检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2011年第4期41卷 342-346页

作者：陈龙杨晓红徐敏朱碧波陈焕春曹胜波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导29... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导293FT细胞。通过报告基因EGFP表达、间接免疫荧光和Western-blot检测,结果表明,上述三质粒共转染293FT细胞后,获得了假病毒,并且该假病毒可以高效转导正常293FT细胞。同时,PrM-E基因可以在被转导细胞中正确表达,从而为研制基于慢病毒载体的乙型脑炎病毒新型疫苗奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒慢病毒载体 PrM-E基因

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禽多杀性巴氏杆菌脂蛋白E基因的原核表达及其对小鼠的免疫原性

引用

湖北农业科学 2011年第4期50卷 854-857页

作者：崔卫涛胡思顺王延昭周晓芬李自力肖运才毕丁仁华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

根据禽多杀性巴氏杆菌ATCC12 948株脂蛋白E基因(plpE)序列设计一对特异性引物,经PCR从禽多杀性巴氏杆菌C48-1株中扩增获得了全长plpE基因,大小约1kb。将plpE基因片段插入原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-plpE。转化大肠杆... 详细信息

根据禽多杀性巴氏杆菌ATCC12 948株脂蛋白E基因(plpE)序列设计一对特异性引物,经PCR从禽多杀性巴氏杆菌C48-1株中扩增获得了全长plpE基因,大小约1kb。将plpE基因片段插入原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-plpE。转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达获得了重组蛋白plpE。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白plpE约为37.8kD,与预期大小相符。Western blot检测结果表明,重组蛋白plpE能与C48-1菌体阳性血清发生特异性反应,用重组蛋白plpE免疫小鼠,二免后2周用10LD50 C48-1菌株攻毒即获得了100%的保护,表明该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步的交叉保护性试验研究和禽霍乱亚单位疫苗研制奠定了基础。

关键词：禽巴氏杆菌原核表达免疫原性

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BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立

引用

动物医学进展 2011年第11期32卷 1-5页

作者：刘晓乐张敏敏陈颖钰胡长敏陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学动物科技学院湖北武汉430070

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件... 详细信息

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件为94℃30s,56.2℃30s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5min,16℃10min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425bp和294bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门菌等均呈阴性反应。对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3 TCID50/0.1mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL。

关键词：双重PCR 检测方法牛副流感病毒3型牛病毒性腹泻病毒

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奶牛传染性鼻气管炎病毒gG基因PCR检测方法的建立

引用

中国畜牧兽医 2011年第10期38卷 94-98页

作者：王冰张敏敏邹新峰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物科技学院湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

本试验旨在建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒,又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒gG基因的特异性引物,建立PCR方法,对牛传染性鼻气管炎病毒参考毒株和阳性样本进行扩增,... 详细信息

本试验旨在建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒,又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒gG基因的特异性引物,建立PCR方法,对牛传染性鼻气管炎病毒参考毒株和阳性样本进行扩增,结果均能扩增出一条463bp的特异性条带;对同属的牛疱疹病毒5型进行扩增,获得651bp和431bp两条带;对同属伪狂犬病病毒进行扩增,获得493bp的条带;而非相关病毒(如猪呼吸与繁殖综合征病毒等),不能扩增出条带。对牛传染性鼻气管炎病毒的检测灵敏度为2×10-3 PFU/mL。鉴于该方法具有良好的灵敏度和特异性,将在牛疱疹病毒感染诊断和标记疫苗免疫后的鉴别诊断方面具有良好的应用前景。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 牛疱疹病毒 gG基因

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细胞凋亡的主要检测方法研究进展

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动物医学进展 2011年第8期32卷 89-92页

作者：张广智胡长敏陈颖钰刘颖李帅罗雨王金勇郭爱珍陈焕春华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室湖北武汉430070

细胞凋亡是生理性细胞死亡过程,凋亡在维持动物机体内环境平衡中扮演着极其重要的角色。细胞凋亡的准确检测是研究细胞凋亡相关机制,以及评价细胞凋亡在相应组织或疾病中影响的第一步。形态学是检测细胞凋亡的最直观的方法,至今一直作... 详细信息

细胞凋亡是生理性细胞死亡过程,凋亡在维持动物机体内环境平衡中扮演着极其重要的角色。细胞凋亡的准确检测是研究细胞凋亡相关机制,以及评价细胞凋亡在相应组织或疾病中影响的第一步。形态学是检测细胞凋亡的最直观的方法,至今一直作为细胞凋亡检测的金标准。DNA片段化检测主要有DNA ladder,TUNEL检测法和ELISA检测法。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡的早期事件。凋亡相关基因的检测包括促凋亡基因的检测和抑制凋亡基因的检测。流式细胞术检测细胞凋亡是近些年发展的简单快捷的方法,即可定性又可定量。Ca2+作为细胞内重要的信号分子其浓度和细胞凋亡关系密切相关。

关键词：细胞凋亡线粒体膜电位流式细胞术

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牛副流感病毒3型RT-PCR检测方法的建立

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中国奶牛 2011年第22期 1-4页

作者：刘晓乐张敏敏陈颖钰胡长敏陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学动物科技学院武汉430070

参照GenBank中公布的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus 3,BPIV-3)全基因序列,针对BPIV-3特异性NP蛋白保守基因设计一对引物,建立了BPIV-3的RT-PCR诊断方法。其最佳扩增退火温度为58.1℃,引物浓度为1.0μmol/L。采用该方法扩... 详细信息

参照GenBank中公布的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus 3,BPIV-3)全基因序列,针对BPIV-3特异性NP蛋白保守基因设计一对引物,建立了BPIV-3的RT-PCR诊断方法。其最佳扩增退火温度为58.1℃,引物浓度为1.0μmol/L。采用该方法扩增BPIV-3参考病毒,能扩增出425bp预期大小的特异性片段,而扩增牛病毒性腹泻/黏膜病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、大肠埃希氏菌、牛巴氏杆菌和沙门氏菌等常见病毒和细菌均呈阴性结果。对参考病毒进行梯度稀释检测,结果证明该法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3TCID50/0.1mL。

关键词： PCR 检测方法牛副流感病毒3型

来源：评论

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牛副流感病毒3型RT-PCR检测方法的建立

牛副流感病毒3型RT-PCR检测方法的建立

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中国奶业协会第26次繁殖学术年会暨国家肉牛牦牛/奶牛产业技术体系第3届全国牛病防治学术研讨会

作者：刘晓乐张敏敏陈颖钰胡长敏陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学动物科技学院

参照GenBank中公布的牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus 3,BPIV-3）全基因序列,针对BPIV-3特异性NP蛋白保守基因设计一对引物,建立了BPIV-3的RT-PCR诊断方法。其最佳扩增条件:94℃30 s,58.1℃30 s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5 min,16℃10 min;引物浓度为1.0μmol/L。采用该方法扩增BPIV-3参考病毒,能扩增出425bp预期大小的特异性片段,而扩增牛病毒性腹泻/粘膜病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、大肠埃希氏菌、牛巴氏杆菌和沙门氏菌等常见病毒和细菌均呈阴性反应。对参考病毒进行梯度稀释检测,结果证明该法检测BPIV-3的灵敏度可达10～（-3）TCID/0.1ml。

关键词： PCR 检测方法牛副流感病毒3型

来源：评论

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牛传染性鼻气管炎病毒gG基因PCR检测方法的建立

牛传染性鼻气管炎病毒gG基因PCR检测方法的建立

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中国奶业协会第26次繁殖学术年会暨国家肉牛牦牛/奶牛产业技术体系第3届全国牛病防治学术研讨会

作者：王冰张敏敏邹新峰刘正飞陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物科技学院华中农业大学动物医学院

建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheiti s virus,IBRV),又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒的gG基因的特异性引物,建立PCR方法,反应条件是:9... 详细信息

建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheiti s virus,IBRV),又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒的gG基因的特异性引物,建立PCR方法,反应条件是:94℃预变性5min,94℃1min,58℃1min,72℃1min,30个循环,72℃7min,4℃5min。对IBRV参考毒株和阳性样本扩增,结果均能扩增出一条463bp的特异性条带;对同属的牛疱疹5型病毒扩增,获得651bp和431bp两条带;对同属伪狂犬病毒扩增,获得483 bp的条带;而非相关病毒猪呼吸与繁殖综合症病毒等,不能扩增出条带。对IBRV的检测灵敏度为0.002个PFU/ml。鉴于该方法具有良好的灵敏度和特异性,将在牛疱疹病毒感染诊断和标记疫苗免疫后的鉴别诊断方面具有良好的应用前景。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 牛疱疹病毒 gG

来源：评论

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牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR的建立

牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR的建立

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中国奶业协会第26次繁殖学术年会暨国家肉牛牦牛/奶牛产业技术体系第3届全国牛病防治学术研讨会

作者：刘晓乐张敏敏陈颖钰胡长敏陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学动物科技学院

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus3,BPIV-3）和牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）全基因序列,分别针对BPIV特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件... 详细信息

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus3,BPIV-3）和牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）全基因序列,分别针对BPIV特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。在其最佳扩增条件:94℃30 s,56.2℃30 s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5 min,16℃10 min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒,能同时扩增出425bp和294bp预期大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、大肠埃希氏菌、牛巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌和沙门氏菌等牛常见病毒和细菌均呈阴性反应。对参考病毒进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10～（-3）TCID/0.1ml,而BVDV的灵敏度达10～2TCID/0.1ml。

关键词：双重PCR 检测方法牛副流感病毒3型牛病毒性腹泻病毒牛

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牛呼吸疾病综合征及其防治

引用

中国奶牛 2011年第24期 7-11页

作者：郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

牛呼吸疾病综合征是严重危害国内外肉牛养殖业的一种重要传染病,该病的致病因素复杂,包括支原体、病毒和细菌等特异性病原以及运输应激等多种因素。美国等发达国家对该病的攻关研究开始于上世纪80年代初,其研究和临床防控均已达到较高水... 详细信息

牛呼吸疾病综合征是严重危害国内外肉牛养殖业的一种重要传染病,该病的致病因素复杂,包括支原体、病毒和细菌等特异性病原以及运输应激等多种因素。美国等发达国家对该病的攻关研究开始于上世纪80年代初,其研究和临床防控均已达到较高水平,但仍认为该病将是未来10～20年养牛业所面临的主要疾病。我国对该病的认识和研究尚处于起步阶段,借鉴世界上发达国家的先进经验将有助于提升我国对该病的防控水平。

关键词：牛呼吸疾病综合征支原体病毒细菌运输应激

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