检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2008年第10期35卷 32-34页

作者：胡长庆赵京扬杨季芳熊尚凌陈忠法郝勃浙江万里学院生物与环境学院宁波315100 华中农业大学动物科技学院动物医学院武汉430070 华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用饲养试验和微生物平板分析法,观察不同芽孢杆菌对尼克珊瑚粉蛋用公雏生产性能和盲肠微生物菌群的影响。试验结果表明,8株芽孢杆菌中有2株对尼克珊蛋用公雏日增重有极显著促进作用(P<0.01),且芽孢杆菌促生长作用具有时间累积效应... 详细信息

采用饲养试验和微生物平板分析法,观察不同芽孢杆菌对尼克珊瑚粉蛋用公雏生产性能和盲肠微生物菌群的影响。试验结果表明,8株芽孢杆菌中有2株对尼克珊蛋用公雏日增重有极显著促进作用(P<0.01),且芽孢杆菌促生长作用具有时间累积效应。盲肠微生物区系分析试验结果表明,食用供试芽孢杆菌的试验鸡盲肠内容物中的微生物主要种群的数量和对照组相比发生很大改变,其中乳酸菌群和好氧菌群的数量较对照组分别减少1或2个数量级。因此,通过生产性能筛选出2株具有显著促生长效果的芽孢杆菌,且芽孢杆菌对生产性能的影响具有时间累积性,芽孢杆菌对鸡盲肠微生物菌群有显著影响。

关键词：芽孢杆菌蛋用公雏日增重盲肠细菌群

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金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 Δnuc1的构建

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中国生物工程杂志 2008年第11期28卷 43-47页

作者：唐俊妮周锐史贤明康名松陈焕春上海交通大学农业与生物学院食品科学与工程系陆伯勋食品安全研究中心上海200240 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 四川大学生命科学学院、四川大学动物疾病防控生物工程研究中心成都610065

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一... 详细信息

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2Δnuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220Δnuc1。

关键词：金黄色葡萄球菌 nucl nuc2 同源重组突变株构建

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CFP-10/ESAT-6特异性IFN-g释放反应诊断活动性肺结核的研究

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生物技术通报 2008年第S1期24卷 176-180页

作者：陈颖钰詹枝华郭爱珍项杰邓铨涛曾庆志杜义祥周金海魏武童庆伟陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室武汉430070 武汉市结核病医院武汉430083 武汉市结核病防治所武汉430030 华中农业大学校医院武汉430070

前期研究已经建立了基于结核分枝杆菌特异性抗原CFP-10/ESAT-6融合蛋白刺激外周血单核细胞IFN-γ释放反应,本研究旨在证实该方法在活动性肺结核及结核菌潜伏感染诊断中的意义。实验对象包括111例当地医院收治的活动性肺结核病人(病例组)... 详细信息

前期研究已经建立了基于结核分枝杆菌特异性抗原CFP-10/ESAT-6融合蛋白刺激外周血单核细胞IFN-γ释放反应,本研究旨在证实该方法在活动性肺结核及结核菌潜伏感染诊断中的意义。实验对象包括111例当地医院收治的活动性肺结核病人(病例组)及283例某大学入学新生(健康对照者)。采集肝素抗凝血,分别加入含结核菌抗原CFP-10/ESAT-6、植物血凝素及无刺激物(PBS)的细胞培养孔中,培养过夜,次日收集血清,进行IFN-γ检测。同时,对其中58位病人志愿者及46位健康对照志愿者进行了结核菌素(PPD)皮内变态反应。病例组与健康对照组的PPD皮内变态反应阳性率分别为79.3%(46/58)和76.1%(35/46),无显著差异(P>0.05),表明PPD皮内变态反应不能用于活动性肺结核的检测。病例组IFN-γ体外释放反应的阳性率为95.5%(106/111),而健康对照组阳性率为16.3%(46/283),两组间均存在极显著差异,表明IFN-γ体外释放反应诊断活动性肺结核具有很高的灵敏度(95.5%)与良好的特异性。在健康组中,IFN-γ体外释放反应与PPD皮内变态反应的总符合率为50.0%,且IFN-g体外释放反应阳性者中,83.3%为PPD皮内变态反应阳性;在病例组中,二者的总符合率为72. 4%,IFN-g体外释放反应阳性者中,77.8%为PPD皮内变态反应阳性。CFP-10/ESAT-6特异性IFN-γ体外释放反应诊断活动性肺结核具有很高的灵敏度与特异性,PPD皮内变态反应由于受卡介苗免疫等因素影响在我国不能用于诊断活动性肺结核病与结核菌感染。

关键词：结核 γ干扰素分枝杆菌 CFP-10 ESAT-6 结核菌素皮内变态反应 PPD

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利用S-层蛋白CTC在苏云金芽胞杆菌细胞表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白

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应用与环境生物学报 2007年第6期13卷 853-858页

作者：刘梅郭素霞胡思顺肖运才许青荣毕丁仁孙明华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统研究在细胞表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白PMGA1.2的可行性及其免疫原性,为研制能常温长期保藏和运输的禽用口服疫苗奠定基础.用部分pmga1.2基因(pmga1.2p)代替S-层蛋白ctc基因中部且位于表面... 详细信息

利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统研究在细胞表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白PMGA1.2的可行性及其免疫原性,为研制能常温长期保藏和运输的禽用口服疫苗奠定基础.用部分pmga1.2基因(pmga1.2p)代替S-层蛋白ctc基因中部且位于表面锚定序列slh下游的片段,构建了2个融合基因ctc-pmga1.2p和csa-ctc-pmga1.2p(csa表csaAB操纵元,其与S-层蛋白牢固地锚定到细胞表面密切相关);将含融合基因的重组质粒电转化入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株BMB171中,获得了2个重组菌株BCCG(含ctc-pmga1.2p和携带csaAB操纵元的质粒)和CG(含csa-ctc-pmga1.2p).血凝和血凝抑制试验结果显示,2个重组菌株均成功地在细胞表面展示了重组蛋白PMGA1.2P;小鼠免疫学实验证实,2个重组菌株所展示的重组蛋白均具有免疫原性,其中,重组菌株CG的免疫效果优于BCCG.结果表明,苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统可被用来研制热稳定性禽用口服疫苗.

关键词：苏云金芽胞杆菌 S-层表面展示鸡毒霉形体粘附素蛋白热稳定性口服疫苗

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利用苏云金芽胞杆菌细胞表面展示系统表达禽流感病毒NP蛋白

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微生物学报 2007年第3期47卷 486-491页

作者：刘梅李淑云赵昌明孙明毕丁仁胡思顺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 不详

首次利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)S-层蛋白CTC表面展示系统研究在Bt细胞表面展示禽流感病毒NP蛋白的可行性和最佳方案,为研制能常温长期保藏和运输的禽用口服疫苗奠定基础。用全长np基因或部分np基因(npp)代替S-层蛋... 详细信息

首次利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)S-层蛋白CTC表面展示系统研究在Bt细胞表面展示禽流感病毒NP蛋白的可行性和最佳方案,为研制能常温长期保藏和运输的禽用口服疫苗奠定基础。用全长np基因或部分np基因(npp)代替S-层蛋白ctc基因的3′-端或中部,构建了4个重组质粒pSNP(含ctc-np)、pCSA-SNP(csa-ctc-np)、pCTC-NPP(ctc-npp)和pCSNPP(csa-ctc-npp)。将重组质粒分别电转化入Bt受体菌株BMB171中,获得了5个重组菌株BN、BCN、C-S、BCCN和CN。用5个重组菌株的营养细胞做玻片凝集试验,结果显示5个重组菌株均成功地在细胞表面展示了NP蛋白。用5个重组菌株的营养细胞免疫小鼠,ELISA测定血清抗体效价,结果显示5个重组菌株均具有免疫原性,其中重组菌株CN的免疫原性最高,其含融合基因csa-ctc-npp,证明该种融合基因的构建方式最佳。这为利用S-层蛋白CTC表面展示系统构建展示其它禽类病原体抗原的重组菌株以研制禽用热稳定性口服疫苗奠定了基础。

关键词：苏云金芽胞杆菌 S-层表面展示禽流感病毒NP蛋白热稳定性口服疫苗

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三黄鸡CD154基因的克隆、序列分析与表达

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畜牧兽医学报 2007年第10期38卷 1032-1037页

作者：方亮肖少波江云波袁明涛马朝志李彬方六荣陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

CD154在抗原特异的T淋巴细胞和抗原提呈细胞的相互作用中发挥非常重要的作用。利用RT—PCR方法从三黄鸡的外周血单核细胞（PBMC）中克隆了鸡CD154基因全长cDNA，序列分析显示该基因cDNA全长819bp，可编码272个氨基酸。将克隆的鸡CD154全... 详细信息

CD154在抗原特异的T淋巴细胞和抗原提呈细胞的相互作用中发挥非常重要的作用。利用RT—PCR方法从三黄鸡的外周血单核细胞（PBMC）中克隆了鸡CD154基因全长cDNA，序列分析显示该基因cDNA全长819bp，可编码272个氨基酸。将克隆的鸡CD154全长cDNA克隆到原核表达载体pET-28a中获得表达质粒pET-28a—CD154，转化BL21（DE3）后未检测到特异性表达蛋白。进一步通过PCR获得去除信号肽（1～22aa）和跨膜区（23～46aa）的CD154基因片段（CD154d），并将其克隆到pQE80的6×His下游，在大肠杆菌中成功表达，获得分子量约27ku的融合表达蛋白6×His—CD154d。Western—blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。同时，将CD154基因全长cDNA插入真核表达载体pEGFP-C1的EGFP基因下游，获得真核表达质粒pEGFP—CD154，转染Hela细胞，荧光显微镜观察发现EGFP—CD154融合蛋白表达在细胞膜上，证实了鸡CD154的膜定位特性。本研究为进一步研究鸡CD154的结构与功能及其免疫佐剂效应奠定了基础。

关键词：鸡 CD154 克隆表达定位

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弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在IBRS-2细胞内的表达

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畜牧兽医学报 2007年第8期38卷 827-831页

作者：江涛张东林聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至***5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并... 详细信息

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至***5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫 MIC3 基因克隆真核表达

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弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 527-531页

作者：江涛周艳琴刘琴聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

应用PCR技术从刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2(rhpotry protein 2)的部分基因,构建pGEX-KG-ROP2重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转入*** BL21CodonPlus中,在IPTG诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果表明,扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9%,该基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000,可被兔抗弓形虫免疫血清识别。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白ROP2 基因克隆原核表达

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H5N1亚型禽流感病毒血凝素HA1蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面的展示及其对小鼠的免疫原性

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农业生物技术学报 2007年第3期15卷 371-377页

作者：刘梅卢林静黄军艳张书环毕丁仁孙明华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)S-层蛋白CTC表面展示系统研究了H5N1亚型禽流感病毒HA1蛋白在Bt细胞表面展示的可行性及其免疫原性。用部分血凝素基因(halp)替换S-层蛋白基因ctc中部且位于表面锚定序列slh下游的片段,构... 详细信息

利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)S-层蛋白CTC表面展示系统研究了H5N1亚型禽流感病毒HA1蛋白在Bt细胞表面展示的可行性及其免疫原性。用部分血凝素基因(halp)替换S-层蛋白基因ctc中部且位于表面锚定序列slh下游的片段,构建2个重组质粒pCTC-HA1P(含融合基因ctc-halp)和pCSHA1P(含融合基因csa-ctc-halp,csa表csaAB操纵元,其与S-层蛋白在细胞表面的锚定密切相关)。用电脉冲转化法将重组质粒转入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株BMB171中,获得2个重组菌株CH(含pCSHA1P)和BCCH(含pCTC-HA1P和pMIL-CSA(含csaAB操纵元))。用CH和BCCH的营养细胞作血凝和血凝抑制试验,结果表明CH和BCCH均成功地在细胞表面展示了目标外源抗原HA1。用CH和BCCH的营养细胞通过腹腔注射途径免疫小鼠,用ELISA测定血清抗体效价,结果显示2个重组菌株均具有免疫原性,其中CH的免疫效果强于BCCH。

关键词：苏云金芽胞杆菌 S-层表面展示 H5N1亚型禽流感病毒HA1蛋白热稳定性口服疫苗

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猪源产毒素多杀性巴氏杆菌HN-13株外膜蛋白H的基因克隆与特征(英文)

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农业生物技术学报 2007年第2期15卷 183-191页

作者：李良军黎璐李健张四化吴斌陈焕春周锐农业微生物学国家重点实验室动物病原分室华中农业大学动物医学院

传染性萎缩性鼻炎是养猪业中的一种重要的呼吸道传染病,产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是其重要的病原之一,外膜蛋白H(OmpH)在该菌的致病和免疫中发挥重要作用。以产毒素多杀性巴氏杆菌血清D型菌株HN-13基因组为模板,扩增... 详细信息

传染性萎缩性鼻炎是养猪业中的一种重要的呼吸道传染病,产毒素多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是其重要的病原之一,外膜蛋白H(OmpH)在该菌的致病和免疫中发挥重要作用。以产毒素多杀性巴氏杆菌血清D型菌株HN-13基因组为模板,扩增了ompH基因1020bp编码区,经过序列测定和生物信息学分析,发现OmpH蛋白具有典型的膜通道蛋白的特征。将ompH基因克隆到原核表达载体pET-28a中构建了重组表达质粒pET-ompH,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。用纯化的重组蛋白免疫家兔制备OmpH的抗血清,Western杂交显示抗血清能够与菌体蛋白发生特异性反应。以重组OmpH为包被抗原建立了间接ELISA方法,方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为2.89μg/mL,用56份参考阴性猪血清确定阴阳界限值为0.36(OD630)。用建立的ELISA方法对192份临床猪血清样品进行检测,结果显示OmpH抗体阳性率为51.6%(99/192),阴性率为48.4%(93/192)。研究为OmpH的进一步应用奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H 克隆表达结构预测

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