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动物医学进展 2019年第4期40卷 124-127页

作者：吴庆华王旭袁宗辉长江大学生命科学学院湖北荆州434025 华中农业大学动物医学院/国家兽药残留基准实验室湖北武汉430070

T-2毒素的免疫毒性具有矛盾性和复杂性。低剂量T-2毒素可提升动物对病原体的抵抗力,高剂量T-2毒素则大大降低动物的免疫力。T-2毒素暴露时间早于病原体可增加动物免疫抵抗力,反之或毒素与病原体同时暴露,则降低动物对病原体的抵抗力。... 详细信息

T-2毒素的免疫毒性具有矛盾性和复杂性。低剂量T-2毒素可提升动物对病原体的抵抗力,高剂量T-2毒素则大大降低动物的免疫力。T-2毒素暴露时间早于病原体可增加动物免疫抵抗力,反之或毒素与病原体同时暴露,则降低动物对病原体的抵抗力。近期研究发现,细胞凋亡/存活通路维持毒素免疫调控动态平衡,自噬在免疫调控中发挥着关键而复杂的作用,但T-2毒素免疫调控中是否存在类似"免疫逃避"机制亟待研究。论文综述了T-2毒素免疫毒性的矛盾性,并重点讨论了其潜在的分子机制,为单端孢霉烯族毒素的免疫毒性和动物疫病防控研究提供参考。

关键词： T-2毒素免疫毒性信号通路细胞自噬免疫逃避

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磺胺类药物代谢与残留消除以及检测方法研究进展

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中国兽药杂志 2019年第2期53卷 66-75页

作者：孙亚奇郭京超潘源虎刘振利王旭袁宗辉华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品兽药残留检测重点实验室武汉430070

对磺胺类药物在动物和人体内的代谢与残留消除规律以及残留检测方法进行综述,并展望磺胺类药物的代谢研究方向以及残留检测技术的发展,以期为开发新的磺胺类药物残留检测方法提供技术支持和参考。

关键词：磺胺类药物代谢残留消除检测方法

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兽用头孢菌素类抗生素研究进展

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中国畜牧兽医 2018年第7期45卷 1978-1989页

作者：李梅孙灵灵袁宗辉黄玲利华中农业大学动物医学院国家兽药残留基准实验室武汉430070

头孢菌素类抗生素具有抗菌谱广、抗菌活性强等特点,在人类医学领域应用十分广泛。在兽医临床中,由于药物种类较少及不规范使用而易使细菌产生交叉耐药性,头孢菌素的应用受到一定程度的限制。文章围绕兽用头孢菌素的发展历程、作用机制... 详细信息

头孢菌素类抗生素具有抗菌谱广、抗菌活性强等特点,在人类医学领域应用十分广泛。在兽医临床中,由于药物种类较少及不规范使用而易使细菌产生交叉耐药性,头孢菌素的应用受到一定程度的限制。文章围绕兽用头孢菌素的发展历程、作用机制、药物代谢动力学与安全性等方面,总结了畜禽专用头孢菌素主要种类、抗菌活性及其在动物体内的药动学参数,比较了兽用头孢菌素的抗菌活性,以及其对敏感菌感染疾病的治疗效果。同时概述了头孢菌素类抗生素耐药性产生机制与耐药现状,并分析比较了各国在此类药物耐药性控制中采取的举措。通过对兽用头孢菌素类抗生素的发展及临床应用进行综述,有利于促进头孢菌素在兽医临床中的科学规范使用。

关键词：兽用头孢菌素药效学药物代谢动力学不良反应耐药性

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兽用二氨基嘧啶类抗菌增效剂毒理学研究进展

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中国兽药杂志 2019年第1期53卷 77-84页

作者：郭京超孙亚奇刘振利王旭袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院武汉430070

二氨基嘧啶类抗菌增效剂是一类广谱、高效的药物,广泛应用于临床。综述二氨基嘧啶类抗菌增效剂的毒性作用,主要包括急性毒性、长期毒性、遗传毒性等,以期为评价其安全性,指导临床合理使用,开发新药,避免应用危害提供参考。

关键词：甲氧苄啶二甲氧苄啶巴喹普林奥美普林艾地普林毒性

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土壤中氟苯尼考及其代谢物的HPLC测定方法

土壤中氟苯尼考及其代谢物的HPLC测定方法

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：马文瑾黄玲利国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院

[目的]建立土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法,为研究氟苯尼考在临床使用过程中的环境风险大小奠定基础。[方法]按照土壤学分类采集了壤土、砂土、砂壤土。土壤中的氟苯尼考及氟苯尼考胺使用水和丙酮进行提取,二氯甲... 详细信息

[目的]建立土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法,为研究氟苯尼考在临床使用过程中的环境风险大小奠定基础。[方法]按照土壤学分类采集了壤土、砂土、砂壤土。土壤中的氟苯尼考及氟苯尼考胺使用水和丙酮进行提取,二氯甲烷进行液液萃取,采用Agilent SB-C18（2504.6mm）色谱柱和等度洗脱（A:B=65%:35%）分离待测样品中的各组分。流动相A是磷酸盐缓冲液（pH=4.5）,B是乙腈,流速为0.8mL/min,进样量为20μL。[结果]在选定的色谱条件下,氟苯尼考及氟苯尼考胺在25-5000 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999。本方法的检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为15ng/mL和50ng/mL。在空白土壤中药物添加浓度分别为1倍、2倍、4倍定量限（50、100、200ng/mL）。在壤土中,添加FF的批间回收率分别为97.08±7.22%,95.10±4.45%,99.37±5.74%,日内变异系数<2.74%,日间变异系数<9.12%,添加FFA的批间回收率分别为88.77±6.97%,92.57±6.27%,96.86±4.79%,日内变异系数<7.63%,日间变异系数<8.23%。在砂土中,添加FF的批间回收率分别为94.22±6.92%,93.34±4.30%,95.95±2.42%,日内变异系数<6.64%,日间变异系数<9.41%,添加FFA的批间回收率分别为87.16±4.76%,87.10±13.95%,88.39±6.97%,日内变异系数<7.77%,日间变异系数<9.35%。在砂壤土中,添加FF的批间回收率分别为97.55±6.72%,91.01±8.41%,90.16±4.77%,日内变异系数<2.36%,日间变异系数<10.52%,添加FFA的批间回收率分别为67.63±5.28%,81.42±9.65%,75.07±3.73%日内变异系数<7.83%,日间变异系数<8.68%。[结论]方法学研究结果表明,本试验建立的土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺含量HPLC测定方法适用于土壤中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的测定。

关键词：氟苯尼考氟苯尼考胺土壤 HPLC

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副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药判定标准的建立

副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药判定标准的建立

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：米坤孙达郝海红蒲善菊袁宗辉黄玲利国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院

[目的]副猪嗜血杆菌为临床常见致病菌,造成巨大的经济损失。头孢喹肟为第四代头孢菌素类药物,能有效的治疗由副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸道疾病。由于,临床上抗生素的滥用和不合理使用,细菌耐药现象频繁发生。耐药判定标准能够判定副猪嗜... 详细信息

[目的]副猪嗜血杆菌为临床常见致病菌,造成巨大的经济损失。头孢喹肟为第四代头孢菌素类药物,能有效的治疗由副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸道疾病。由于,临床上抗生素的滥用和不合理使用,细菌耐药现象频繁发生。耐药判定标准能够判定副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药与否,科学预测副猪嗜血杆菌耐药性发展趋势,并保护头孢喹肟的有效性。[方法]测定头孢喹肟对副猪嗜血杆菌的MIC分布,根据ECOFFinder,得到野生型临界值;根据Eric-PCR鉴定实验和小鼠毒力实验选择在MIC下血清型5型且具有毒力的实验菌株,分别进行头孢喹肟对实验菌株的药效学试验以及在健康猪和患副猪嗜血杆菌病仔猪体内的药动学试验,收集给药后的不同时间点样品,通过HPLC测定血浆样品中头孢喹肟浓度。建立药动学-药效学同步模型,得到不同治疗效果时的PK-PD参数,通过蒙特卡洛模拟,得到药效学临界值;选择MIC,MIC,野生型临界值,相对敏感,相对耐药分别对应的MIC中具有毒力的副猪嗜血杆菌,对仔猪进行攻毒感染,使用头孢喹肟治疗患病仔猪,统计治疗结果,通过WindoW,得到野生型临界值。综合评价CO,CO和CO,得到最终的耐药判定标准。[结果]测定得到头孢喹肟对131株副猪嗜血杆菌MIC=0.125μg/ml,MIC=1μg/ml,通过ECOFFinder软件计算得到野生型临界值(CO)为4μg/ml;选择具有代表性的实验菌株为HPS42,分别进行药效学实验和药动学实验,根据不同时间点所对应PK-PD参数与相应细菌变化量,建立PK-PD同步模型,得到不同治疗效果（抑菌,杀菌,根除）所对应的PK-PD参数值分别为,健康组:23h,41h,51h和患病组:39h,70h,110h。通过蒙特卡洛模拟,得到药效学临界值为(CO)为0.125μg/ml;通过WindoW分析头孢喹肟对不同MIC感染下的患病仔猪的治愈率,得到临床临界值(CO)为0.25μg/ml～4μg/ml。综合评价CO,CO和CO.,副猪嗜血杆菌对头孢喹肟的耐药判定标准为4μg/ml。[结论]根据本研究所建立的副猪嗜血杆菌对头孢喹肟耐药判定标准,可判断副猪嗜血杆菌的敏感程度并提供相应的给药方案,保护头孢喹肟的有效性,减缓副猪嗜血杆菌耐药性的产生。本研究为耐药判定标准的建立提供科学指导。

关键词：副猪嗜血杆菌头孢喹肟耐药判定标准 MIC分布 PK-PD同步模型

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猪胸膜肺炎防线杆菌对头孢噻呋耐药判定标准的建立

猪胸膜肺炎防线杆菌对头孢噻呋耐药判定标准的建立

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：孙达米坤郝海红蒲善菊陈冬梅袁宗辉黄玲利国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉)华中农业大学动物医学院

[目的]猪胸膜肺炎放线杆菌为临床常见致病菌,造成巨大的经济损失。头孢噻呋是第一个用于动物的第三代头孢类抗生素,能有效的治疗由猪胸膜肺炎放线杆菌引起的猪呼吸道疾病。由于,临床上抗生素的滥用和不合理使用,细菌耐药现象频繁发生。... 详细信息

[目的]猪胸膜肺炎放线杆菌为临床常见致病菌,造成巨大的经济损失。头孢噻呋是第一个用于动物的第三代头孢类抗生素,能有效的治疗由猪胸膜肺炎放线杆菌引起的猪呼吸道疾病。由于,临床上抗生素的滥用和不合理使用,细菌耐药现象频繁发生。耐药判定标准能够判定猪胸膜肺炎放线杆菌对头孢噻呋与否,科学预测猪胸膜肺炎放线杆菌耐药性发展趋势,并保护头孢噻呋的有效性。[方法]测定头孢噻呋对猪胸膜肺炎放线杆菌的MIC分布,根据ECOFFinder,得到野生型临界值;根据Eric-PCR鉴定实验和小鼠毒力实验选择在MIC下血清型1型且具有毒力的实验菌株,分别进行头孢噻呋对实验菌株的药效学试验以及在健康猪和患猪胸膜肺炎放线杆菌仔猪体内的药动学试验,收集给药后的不同时间点样品,通过HPLC测定血浆样品中头孢噻呋浓度。建立药动学-药效学同步模型,得到不同治疗效果时的PK-PD参数,通过蒙特卡洛模拟,得到药效学临界值;选择MIC,MIC,野生型临界值,相对敏感,相对耐药分别对应的MIC中具有毒力的猪胸膜肺炎放线杆菌,对仔猪进行攻毒感染,使用头孢噻呋治疗患病仔猪,统计治疗结果,通过WindoW,得到野生型临界值。综合评价CO,CO和CO,得到最终的耐药判定标准。[结果]测定得到头孢噻呋对135株猪胸膜肺炎放线杆菌MIC=0.015μg/ml,MIC=0.5μg/ml,通过ECOFFinder软件计算得到野生型临界值(CO)为0.125μg/ml;选择具有代表性的实验菌株为BW39,分别进行药效学实验和药动学实验,根据不同时间点所对应PK-PD参数与相应细菌变化量,建立PK-PD同步模型,得到不同治疗效果（抑菌,杀菌,根除）所对应的PK-PD参数值分别为,健康组:45.73、63.83、69.04h和患病组:38.94、47.23、49.16h。通过蒙特卡洛模拟,得到药效学临界值为(CO)为2μg/ml;通过WindoW分析头孢噻呋对不同MIC感染下的患病仔猪的治愈率,得到临床临界值(CO)为0.5～1.25μg/ml。综合评价CO,CO和CO,猪胸膜肺炎放线杆菌对头孢噻呋的耐药判定标准为0.5～1μg/ml。[结论]根据本研究所建立的猪胸膜肺炎放线杆菌对头孢噻呋耐药判定标准,可判断猪胸膜肺炎放线杆菌的敏感程度并提供相应的给药方案,保护头孢噻呋的有效性,减缓猪胸膜肺炎放线杆菌耐药性的产生。本研究为耐药判定标准的建立提供科学指导。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌头孢噻呋耐药判定标准 MIC分布 PK-PD同步模型

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CYP1A1和CYP1B1在阿奇霉素和多西环素联合诱导的L02细胞氧化应激损伤中的作用

CYP1A1和CYP1B1在阿奇霉素和多西环素联合诱导的L02细胞氧化应激...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘爱梅潘源虎陈冬梅陶燕飞程古月刘振利袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]四环素类抗生素多西环素与大环内酯类抗生素阿奇霉素联合应用是为了提高疗效和延缓细菌耐药性的产生,临床上常用于治疗支原体感染以及呼吸系感染。然而,一些报道表明,这两种药物联合导致肝脏损伤,且致肝损害的分子机制尚不清楚,因... 详细信息

[目的]四环素类抗生素多西环素与大环内酯类抗生素阿奇霉素联合应用是为了提高疗效和延缓细菌耐药性的产生,临床上常用于治疗支原体感染以及呼吸系感染。然而,一些报道表明,这两种药物联合导致肝脏损伤,且致肝损害的分子机制尚不清楚,因此,本研究的目的是探索多西环素和阿奇霉素致肝损害的潜在分子机制,为预防和治疗这两种药物联合使用导致的肝损伤提供重要的参考价值。[方法]本研究以L02细胞为研究模型模型,单一和联合药物孵育细胞后,通过探索qPCR、Western blot检测代谢酶CYP1A1和CYP1B1,以及氧化应激基因HSP70、HO-1、NQO1、GCLC、AHR、ARNT、PXR和Nrf2的表达;用氧化应激指标检测试剂盒(8-OHdG、MDA、GSH、SOD、LDH和ROS)的变化;并且超表达和干扰CYP1A1和CYP1B1后加入药物,检测代谢酶在药物诱导的氧化应激中的作用。[结果]实验结果表明,多西环素和阿奇霉素以及联合使用可增加代谢酶CYP1A1和CYP1B1的表达,且氧化应激基因和指标也增加。同时,通过超表达或干扰CYP1A1和CYP1B1后加药,更加重了细胞的损伤,表明CYP1A1和CYP1B1介导了多西环素和阿奇霉素的氧化损伤。[结论]综上所述,本研究发现多西环素和阿奇霉素以及联合使用可通过CYP1A1和CYP1B1表达水平的增加而引起药物的氧化损伤,这将为多西环素和阿奇霉素以及联合用药时引起的药物性氧化肝损伤的治疗和预防提供参考价值。

关键词：多西环素阿奇霉素氧化损伤 CYP450酶

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PGC-1α在T-2毒素引起的氧化应激中的作用研究

PGC-1α在T-2毒素引起的氧化应激中的作用研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：郭璞彭大鹏刘振利谢长清袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]T-2毒素是单端孢霉烯族毒素中毒性最强的毒素,长期威胁畜禽动物和人类的健康。其毒素作用主要包括诱导机体产生氧化应激,诱导细胞凋亡等。目前T-2毒素细胞凋亡通路的研究比较充分,然而T-2毒素引起的氧化应激的机制尚未得到较好的... 详细信息

[目的]T-2毒素是单端孢霉烯族毒素中毒性最强的毒素,长期威胁畜禽动物和人类的健康。其毒素作用主要包括诱导机体产生氧化应激,诱导细胞凋亡等。目前T-2毒素细胞凋亡通路的研究比较充分,然而T-2毒素引起的氧化应激的机制尚未得到较好的阐释。PGC-1α作为转录共激活因子,与线粒体生物合成与代谢及抗氧化应激密切相关。但该基因在T-2毒素引起的氧化应激中发挥的作用尚不明确。[方法]本研究以大鼠脑垂体瘤细胞(GH3细胞)为模型,验证PGC-1α是否在T-2毒素作用下参与氧化应激的调控。通过RNAi和过表达试验进一步验证其相互作用方式。[结果]在T-2毒素作用GH3细胞后10,40 nMT-2毒素处理GH3细胞24小时后,PGC-1α的表达水平分别达到了1.60±0.07和12.35±0.59倍,Tfam的表达水平分别达到了1.34±0.18和2.98±0.15倍,说明10,40 nM T-2毒素显著增加了GH3细胞中PGC-1α和Tfam基因表达水平。同时western blot试验结果显示,10,40 nM T-2毒素处明显增加了GH3细胞中PGC-1α和TFAM蛋白表达水平。RNAi试验显示,GH3细胞在不干扰PGC-1α时,Tfam的基因水平显著增加。但是在干扰了PGC-1α后,Tfam的基因水平显著降低。Western blot结果与基因表达结果相似。此外,干扰了PGC-1α后,检测到抗氧化因子SOD和GSH-Px的活力都上升。[结论]PGC-1α在T-2毒素处理的GH3细胞中高表达,其在调控GH3细胞中线粒体转录因子Tfam的表达起着关键性作用,是细胞抵抗氧化应激的一个重要的因子,为后期进行以PGC-1α为靶点的抗氧化应激靶向研究奠定了基础。

关键词： PGC-1α 氧化应激 T-2毒素

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T-2毒素的垂体毒性机制研究

T-2毒素的垂体毒性机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：王旭黄玲利程古月袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)、农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

T-2毒素是镰刀菌(Fusarium)产生的次级代谢产物,也是A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种。其在自然界中分布非常广泛,大麦、小麦、燕麦、黑麦和玉米,以及储存的谷物均为T-2毒素的污染对象。T-2毒素对食品动物的一个重要毒性作用是生... 详细信息

T-2毒素是镰刀菌(Fusarium)产生的次级代谢产物,也是A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种。其在自然界中分布非常广泛,大麦、小麦、燕麦、黑麦和玉米,以及储存的谷物均为T-2毒素的污染对象。T-2毒素对食品动物的一个重要毒性作用是生长抑制,微量T-2毒素即可导致动物体重显著下降,经济损失严重,然而其毒性机制尚待深入开展。本研究发现微量T-2毒素能进入大脑,引起垂体病理损伤,导致垂体合成和分泌的生长激素(GH)水平明显下降。以GH3细胞和小鼠为模型,从炎性因子、氧化应激、信号通路角度,结合体内和体外试验揭示T-2毒素对垂体的损伤作用及其机制。研究表明,T-2毒素可下调GH合成中关键上游转录因子Pit-1基因表达和降低GH基因mRNA含量,导致GH释放异常。细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性升高,细胞内NO大量释放,破坏线粒体膜,激活caspase信号通路,引起GH合成与分泌异常。基于基因组和蛋白组的研究表明,T-2毒素作用于GH3细胞后激活PKR和HCK激酶,诱发核糖体应激反应,激活JNK通路,同时发现氨酰-tRNA合酶降低、蛋白二硫键异构酶,从而抑制GH合成;激活内质网应激晚期反应,内质网分子伴侣下调表达,导致GH生成量降低;干扰囊泡转运过程,降低GH分泌。基于基因组学结果,研究转录因子AKNA介导的T-2毒素所致生长抑制机理,发现T-2毒素可以诱导PKA/CREB和NF-κB/p65信号通路中关键蛋白CREB和p65蛋白的磷酸化,促使磷酸化p65进入细胞核,核内磷酸化的CREB和p65通过直接与AKNA启动子结合抑制AKNA的转录活性,使AKNA基因表达下调,引起GH和炎性因子表达水平显著下调,表明AKNA参与调控GH和炎性因子的表达,为T-2毒素介导的GH缺乏症提供了新的下游分子靶标。为揭示T-2毒素所致氧化应激的机制,从线粒体氧化应激、线粒体结构和功能变化、呼吸链核心铁硫蛋白亚基Ndufs3和线粒体生物合成调控因子NRF-2在T-2毒素引起的线粒体功能变化中的作用、线粒体自噬的角度揭示活性氧、线粒体损伤及自保护机制。综上所述,炎性因子高表达及线粒体损伤是T-2毒素所致垂体毒性的重要机制,该研究将为拮抗T-2毒素所致动物生长提供依据。

关键词： T-2毒素线粒体垂体毒性氧化应激

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