检索结果-内蒙古大学图书馆

四川农业大学学报 2009年第4期27卷 475-478页

作者：林涛汪开毓邓桦何启盖马春全四川农业大学动物医学院四川雅安625014 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织... 详细信息

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织切片进行检测。试验结果证明,该免疫组织化学方法具有良好的特异性、直观性,简单易行,可以对猪肺巨噬细胞中的存在的PCV2病毒抗原进行准确的定性和定位诊断。

关键词：免疫组织化学猪圆环病毒Ⅱ型诊断定位

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牛溶血性曼氏杆菌可视化LAMP检测方法的建立

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华中农业大学学报 2023年第2期42卷 32-37页

作者：刘宁宁易萍郭爱珍胡长敏陈颖钰华中农业大学动物医学院/农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室武汉430070 湖北省兽医流行病学国际科技合作基地武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070

为建立一种能够快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的可视化LAMP检测法,利用LAMP引物设计软件,以溶血性曼氏杆菌保守基因lktC序列设计内引物、外引物及环引物,对其反应温度、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度等条件进行优化... 详细信息

为建立一种能够快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的可视化LAMP检测法,利用LAMP引物设计软件,以溶血性曼氏杆菌保守基因lktC序列设计内引物、外引物及环引物,对其反应温度、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度等条件进行优化,并检测了方法的敏感性、特异性及实用性。结果显示,该方法在68.2℃、6 mmol/L Mg^(2+)、1.6 mmol/L dNTPs条件下达到最佳,40 min内完成检测并可通过肉眼判定结果,对细菌的最低检测限为6.7×10^(-1)cfu/μL,对lktC重组质粒的最低检测限为7.9×10^(2)copies/μL,敏感性高;与15种病原均不发生交叉反应,特异性好;对背景清晰小鼠肺组织样本检测结果显示该方法实用性良好,且优于普通PCR方法。表明该方法可快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌。

关键词：环介导等温扩增(LAMP) lktC基因溶血性曼氏杆菌可视化检测综合防控

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猪结合珠蛋自的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

猪结合珠蛋自的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：喻翠翠孟宪荣栗绍文梅仕林张望周蕾蕾陈辉毕丁仁华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室武汉 430070

本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)制备特异性单克隆抗体。方法是以梅山猪肝脏总RNA为模板，利用RT-PCR方法扩增猪hp基因，将其克隆到原核表达载体pGEX-KG和pET-32a上，转化至***21中，IPTG诱导下高效表达重组... 详细信息

本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)制备特异性单克隆抗体。方法是以梅山猪肝脏总RNA为模板，利用RT-PCR方法扩增猪hp基因，将其克隆到原核表达载体pGEX-KG和pET-32a上，转化至***21中，IPTG诱导下高效表达重组GST-Hp和HIS-Hp蛋白。用纯化的重组GST-Hp免疫BALB/c小鼠，用纯化的HIS-Hp作为包被抗原进行间接ELISA检测，通过淋巴细胞杂交瘤技术筛选阳性细胞株，制备单克隆抗体。结果表明筛选到2株高效分泌抗猪Hp单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为384和3C8。Western-blot和间接ELISA检测均表明制备的单克隆抗体具有良好的特异性。

关键词：猪结合珠蛋白基因克隆原核表达单克隆抗体间接ELISA检测

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7胶体金检测试纸条的研制

肠出血性大肠杆菌O157∶H7胶体金检测试纸条的研制

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中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十二届学术研讨会

作者：谢世琦孟宪荣栗绍文王倩潘秀华张超张丽嫒华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的食源性致病菌。本实验利用实验室制备的抗EHEC O157∶H7的单克隆抗体开展了O157∶H7胶体免疫层析检测试纸条的研究。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记单克隆抗体1H3后喷涂于玻璃纤维膜样品垫部... 详细信息

肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的食源性致病菌。本实验利用实验室制备的抗EHEC O157∶H7的单克隆抗体开展了O157∶H7胶体免疫层析检测试纸条的研究。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记单克隆抗体1H3后喷涂于玻璃纤维膜样品垫部位,以另一株单克隆抗体6F4包被于硝酸纤维素膜检测线作为捕获抗体,以兔抗鼠IgG多克隆抗体包被质控线,利用双抗夹心法制成EHEC O157胶体金免疫层析检测试纸条。该试纸条与EHEC O157反应成阳性,检测敏感性为105 CFU/mL,且特异性良好,显色时间在15min以内。本研究成果为开展食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的快速筛查提供了重要材料。

关键词：食品安全肠出血性大肠杆菌免疫胶体金检测技术试纸条

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一株猪高致病性蓝耳病病毒的分离鉴定与遗传变异分析

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中国兽药杂志 2020年第2期54卷 7-15页

作者：张维达杨康李自力农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为研究猪蓝耳病病毒(PRRSV)的遗传进化规律,于2018年从新疆某猪场采集的病猪血液中分离了一株PRRSV,命名为XJ-b。对临床样品采用RT-PCR扩增鉴定,将阳性样品过滤处理之后接种在Marc-145细胞系进行培养,将盲传3代之后出现病变(CPE)的Marc-... 详细信息

为研究猪蓝耳病病毒(PRRSV)的遗传进化规律,于2018年从新疆某猪场采集的病猪血液中分离了一株PRRSV,命名为XJ-b。对临床样品采用RT-PCR扩增鉴定,将阳性样品过滤处理之后接种在Marc-145细胞系进行培养,将盲传3代之后出现病变(CPE)的Marc-145样品进行间接免疫荧光鉴定。通过噬斑纯化后,利用RT-PCR对分离株的全基因组进行扩增,使用SeqMan软件对测序结果进行拼接,并根据NCBI上已公布的PRRSV全基因组及Nsp2基因核苷酸序列进行遗传进化与同源性比对分析。结果表明,临床病料RT-PCR检测呈PRRSV核酸阳性,处理后的病料接种至Marc-145细胞72 h之后产生CPE,间接免疫荧光鉴定为PRRSV抗原阳性;序列拼接显示分离株全基因组开放阅读框大小为15119 bp;全基因组和Nsp2基因核苷酸序列分析和同源性比对显示该分离毒株属于中国的高致病性PRRSV亚群。研究结果可为近年来新疆地区PRRSV的毒株差异分析提供参考。

关键词：猪高致病性蓝耳病病毒分离 Marc-145细胞基因组进化分析

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猪流产嗜性衣原体病的血清流行病学调查

猪流产嗜性衣原体病的血清流行病学调查

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第十一届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：段晓明梅仕林喻翠翠孟宪荣栗绍文何启盖华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室武汉 430070

本研究采用建立的rPOMP-iELISA方法968份分别来自于湖北、河南、广东和安徽的不同猪场的血清进行流产嗜性衣原体抗体流行病学检测。结果表明,猪流产嗜性衣原体病在湖北、河南等4省的感染率为100％,但不同猪场感染程度不同,不同生长阶段... 详细信息

本研究采用建立的rPOMP-iELISA方法968份分别来自于湖北、河南、广东和安徽的不同猪场的血清进行流产嗜性衣原体抗体流行病学检测。结果表明,猪流产嗜性衣原体病在湖北、河南等4省的感染率为100％,但不同猪场感染程度不同,不同生长阶段抗体阳性率也有差异,种猪高于仔猪,母猪高于公猪。

关键词：猪流产嗜性衣原体病流行病学调查血清检测

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J亚群禽白血病病毒gp85蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

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中国家禽 2014年第23期36卷 21-24页

作者：刘丽娜邵华斌栗绍文杨峻程国富胡薛英罗青平湖北省农科院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北武汉430064 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

制备J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85蛋白单克隆抗体,采用本实验室表达的ALV-J gp85蛋白作为免疫原,按照常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,利用获得的杂交瘤细胞制备腹水,用辛酸-硫酸铵沉淀法对腹水进行纯化... 详细信息

制备J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85蛋白单克隆抗体,采用本实验室表达的ALV-J gp85蛋白作为免疫原,按照常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,利用获得的杂交瘤细胞制备腹水,用辛酸-硫酸铵沉淀法对腹水进行纯化。结果获得了5株杂交瘤细胞:1B9、1G4、3A1、3D12、5G5。杂交瘤细胞上清抗体效价均在27以上,腹水抗体效价均在29以上。Western blot和间接免疫荧光试验表明,单克隆抗体可以与ALV-J gp85蛋白发生特异性反应。本研究制备的单克隆抗体为ALV-J抗原诊断试剂盒的开发奠定了基础。

关键词： J亚群禽白血病 gp85蛋白单克隆抗体

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猪FcRn胞浆尾区的克隆表达及多克隆抗体制备

猪FcRn胞浆尾区的克隆表达及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：崔惠娟洪素梅陈志虎毕丁仁李自力华中农业大学动物医学院，湖北省预防兽医学重点实验室，湖北武汉 430070

究采用RT-PCR方法从猪肝脏总RNA中克隆猪FcRn基因，然后利用PCR技术亚克隆猪FcRn胞浆尾区(FcRn-CT)，构建重组原核表达质粒KG-CT和pET32a-CT，分别在大肠杆菌BL21中获得了高效表达，并利用GlutathioneSepharose 4B和HisTrap FF crude亲...

究采用RT-PCR方法从猪肝脏总RNA中克隆猪FcRn基因，然后利用PCR技术亚克隆猪FcRn胞浆尾区(FcRn-CT)，构建重组原核表达质粒KG-CT和pET32a-CT，分别在大肠杆菌BL21中获得了高效表达，并利用GlutathioneSepharose 4B和HisTrap FF crude亲和层析柱纯化目的蛋白。用纯化蛋白KG-CT免疫新西兰白兔，制备了多克隆抗体。利用纯化蛋白pET32a-CT建立了间接ELISA法，检测多抗效价达1:32 000。Western blot检测结果表明该多抗特异性良好，为进一步研究FcRn在猪体内的表达分布及功能研究奠定了基础。

关键词：

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一株鸭源副黏病毒的分离鉴定

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中国家禽 2011年第9期33卷 50-51,53页

作者：王红琳商雨温国元罗青平张蓉蓉艾地云罗玲邵华斌杨峻湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北武汉430064 华中农业大学动物医学院湖北武汉430064

2010年8月,湖北某种鸭场免疫过禽流感、产蛋下降综合征疫苗的产蛋鸭出现产蛋下降症状,1周内产蛋率锐减50%左右,发病率达30%,有轻微的呼吸道症状,腹泻,或产软壳蛋、畸形蛋、沙壳蛋等劣质蛋,成年鸭几乎无死亡,青年鸭死亡率10％。

关键词：分离鉴定副黏病毒产蛋下降综合征呼吸道症状鸭源死亡率禽流感种鸭场

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鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

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动物医学进展 2014年第6期35卷 149-152页

作者：艾地云邵华斌张腾飞詹丽超罗玲张蓉蓉汪宏才王红琳罗青平温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北武汉430064 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为调查湖北地区健康鸡群中产气荚膜梭菌的分布状况,从规模化养鸡场采集鸡肛门棉拭子样品,应用厌气肉肝汤和CW琼脂培养基培养、紫牛乳反应、革兰染色及生化试验进行细菌的分离鉴定,应用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型,并对分离菌株... 详细信息

为调查湖北地区健康鸡群中产气荚膜梭菌的分布状况,从规模化养鸡场采集鸡肛门棉拭子样品,应用厌气肉肝汤和CW琼脂培养基培养、紫牛乳反应、革兰染色及生化试验进行细菌的分离鉴定,应用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型,并对分离菌株进行体外药敏试验。结果从120份样品中分离到9株(7.5%)产气荚膜梭菌,多重PCR都只扩增出α条带,毒素基因分型结果均为A型。药敏试验结果显示,分离菌株对链霉素、新霉素、丙氟哌酸、环丙沙星耐药,对丁胺卡那霉素,氯洁霉素中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林、四环素、头孢噻肟高度敏感。

关键词：产气荚膜梭菌分离鉴定基因分型药敏试验肉鸡

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