检索结果-内蒙古大学图书馆

四川农业大学学报 2009年第4期27卷 475-478页

作者：林涛汪开毓邓桦何启盖马春全四川农业大学动物医学院四川雅安625014 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织... 详细信息

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织切片进行检测。试验结果证明,该免疫组织化学方法具有良好的特异性、直观性,简单易行,可以对猪肺巨噬细胞中的存在的PCV2病毒抗原进行准确的定性和定位诊断。

关键词：免疫组织化学猪圆环病毒Ⅱ型诊断定位

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梅花鹿γ-干扰素在牛型结核病中的应用研究进展

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现代农业科技 2009年第23期 318-319,323页

作者：刘颖王冰陈伟郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室

梅花鹿γ-干扰素是细胞因子超家族中干扰素家族的特殊重要成员之一,具有广泛的生物学功能。其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质实现的。对梅花鹿γ-干扰素的诱导与产生、结核病特异性基因、梅花鹿γ-干扰素用于牛型结核病的检... 详细信息

梅花鹿γ-干扰素是细胞因子超家族中干扰素家族的特殊重要成员之一,具有广泛的生物学功能。其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质实现的。对梅花鹿γ-干扰素的诱导与产生、结核病特异性基因、梅花鹿γ-干扰素用于牛型结核病的检测原理及γ-干扰素优劣的研究进展进行综述。

关键词：梅花鹿 γ-干扰素结核杆菌检测原理

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奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析

奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍湖北省华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北省华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室湖北省华中农业大学动物科技学院

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同... 详细信息

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素抗病毒活性分别约4.26×10～5 U/IⅡL,8.91×10～4 U/mL。结果表明重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛α-干扰素类生物制品研发奠定了基础。

关键词：奶牛 α-干扰素融合蛋白抗病毒活性

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奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100... 详细信息

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×10～5 U/mL,7.5×10～4 U/mL。结果表明重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活件比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。

关键词：奶牛 β-干扰素融合蛋白抗病毒活性

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免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病的研究

免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病的研究

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第七届全国生物医学体视学学术会议、第十届全军军事病理学学术会议、第六届全军定量病理学学术会议

作者：林涛汪开毓邓桦何启盖马春全四川农业大学动物医学学院四川雅安 625014 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山 528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室武汉 430070 农业微生物学国家重点实验室武汉 430070

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2，pcv2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic waxing syndrome，PWMS)的病原。目前pcv2已经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一，并给世界各地的养猪业造成了巨大的经济损... 详细信息

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2，pcv2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic waxing syndrome，PWMS)的病原。目前pcv2已经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一，并给世界各地的养猪业造成了巨大的经济损失。猪圆环病毒存在pcv1和pcv2两种血清型。其中pcv1没有致病性，但却普通存在于猪群和各种猪源传代细胞中，但是pcv2具有致病性，常和prrs，ppv，pnds等混合感染，引起免疫失败。pcv1和pcv2的ORF2编码的病毒结构蛋白具有良好的抗原性，且不发生血清学交叉反应。所以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白是很好的免疫原。以该抗原作为研究对象建立临床简单有效的检测方法。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型免疫组织化学法重组蛋白

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgGFc基因在HeLa细胞中的融合表达

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中国兽医学报 2008年第10期28卷 1145-1149页

作者：张明富陈汉阳彭博佟铁俦陈焕春郭爱珍华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

根据GenBank中发表的猪的IgG Fc段基因及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模板扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41S基因的质粒为模板扩增出IBVS1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV... 详细信息

根据GenBank中发表的猪的IgG Fc段基因及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模板扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41S基因的质粒为模板扩增出IBVS1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBVS1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)的真核表达载体pcD-NA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因猪IgG Fc基因真核表达融合表达

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgG Fc基因在HeLa细胞中的融合表达

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生物技术通报 2008年第S1期24卷 276-281页

作者：张明富陈汉阳彭博佟铁俦陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

根据Genbank中发表的猪IgG Fc段基因及IBV S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41 S基因的质粒为模板扩增出IBV S1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5 kb,IgG... 详细信息

根据Genbank中发表的猪IgG Fc段基因及IBV S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41 S基因的质粒为模板扩增出IBV S1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5 kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBV S1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)真核表达载体pcDNA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫荧光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因猪IgG Fc基因真核表达融合表达

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一株猪源鼠伤寒沙门氏菌的耐药性鉴定及其消除

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微生物学报 2006年第5期46卷 789-795页

作者：贾爱卿刘维红郭爱珍陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着... 详细信息

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着质粒的消除而被消除。所鉴定的耐药基因有blaTEM、blaOXA-1、cat1、tet(B)、aacC2、aadA8b、dhfrXⅡ和sul1等。喹诺酮类药物的靶基因gyrA与parC位于染色体上。GyrA在耐药决定区第87位氨基酸突变(N78D),导致了喹诺酮类药物的耐药性逆转。敏感菌中扩增不到质粒毒力基因spv与rck。耐药性消除后的菌株17S1对小鼠的毒力降低(LD50增加10倍),在小鼠体内的增长与散速度也显著降低(P<0.05)。以上证据表明,鼠伤寒沙门氏菌的多重耐药性主要由质粒决定,研究开发新型质粒消除剂将对克服鼠伤寒沙门氏菌多重耐药性具有重要意义。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌耐药性质粒消除细菌毒力整合子

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检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 220-225页

作者：汪招雄何启盖刘丽娜刘正飞黄红亮陈焕春华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏... 详细信息

以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏度达15.6ng(0.156μg/mL),与乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪流感病毒(SIV)等无交叉反应。批间和批内变异系数较小,分别为6.39%和4.1%。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测,发现二者的符合率可达到77.4%,比PCR敏感。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可广泛应用于动物组织中PrV的检测。

关键词：双抗体夹心间接ELISA 单克隆抗体猪伪狂犬病毒Ea株

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口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及检测应用

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生物技术通报 2006年第C00期22卷 544-548页

作者：李任峰何启盖刘正飞钱平阮力华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南科技学院动物科学学院新乡453003

用纯化的口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus,FMDV)免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,经筛选获得多株能稳定分泌抗FMDV单抗的杂交瘤细胞株。选择其中一株(2G12)用于下列实验,其细胞培养... 详细信息

用纯化的口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus,FMDV)免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,经筛选获得多株能稳定分泌抗FMDV单抗的杂交瘤细胞株。选择其中一株(2G12)用于下列实验,其细胞培养上清液的效价是1:256,腹水效价是1:1280;以自行制备的兔抗FMDV高免血清IgG为捕获抗体包被酶联免疫吸附试验微量反应板,以单抗2G12为第二抗体,建立了快速检测FMDV抗原的双抗体夹心ELISA,该方法能检出90ng病毒,而且只与FMDV发生特异性反应,与猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和乙脑病毒(JEV)均不发生反应。本研究为检测口蹄疫病毒抗原提供了灵敏和特异的方法。

关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体双抗体夹心ELLSA 抗原检测

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