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中国奶业协会第26次繁殖学术年会暨国家肉牛牦牛/奶牛产业技术体系第3届全国牛病防治学术研讨会

作者：程实陈伟陈颖钰陈军苗北平郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉市结核病防治研究所

结核病对畜牧业及人类健康带来了极大的威胁,快速准确诊断对防治该病具有重要意义。本研究针对结核分枝杆菌群四个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,建立了一种多重PCR方法。通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg～(2+... 详细信息

结核病对畜牧业及人类健康带来了极大的威胁,快速准确诊断对防治该病具有重要意义。本研究针对结核分枝杆菌群四个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,建立了一种多重PCR方法。通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg～(2+)浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条件,扩增产物的大小分别为824bp、621 bp、418 bp和254 bp,能特异性检测并鉴别出非结核分枝杆菌(824 bp 1条带)、卡介苗(824 bp和621 bp 2条带)、牛分枝杆菌(824 bp、621 bp和254 bp3条带)和结核分枝杆菌(4条带)。检测灵敏度达到50个菌/模板。对42份牛结核菌素皮内变态反应阳性牛的肺淋巴结样本和115份肺结核病人的痰液样品进行了检测,其检出率或准确率明显高于传统方法。

关键词：结核结核分枝杆菌牛分枝杆菌多重PCR 鉴别诊断

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牛支原体引起奶牛乳房炎的诊断

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中国奶牛 2011年第4期 1-3页

作者：彭清洁胡长敏陈颖钰巴晓亮白智迪郭爱珍华中农业大学动物医学院武汉430070 国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起成年牛乳房炎和犊牛肺炎、关节炎的主要病原之一。本文从有乳房炎临床症状的奶牛中采集牛奶样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR与环介导等温扩增(LAMP扩增)和16S rRNA测序等病原学检测证实为牛支... 详细信息

牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起成年牛乳房炎和犊牛肺炎、关节炎的主要病原之一。本文从有乳房炎临床症状的奶牛中采集牛奶样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR与环介导等温扩增(LAMP扩增)和16S rRNA测序等病原学检测证实为牛支原体感染,同时还有其他细菌的混合感染。

关键词：奶牛牛支原体感染乳房炎

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一例奶牛发生牛支原体肺炎的诊断

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中国奶牛 2011年第2期 1-3页

作者：胡长敏彭清洁陈颖钰巴晓亮白智迪郭爱珍华中农业大学动物医学院武汉430070 国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

牛支原体是严重影响养牛业发展的重要病原。2008年我们报道牛支原体导致"肉牛传染性牛支原体肺炎"以来,主要在肉牛发现该病。本文从临床出现类似症状的运输后发病奶牛采集样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR扩增和16S r... 详细信息

牛支原体是严重影响养牛业发展的重要病原。2008年我们报道牛支原体导致"肉牛传染性牛支原体肺炎"以来,主要在肉牛发现该病。本文从临床出现类似症状的运输后发病奶牛采集样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR扩增和16S rRNA测序等病原学检测证实为牛支原体感染。

关键词：牛支原体奶牛感染呼吸系统疾病

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猪病毒性腹泻的流行病学调查

猪病毒性腹泻的流行病学调查

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中国畜牧兽医学会2011学术年会

作者：库旭钢张坤赵洪翠刘云波何启盖农业微生物学国家重点实验室湖北武汉 430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉 430070

利用实验室成功建立的猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法，对从临床收集的腹泻样品进行检测。在整理2009年1月到2011年4月的临床样品的检测结果时发现：由猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒... 详细信息

利用实验室成功建立的猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法，对从临床收集的腹泻样品进行检测。在整理2009年1月到2011年4月的临床样品的检测结果时发现：由猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒为主要病原引起的病毒性腹泻病的发生情况正在发生新的的变化。指出，造成大规模腹泻病发生的原因是复杂的，如果只针对单一的病原进行预防，是很难收到良好的效果的。

关键词：猪病毒性腹泻流行病学发病机制 RT-PCR检测法

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鸭疫里氏杆菌dpp Ⅳ基因缺失突变株的构建与鉴定

鸭疫里氏杆菌dpp Ⅳ基因缺失突变株的构建与鉴定

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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛

作者：周祖涛李自力彭晓娅肖运才王喜亮金卉刘梅石德时孟宪荣毕丁仁华中农业大学动物医学院湖北武汉 430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉 430070

鸭疫里氏杆菌(RA)病是严重危害全世界养鸭业的主要细菌性传染病之一，该病给养鸭业造成了巨大的经济损失。然而，目前对RA的毒力因子和致病机理知之甚少。二肽肽酶Ⅳ(DPP Ⅳ)是多种病原菌重要的毒力因子，能够介导病原菌的粘附、降解结... 详细信息

鸭疫里氏杆菌(RA)病是严重危害全世界养鸭业的主要细菌性传染病之一，该病给养鸭业造成了巨大的经济损失。然而，目前对RA的毒力因子和致病机理知之甚少。二肽肽酶Ⅳ(DPP Ⅳ)是多种病原菌重要的毒力因子，能够介导病原菌的粘附、降解结缔组织以及引起血管通透性的变化等，在体内外条件下RAdpp Ⅳ基因的差异表达显著，因此推测二肽肽酶Ⅳ可能是RA重要的毒力因子。本研究采用基因组步移技术分段克隆RA血清1型云梦分离株(RA-YM)dpp Ⅳ全基因，构建含壮观霉素抗性基因的pRE-LSR重组转移质粒，并转化供体菌*** X7213，通过接合转移和SacB负向筛选标记完成RA-YM dpp Ⅳ基因缺失突变株的构建与筛选，并利用PCR对突变株进行验证，结果表明获得了比较稳定的dpp Ⅳ基因缺失突变株，为下一步确定DPP Ⅳ是RA关键的毒力因子奠定基础以及为RA基因工程疫苗的设计与研发提供理论依据。

关键词：鸭疫里氏杆菌二肽肽酶Ⅳ 缺失突变株基因构建菌种鉴定

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一例奶牛牛支原体乳房炎的诊断

一例奶牛牛支原体乳房炎的诊断

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中国奶业协会第26次繁殖学术年会暨国家肉牛牦牛/奶牛产业技术体系第3届全国牛病防治学术研讨会

作者：彭清洁胡长敏陈颖钰巴晓亮白智迪郭爱珍华中农业大学动物医学院国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

牛支原体(Mycoplasma bovi s)是引起成牛乳房炎和犊牛肺炎、关节炎的主要病原之一。本文从有乳房炎临床症状的奶牛中采集牛奶样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR与LAMP扩增和16s rRNA测序等病原学检测证实为牛支原体感染,同时还有... 详细信息

牛支原体(Mycoplasma bovi s)是引起成牛乳房炎和犊牛肺炎、关节炎的主要病原之一。本文从有乳房炎临床症状的奶牛中采集牛奶样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR与LAMP扩增和16s rRNA测序等病原学检测证实为牛支原体感染,同时还有其它细菌的混合感染。

关键词：奶牛牛支原体感染乳房炎

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牛支原体病的流行特点与防控措施

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兽医导刊 2011年第11期 41-43页

作者：胡长敏郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室湖北武汉430070

支原体是一类在自然界广泛存在、能在无活细胞培养基中繁殖、无细胞壁、高度多形性的最小微生物，据报道己分离鉴定的牛的支原体约有30种，但最为严重的有两种，一种是丝状支原体丝状亚种小菌落型，导致牛传染性胸膜肺炎（CBPP），另一... 详细信息

支原体是一类在自然界广泛存在、能在无活细胞培养基中繁殖、无细胞壁、高度多形性的最小微生物，据报道己分离鉴定的牛的支原体约有30种，但最为严重的有两种，一种是丝状支原体丝状亚种小菌落型，导致牛传染性胸膜肺炎（CBPP），另一种是牛支原体，导致牛支原体肺炎，二者属于支原体属不同种。

关键词：牛传染性胸膜肺炎支原体病防控措施流行特点丝状支原体细胞培养基支原体肺炎分离鉴定

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利用酵母双杂交系统在人脑cDNA文库中筛选与禽流感病毒核蛋白相互作用的蛋白质

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生物工程学报 2010年第8期26卷 1037-1041页

作者：尹文偲胡勇金梅林华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

禽流感病毒核蛋白(NP)在病毒的转录、复制以及决定病毒的宿主特异性方面都具有重要作用。通过酵母双杂交系统筛选与核蛋白相互作用的蛋白,为进一步了解NP蛋白与细胞内蛋白质的相互关系以及流感病毒与宿主的相互关系奠定基础。应用酵母... 详细信息

禽流感病毒核蛋白(NP)在病毒的转录、复制以及决定病毒的宿主特异性方面都具有重要作用。通过酵母双杂交系统筛选与核蛋白相互作用的蛋白,为进一步了解NP蛋白与细胞内蛋白质的相互关系以及流感病毒与宿主的相互关系奠定基础。应用酵母双杂交系统,构建NP诱饵质粒,进而筛选人脑cDNA文库,寻找可能与禽流感病毒NP相互作用的蛋白质。经过酵母双杂交共验证,得到7个与NP相互作用的阳性克隆。该结果为深入了解病毒复制的分子机理及其在蛋白质水平上与宿主蛋白的相互作用关系提供了线索。

关键词：禽流感病毒核蛋白人脑cDNA文库酵母双杂交系统蛋白间相互作用

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猪维甲酸诱导基因Ⅰ的克隆及其在诱导Ⅰ型干扰素中的作用

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畜牧兽医学报 2010年第2期41卷 135-140页

作者：王荡方六荣梅小伟谢立兰陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本研究旨在探讨猪维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构特征及其在Ⅰ型干扰素信号通路中的作用.从猪外周血单核细胞中克隆猪RIG-Ⅰ全长cDNA,进一步构建猪RIG-Ⅰ全长及不同区域缺失突变体的真核表达载体,通过IFN-β,IRF3和NF-κB的荧光素酶报... 详细信息

本研究旨在探讨猪维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构特征及其在Ⅰ型干扰素信号通路中的作用.从猪外周血单核细胞中克隆猪RIG-Ⅰ全长cDNA,进一步构建猪RIG-Ⅰ全长及不同区域缺失突变体的真核表达载体,通过IFN-β,IRF3和NF-κB的荧光素酶报告系统分析猪RIG-Ⅰ在诱导Ⅰ型干扰素中的作用.结果表明,猪RIG-Ⅰ开放读码框全长为2 832 bp,编码943个氨基酸,与鸭嘴兽、大鼠、小鼠、猴、黑猩猩、人、马和牛RIG-Ⅰ相应序列的同源性为53.2%～83.2%.猪RIG-Ⅰ超表达能显著激活转录因子IRF3和NF-κB,并诱导IFN-β的产生.缺失猪RIG-Ⅰ的CARD区不仅不能激活下游信号,而且还负调控poly(I:C)诱导IFN-β的能力.结果提示RIG-Ⅰ是猪天然免疫系统中的一个模式识别受体,在Ⅰ型干扰素诱导的信号通路中具有重要作用.

关键词：猪 RIG-Ⅰ 克隆序列分析干扰素信号通路

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规模化猪场戊型肝炎病毒感染状况的调查与分析

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畜牧兽医学报 2010年第10期41卷 1268-1273页

作者：张厚勇陈东升张懿伍宜权何启盖刘正飞华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为调查规模化猪场中戊型肝炎病毒（HEV）感染和流行特征，首先在4个猪场采集血样80份，用酶联免疫吸附试验（EusA）检测抗-HEVIgG抗体。在此基础上，作者于2007—2009年采集规模化猪场肛拭子样品415份，及规模化猪场送检的临床病猪肝脏... 详细信息

为调查规模化猪场中戊型肝炎病毒（HEV）感染和流行特征，首先在4个猪场采集血样80份，用酶联免疫吸附试验（EusA）检测抗-HEVIgG抗体。在此基础上，作者于2007—2009年采集规模化猪场肛拭子样品415份，及规模化猪场送检的临床病猪肝脏样品135份，应用巢式PCR（RT—nPCR）方法进行HEVRNA检测，将PCR扩增产物测序，利用Neighbour—joining法进行进化分析。结果：4个猪场80份血清中HEV阳性血清56份，抗一HEV抗体阳性率高达60．0％以上。8个规模化猪场中有5个猪场的肛拭子检测到HEV，肛拭子阳性率8．43％（35／415）；从临床送检的发病猪采集的肝脏样品中HEV阳性率为15．55％（21／135）；HEVRNA最早检出日龄为7d，最晚检出日龄为84d。遗传进化分析表明：测序的38株阳性毒株之间同源性为92％～100％，均属于HEV基因4型。其中，从肛拭子中分离的毒株（FJ445406）与猪源毒株DQ279091株处在同一分支上；而肝脏中分离的毒株（GQ202266．1）和人源毒株处在一个亚支，属于4型中的同一亚型，表明该毒株与人源毒株亲缘关系较近。本研究表明华中地区猪群中普遍存在HEV感染，阳性率较高。本研究为规模化猪场HEV的防控提供了依据。

关键词：规模化猪场 HEV 流行病学

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