检索结果-内蒙古大学图书馆

猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的原核表达及其抗体检测ELISA方法

微生物学报 2008年第3期48卷 330-336页

作者：赵战勤薛云吴斌汤细彪陈焕春李增强胡睿铭张建民段龙川华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

[目的]以猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的原核表达产物为抗原建立检测PRN抗体的间接ELISA方法。[方法和结果]利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统对PRN基因在大肠杆菌中进行融合表达... 详细信息

[目的]以猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的原核表达产物为抗原建立检测PRN抗体的间接ELISA方法。[方法和结果]利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统对PRN基因在大肠杆菌中进行融合表达。SDS-PAGE和Westernblot检测证实该基因获得高效表达,产物易于纯化且具有良好的免疫学活性。通过凝血酶酶切GST-PRN并回收,获得不含GST载体蛋白的PRN蛋白片段。以PRN蛋白片段为抗原建立检测天然PRN抗体的间接ELISA方法。该方法对猪巴氏杆菌病等7种常见细菌性疾病阳性血清的检测结果均为阴性,其敏感性比乳胶凝集试验提高4～128倍,能检测到人工感染14d后的仔猪血清抗体IgG,对临床送检的1,229份猪血清的检测阳性率为32.7%。ELISA方法对阳性猪场的监测结果预示了保育期仔猪的合群导致猪群大量感染支气管败血波氏杆菌。[结论]该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于猪群PRN抗体水平监测和猪波氏菌病流行病学调查。

关键词：支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素 ELISA

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H1N1亚型猪流感病毒的拯救

引用

生物工程学报 2008年第5期24卷 857-861页

作者：彭亚平周红波李春金梅林华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细... 详细信息

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞,30h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5μg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒,为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。

关键词：猪流感病毒双向表达载体拯救共转染

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重组百日咳杆菌黏附素蛋白免疫小鼠可完全抵抗支气管败血波氏杆菌的致死性感染

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微生物学报 2008年第3期48卷 337-341页

作者：赵战勤薛云吴斌段龙川陈焕春汤细彪胡睿铭何华李增强华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】通过建立的小鼠呼吸道感染模型评价重组百日咳杆菌黏附素蛋白(GST-PRN)对小鼠的免疫保护效力。【方法和结果】在主动免疫保护试验中,GST-PRN免疫组小鼠能产生较高的PRN抗体水平,在使用3×LD50的支气管败血波氏杆菌HH0809株... 详细信息

【目的】通过建立的小鼠呼吸道感染模型评价重组百日咳杆菌黏附素蛋白(GST-PRN)对小鼠的免疫保护效力。【方法和结果】在主动免疫保护试验中,GST-PRN免疫组小鼠能产生较高的PRN抗体水平,在使用3×LD50的支气管败血波氏杆菌HH0809株进行呼吸道气雾攻毒后,其保护率为100%(20/20),但载体蛋白GST和PBS对照组小鼠的存活率仅为15%(3/20)和20%(4/20)。在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-PRN兔抗血清能100%(10/10)保护小鼠抵抗10×LD50的HH0809株的腹腔攻击,但GST兔抗血清和PBS免疫组小鼠的存活率均为0(0/10和0/9)。【结论】研究结表明重组PRN蛋白具有良好的免疫学活性,可作为亚单位疫苗或疫苗添加成分。

关键词：支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素免疫原性

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重组CFP-10／ESAT-6抗原ELISA法对活动性肺结核诊断的评估

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第9期28卷 847-850页

作者：詹枝华陈颖钰袁冶项杰周金海郭爱珍武汉市结核病医院 430083 华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

目的以rCFP-10／ESAT-6融合蛋白抗原、植物血凝素（PHA）、生理盐水分别处理活动性肺结核患者外周血致敏T淋巴细胞，测定同一标本IFN-γ释放水平，探讨其对结核感染与发病的诊断意义。方法病例组111例为临床确诊肺结核患者，对照组292... 详细信息

目的以rCFP-10／ESAT-6融合蛋白抗原、植物血凝素（PHA）、生理盐水分别处理活动性肺结核患者外周血致敏T淋巴细胞，测定同一标本IFN-γ释放水平，探讨其对结核感染与发病的诊断意义。方法病例组111例为临床确诊肺结核患者，对照组292例为经胸部透视和结核菌素试验（PPD）筛选的大学生。入选对象取血3．0ml，均分为3份，每管1．0ml，分别加入rCFP-10／ESAT-6融合蛋白、PHA和生理盐水，孵育后ELISA法测定IFN-γ的吸光度（A）值及其抗体。结果rCFP-10／ESAT-6融合蛋白处理：IFN-γ测定值病例组x=1．3885±0．6236，对照组x=0．2944±0．0917，组间t′=16．4259，P〈0．05；以0．42为切割值，病例组阳性率93．58％，对照组阳性率13．07％。PHA处理：病例组x=1．2463±0．5541，对照组x=0．5613±0．0640，t′=19．1797，P〈0．05。生理盐水处理：病例组x=0．0772±0．0444，对照组x=0．0290±0．0235，t′=13．9487，P〈0．05。病例组抗体阳性率66．36％，对照组7．19％。结论利用rCFP-10／ESAT-6融合蛋白为特异性抗原，ELISA法测定外周血致敏淋巴细胞IFN-γ释放水平对结核感染诊断的敏感性〉90％，且无论特异性或非特异性处理，活动性肺结核患者IFN-γ释放水平均明显升高，血清抗体阳性率也高于对照组。

关键词：结核分枝杆菌结核病 rCFP-10/ESAT-6融合蛋白酶联免疫吸附法 γ-干扰素

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伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

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畜牧兽医学报 2008年第5期39卷 645-651页

作者：龙晓婷刘俊磊郭洪习杨邱德新陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化... 详细信息

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。

关键词：伪狂犬病毒潜伏感染地塞米松组织分布免疫组织化学染色

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猪链球菌2型PCR快速检测试剂盒的研制及初步应用

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中国兽医学报 2008年第7期28卷 787-790页

作者：赵战勤向敏薛云吴斌胡睿铭汤细彪金梅林陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和... 详细信息

根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和稳定性。试剂盒能从病料8 h增菌的混合菌群中快速检测出猪链球菌2型菌株。试剂盒对临床样本的检测结果表明,猪链球菌2型在我国猪群发生的链球菌病例中不占主导地位。

关键词：猪链球菌2型 PCR 试剂盒特异性敏感性

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猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国农业科学 2008年第12期41卷 4209-4217页

作者：赵战勤裴洁薛云汤细彪吴斌何华周学利程相朝何启盖陈焕春华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室河南科技大学动物科技学院

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 05... 详细信息

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌(55.9%)、副猪嗜血杆菌(50.0%)、大肠杆菌(43.1%)、巴氏杆菌(25.5%)、绿脓杆菌(17.6%)和沙门氏菌(11.8%)。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明:各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。

关键词：支气管败血波氏杆菌流行病学协同感染毒力因子

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检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争ELISA方法的建立

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农业生物技术学报 2008年第4期16卷 555-561页

作者：卢顺向敏吴斌赵战勤汤细彪但汉并张建民何华陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗... 详细信息

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体。经实验确定抗原包被浓度223 ng/mL,待检血清最佳稀释度1∶2,酶标单抗AH12工作浓度1∶3 200,血清抑制率大于50%为阳性。稳定性试验表明,批间和批内变异系数均小于10%。应用竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时检测50份已知血清和82份未知血清,已知血清检测结果显示两者阳性符合率为90%,阴性符合率为100%;未知血清检测结果显示竞争ELISA的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%。表明所建立的单抗竞争ELISA方法具有敏感、特异、稳定和简便等特点,在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值。

关键词：多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体单抗竞争ELISA 抗体检测

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgGFc基因在HeLa细胞中的融合表达

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中国兽医学报 2008年第10期28卷 1145-1149页

作者：张明富陈汉阳彭博佟铁俦陈焕春郭爱珍华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

根据GenBank中发表的猪的IgG Fc段基因及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模板扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41S基因的质粒为模板扩增出IBVS1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV... 详细信息

根据GenBank中发表的猪的IgG Fc段基因及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模板扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41S基因的质粒为模板扩增出IBVS1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBVS1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)的真核表达载体pcD-NA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因猪IgG Fc基因真核表达融合表达

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蛋白AG检测多种动物弓形虫抗体AG-ELISA的效果评价

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湖北农业科学 2008年第6期47卷 692-695页

作者：张东林惠煜周艳琴王玉海方瑞聂浩王正松赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 河南省南阳市动物疫病控制中心河南南阳473010

利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体。对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等... 详细信息

利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体。对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等指标亦优于MAT法。在对临床上304份动物血清检测中,AG-ELISA法对猪、羊血清的阳性检出率高于MAT法,而对犬、猫血清的检出率则与MAT法相同。Kappa一致性试验表明,AG-ELISA法与MAT法符合良好。上述结果证实AG-ELISA法可用于多种动物弓形虫抗体的检测。

关键词：弓形虫重组MIC3 AG—ELISA

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