤李学斌王三虎河南科技学院动物科学学院新乡453003 新乡医学院医学研究中心新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室武汉430070

摘要：为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌（Actionobacillus pleuropneumoniae，App）ApxⅡA基因的结构和功能，选取GenBank中6株不同App分离株，采用生物信息学方法对其ApxⅡA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对，并选择其中AY23228... 详细信息

摘要：为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌（Actionobacillus pleuropneumoniae，App）ApxⅡA基因的结构和功能，选取GenBank中6株不同App分离株，采用生物信息学方法对其ApxⅡA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对，并选择其中AY232288．1菌株（湖北分离株）ApxⅡA基因为研究对象，分析该基因所编码蛋白质的理化性质，并对其可能形成的二级结构及B细胞表位进行预测和分析。结果表明，6株不同App分离株ApxⅡA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为65．56％和88．42％，在AY232288．1菌株ApxⅡA蛋白的肽链中，745—751和801—807区段可能是其B细胞表位优势区。本研究首次利用生物信息学方法对ApxⅡA基因及其蛋白质结构进行了分析和预测，为ApxⅡA基因功能的深入研究及APP多表住疫苗的设计奠定了基础。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxIIA基因 B细胞表位

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌flic基因的原核表达与生物学活性分析

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生物技术通报 2009年第2期25卷 103-106页

作者：李任峰田香勤何启盖王三虎郑玉姝胡建和赵坤河南科技学院动物科学学院新乡453003 新乡医学院形态学研究室新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室武汉430070

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型菌株基因组为模板,根据其鞭毛区与其它细菌高度同源性设计引物,利用PCR方法扩增鞭毛蛋白基因flic片段,将其亚克隆到pMD-18T载体中并进行PCR和酶切鉴定,再将其亚克隆与载体pGEX-kG分别双酶切和连接,构... 详细信息

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型菌株基因组为模板,根据其鞭毛区与其它细菌高度同源性设计引物,利用PCR方法扩增鞭毛蛋白基因flic片段,将其亚克隆到pMD-18T载体中并进行PCR和酶切鉴定,再将其亚克隆与载体pGEX-kG分别双酶切和连接,构建重组表达载体pGEX-flic,并将其转化大肠杆菌工程菌BL21进行原核表达。结果表明,目的基因片段长度为528bp,在大肠杆菌BL21中获得成功表达,且表达蛋白能与猪抗APP血清发生反应。为进一步研究细菌鞭毛的抗原性及其他功能提供参考。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌鞭毛蛋白诊断抗原

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猪胸膜肺炎放线杆菌flic蛋白二级结构与B细胞表位预测

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生物技术 2009年第4期19卷 13-15页

作者：李任峰田香勤何启盖赵坤姜金庆胡建和王三虎河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 新乡医学院医学研究中心河南新乡453003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室湖北武汉430070

目的:预测和分析猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,APP)鞭毛蛋白(flic)的二级结构和B细胞表位。方法:利用生物信息学方法对flic基因推导的氨基酸序列进行结构特征和B细胞表位预测分析。结果:flic蛋白为非稳定型脂蛋... 详细信息

目的:预测和分析猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,APP)鞭毛蛋白(flic)的二级结构和B细胞表位。方法:利用生物信息学方法对flic基因推导的氨基酸序列进行结构特征和B细胞表位预测分析。结果:flic蛋白为非稳定型脂蛋白,含有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点(39-42 SirD,164-167 SvkD)和3个蛋白质激酶C磷酸化位点(39-41 SiR,161-163 TsR、164-166 SvK)。该蛋白无信号肽,在21Ala^38Ala处存在跨膜区的可能性最大。flic蛋白的二级结构主要由无规卷曲区域、α-螺旋和β-折叠组成,而形成较少的转角结构。该蛋白的B细胞表位可能位于55~61和152~158区段内或其附近区域。结论:预测结果将有助于确定flic蛋白的B细胞表位,为进一步研究flic基因功能及研制APP基因工程疫苗提供参考。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌二级结构 B细胞抗原表位

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牛支原体病研究进展

牛支原体病研究进展

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：胡长敏石磊龚瑞白智迪郭爱珍华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实该病给养牛业造成巨大的经济损失。牛支原体对许多常用抗生素不敏感,缺少有效的疫苗和诊断方法,其毒力因子及免疫机理均不十分清楚,给临... 详细信息

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实该病给养牛业造成巨大的经济损失。牛支原体对许多常用抗生素不敏感,缺少有效的疫苗和诊断方法,其毒力因子及免疫机理均不十分清楚,给临床防治带来很大困难。我国自2008年首次报道了牛支原体肺炎,但对牛支原体病危害的认识还很不全面,妨碍了该病的有效防治。本文分析归纳了牛支原体病的国内外研究进展,从病原学、流行病学、临床症状与病理变化、诊断、毒力因子、免疫与疫苗、防治措施等方面进行了系统综述,以便为我国牛支原体病的防治提供参考依据。

关键词：牛支原体牛肺炎诊断疫苗毒力因子

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肉牛传染性牛支原体(Mycoplasma bovis)肺炎的综合防治

肉牛传染性牛支原体(Mycoplasma bovis)肺炎的综合防治

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：郭爱珍赵俊龙胡长敏彭清洁华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室国家肉牛产业技术体系疾病控制研究室

牛支原体(Mycoplasma bovis,***)是危害养牛业的一种重要的致病性支原体。早在1961年,美国首次从乳腺炎患牛中分离到牛支原体,1976年报道与牛呼吸系统疾病有关。目前已证实该病原除导致牛肺炎、乳腺炎外,还导致关节炎、角膜结膜炎、耳... 详细信息

牛支原体(Mycoplasma bovis,***)是危害养牛业的一种重要的致病性支原体。早在1961年,美国首次从乳腺炎患牛中分离到牛支原体,1976年报道与牛呼吸系统疾病有关。目前已证实该病原除导致牛肺炎、乳腺炎外,还导致关节炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎症、流产与不孕等多种病症。该病呈世界性分布。在欧洲,约有25%-33%的犊牛肺炎是由牛支原体引起的,相当于每年损失1.44-1.92亿欧元,其中英国每年有190万头牛患牛支原体肺炎,约死亡15.7万头。在美国,每年由于牛支原体导致的牛呼吸

关键词：牛支原体呼吸系统疾病 Mycoplasma bovis 牛支原体肺炎综合防治

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猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及病原流行病学研究

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及病原流行病学研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：赵战勤裴洁吴斌张春杰李银聚何启盖程相朝陈焕春河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

目的:探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiscptica,Bb)在我国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究.方法和结果:采用病原菌的形态学观察,生化鉴定和PCR鉴定,从2,057... 详细信息

目的:探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiscptica,Bb)在我国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究.方法和结果:采用病原菌的形态学观察,生化鉴定和PCR鉴定,从2,057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌,在我国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系.Bb最常见的共感染菌依次是链球菌(55.9%)、副猪嗜血杆菌(50.0%)、大肠杆菌(43.1%)、巴氏杆菌(25.5%)、绿脓杆菌(17.6%)和沙门氏菌(11.8%).在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌,对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验.结果表明:各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死.结论:在我国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高.

关键词：支气管败血波氏杆菌流行病学协同感染毒力因子

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AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究

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动物医学进展 2007年第4期28卷 5-8页

作者：伍海芽喻正军陈剑锋宋云峰周明光杨俊兴周红波金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物研究室湖北武汉430070

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY)。在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY。同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验。结果表明,纯化... 详细信息

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY)。在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY。同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验。结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1∶640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力。以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗。

关键词： AIV H5N1 高免卵黄抗体理化特性

来源：评论

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