检索结果-内蒙古大学图书馆

牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株Fnbp配基结合区基因的原核表达及其免疫原性

中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：胡长敏龚瑞郑露郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

PCR扩增牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株纤粘蛋白结合蛋白(Fnbp)配基结合区基因,纯化后的扩增产物克隆到表达载体pET-28a(+)构建重组表达质粒pET-28a-Fnb,酶切鉴定和测序证明重组质粒构建成功。将pET-28a-Fnb转化大肠杆菌BL21经诱导表达... 详细信息

PCR扩增牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株纤粘蛋白结合蛋白(Fnbp)配基结合区基因,纯化后的扩增产物克隆到表达载体pET-28a(+)构建重组表达质粒pET-28a-Fnb,酶切鉴定和测序证明重组质粒构建成功。将pET-28a-Fnb转化大肠杆菌BL21经诱导表达得到重组蛋白,Western blot分析证实该蛋白具有良好的免疫学活性。重组蛋白分别与弗氏佐剂、白油佐剂、Seppic佐剂乳化后制备亚单位疫苗,间隔2周共3次腹腔注射免疫小鼠。选取三免后血清抗体效价最高的免疫组血清和小鼠分别进行粘附实验、中性粒细胞吞噬实验和乳腺内金黄色葡萄球菌灌注攻毒实验。结果:三种不同佐剂重组蛋白免疫组中白油佐剂组小鼠血清抗体效价显著高于弗氏佐剂组和Seppic佐剂组(p<0.01)。与对照组相比,重组蛋白免疫组小鼠血清粘附能力和调理中性粒细吞噬能力显著增强(p<0.05)。攻毒后24h重组蛋白免疫组小鼠乳腺金黄色葡萄球菌CFU显著低于对照组(p<0.05)。研究结果表明重组Fnbp配基结合区蛋白有良好的生物学活性和免疫原性,可以作为奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎候选亚单位疫苗。

关键词：乳腺炎金黄色葡萄球菌 Fnbp配基结合区免疫原性r

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牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株ClfA配基结合区基因的克隆、表达及免疫效果的评价

牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌J9株ClfA配基结合区基因的克隆、表达及...

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中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

作者：龚瑞胡长敏郑露郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

运用PCR方法扩增出临床分离的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌J9株ClfA配基结合区基因,大小为1017 bp。将其与PMD 18-T载体连接,构建克隆载体。克隆载体酶切鉴定正确后采用亚克隆技术构建了重组表达质粒pET-28a(+)-ClfA,酶切鉴定及测序结果都... 详细信息

运用PCR方法扩增出临床分离的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌J9株ClfA配基结合区基因,大小为1017 bp。将其与PMD 18-T载体连接,构建克隆载体。克隆载体酶切鉴定正确后采用亚克隆技术构建了重组表达质粒pET-28a(+)-ClfA,酶切鉴定及测序结果都表明获得了正确的原核表达质粒。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后,获得大小为46 KD左右的蛋白。Western blot分析显示,重组蛋白有很好的免疫原性。将纯化的蛋白与白油佐剂、弗氏佐剂和Seppic206佐剂乳化制成亚单位疫苗,经腹腔免疫小鼠。选取三种佐剂中血清抗体效价最高的免疫组进行间接免疫荧光试验、中性粒细胞调理吞噬试验及乳腺内金黄色葡萄球菌灌注攻毒试验。结果显示,与对照组相比,免疫组血清与金黄色葡萄球菌表面抗原结合能力及调理中性粒细胞吞噬细菌能力显著增强(p<0.05);攻毒后,免疫组乳腺内细菌数较对照组量显著降低(p<0.05)。以上研究结果表明ClfA配基结合区蛋白具有良好的生物活性及免疫原性,且能够对小鼠乳腺炎模型提供一定的保护力,说明该基因有望作为亚单位疫苗预防奶牛乳腺炎有效的候选抗原。

关键词： ClfA配基结合区乳腺炎金黄色葡萄球菌免疫原性

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融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

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中国奶业协会2009年会

作者：刘冬光廖娟红于清龙陈颖钰陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6.以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法.克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因... 详细信息

本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6.以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法.克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG 0.4mmol L-1诱导3h,目的蛋白经SDS-PAGE证实表达在上清中.Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA.检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份.检测灵敏度为69%,而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中,两种ELISA均检出17份阴性血清,特异性都为94(17/18)。因此,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下.敏感性获得了显著提高.这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。

关键词：牛结核 Rv3872 CFP-10 ESAT-6 诊断

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国内外牛结核病的防控历史与现状

国内外牛结核病的防控历史与现状

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中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

牛结核病是主要由牛分枝杆菌引起的、慢性消耗性人兽共患传染病,对养牛业发展、食品安全与人类健康具有重大威胁。由于牛分枝杆菌宿主范围广,牛结核病无特异性疫苗,和快速诊断方法等原因,控制或根除牛结核病非常困难。目前已有许多发达... 详细信息

牛结核病是主要由牛分枝杆菌引起的、慢性消耗性人兽共患传染病,对养牛业发展、食品安全与人类健康具有重大威胁。由于牛分枝杆菌宿主范围广,牛结核病无特异性疫苗,和快速诊断方法等原因,控制或根除牛结核病非常困难。目前已有许多发达国家成功控制或根除了牛结核,但多耗时在二十年以上,耗资巨大。发展中国家受财力限制等多方面原因,有效控制牛结核病任重道远,发达国家控制牛结核的经验对发展中国家无疑具有借鉴意义。

关键词：牛结核病牛分枝杆菌特异性结核菌素皮内变态反应历史与现状

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免疫组织化学方法诊断猪圆环病毒病

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四川农业大学学报 2009年第4期27卷 475-478页

作者：林涛汪开毓邓桦何启盖马春全四川农业大学动物医学院四川雅安625014 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山528231 华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北重点实验室农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织... 详细信息

以猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV2-ORF2)重组蛋白为抗原,按常规免疫方法免疫家兔,制备兔抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白的IgG,以此IgG为第一抗体,采用免疫组织化学二步法,对临床疑似猪圆环病毒病例及RT-PCR确诊为阳性猪圆环病毒病例的肺脏组织切片进行检测。试验结果证明,该免疫组织化学方法具有良好的特异性、直观性,简单易行,可以对猪肺巨噬细胞中的存在的PCV2病毒抗原进行准确的定性和定位诊断。

关键词：免疫组织化学猪圆环病毒Ⅱ型诊断定位

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福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良早期生长板的组织病理学变化

福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良早期生长板的组织病理学变化

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中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会

作者：田文霞覃平王瑞杨世锦毕丁仁潘思轶郭定宗李家奎华中农业大学动物医学院华中农业大学食品科技学院山西农业大学动物科技学院华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

用160羽1日龄健康AA肉鸡进行试验,研究福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良（TD）早期的组织病理学变化。将试验肉鸡预饲一周后随即分为两组,对照组（control,C）饲以基础日粮,试验组（Thiram diet-fed,T）饲以基础日粮添加福美双100mg·... 详细信息

用160羽1日龄健康AA肉鸡进行试验,研究福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良（TD）早期的组织病理学变化。将试验肉鸡预饲一周后随即分为两组,对照组（control,C）饲以基础日粮,试验组（Thiram diet-fed,T）饲以基础日粮添加福美双100mg·kg,3d后继续饲以基础日粮,试验历时22d。在试验的第1、2、4、6、8、10、12、15天,观察病理剖检变化,并进行发病早期组织病理学观察。病理剖检结果表明,TD症状典型,试验组第1天生长板开始增厚,第2、4、6天症状持续加重,成骨区变薄,第8天以后除少数继续加重外,多数已开始不同程度的恢复,软骨栓逐渐缩小。组织病理学观察发现,生长板软骨细胞的数量、形态、排列和分布都发生了改变,增殖区细胞变稀疏,排列紊乱,部分细胞变圆,前肥大区与肥大区细胞大量聚集,增殖区细胞、前肥大、肥大细胞、核固缩细胞夹杂分布,血管坏死或无血管,钙化区域小。由此推测在肉鸡TD各个阶段可能都存在基因差异表达,为以后应用基因芯片技术高通量筛选肉鸡TD早期时序性差异表达基因,探索TD发病机理提供了可靠的理论依据。

关键词：肉鸡福美双胫骨软骨发育不良早期阶段组织病理学

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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR检测方法的建立与应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR检测方法的建立与应用

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第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：李彬刘苏燕高建峰赵付伟方六荣江云波肖少波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉 430070

2006年，我国暴发的“猪高热综合征”给我国养猪业带来了巨大的经济损失，经研究表明，其致病因子为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2缺失变异株。本研究根据PRRSV变异株的序列特征，以发生缺失的Nsp2为靶基因，设计一对... 详细信息

2006年，我国暴发的“猪高热综合征”给我国养猪业带来了巨大的经济损失，经研究表明，其致病因子为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2缺失变异株。本研究根据PRRSV变异株的序列特征，以发生缺失的Nsp2为靶基因，设计一对特异性引物，建立了能够同时检测PRRSVNsp2缺失变异株和经典PRRSV的RT-PCR鉴别诊断方法。研究表明，该方法特异性好，敏感性较高。通过对华中地区大量临床病料的检测，揭示华中地区目前流行的主要是PRRSV变异株，同时表明该方法简便、可靠，可以鉴别高致病性PRRSV，为PRRSV的鉴别诊断、流行病学研究及其预防和控制提供了很好的工具。

关键词：生猪养殖猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 RT-PCR检测方法

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猪肺疫与猪其他主要呼吸系统疾病的鉴别与诊断

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猪业科学 2009年第8期26卷 37-39页

作者：胡长敏龚瑞郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

猪肺疫是由多杀性巴氏杆菌引起的猪重要的呼吸系统传染性疾病,与猪急性咽喉型炭疽、猪传染性胸膜肺炎、猪喘气病、副猪嗜血杆菌病以及猪流感在临床症状和病理变化上存在不同程度的相似之处。对于猪肺疫与猪其他主要呼吸系统疾病的诊断... 详细信息

猪肺疫是由多杀性巴氏杆菌引起的猪重要的呼吸系统传染性疾病,与猪急性咽喉型炭疽、猪传染性胸膜肺炎、猪喘气病、副猪嗜血杆菌病以及猪流感在临床症状和病理变化上存在不同程度的相似之处。对于猪肺疫与猪其他主要呼吸系统疾病的诊断特征及鉴别方法做了综述,为临床上猪肺疫防治工作提供参考。

关键词：猪肺疫呼吸系统疾病鉴别诊断

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副猪嗜血杆菌病的诊断与防控

副猪嗜血杆菌病的诊断与防控

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第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：蔡旭旺何启盖吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉 430070

副猪嗜血杆菌病，又名猪多发性浆膜炎与关节炎，或称革拉瑟氏病(Glǎsser's Disease )。该病仅发生于猪，常见于5周龄到8周龄的保育猪，但从2周龄的哺乳仔猪到4月龄的育肥猪均可感染和发病。本文介绍了副猪嗜血杆菌病的病原、流行... 详细信息

副猪嗜血杆菌病，又名猪多发性浆膜炎与关节炎，或称革拉瑟氏病(Glǎsser's Disease )。该病仅发生于猪，常见于5周龄到8周龄的保育猪，但从2周龄的哺乳仔猪到4月龄的育肥猪均可感染和发病。本文介绍了副猪嗜血杆菌病的病原、流行病学、临床症状与病理变化，提出诊断和防治措施。

关键词：生猪养殖细菌感染副猪嗜血杆菌病诊断方法防控措施

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应关注猪大肠杆菌病的流行与危害

应关注猪大肠杆菌病的流行与危害

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第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：汤细彪吴斌喻红艳刘峰董超尹相帅陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉 430070

猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的猪的一类传染性疾病的总称，根据猪的日龄、生理与免疫状态等差异，疾病的发生有所不同，常见的猪大肠杆菌病分为三种，仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病，目前这些疫病发病机制与危害己被人们广泛认... 详细信息

猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的猪的一类传染性疾病的总称，根据猪的日龄、生理与免疫状态等差异，疾病的发生有所不同，常见的猪大肠杆菌病分为三种，仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病，目前这些疫病发病机制与危害己被人们广泛认识，并且得到了有效监控和防治。本文介绍了常见猪大肠杆菌病及流行情况，分析了肠外致病性大肠杆菌的危害。

关键词：生猪养殖大肠杆菌病细菌感染疫病防控

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