检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2007年第3期15卷 378-382页

作者：赵战勤卢顺吴斌刘国平张建民何华何启盖金梅林陈焕春武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

根据TMpred生物学软件对SLT-ⅡeA亚基的蛋白质结构分析结果,表达了猪水肿毒素(SLT-Ⅱe)A亚基。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达产物以可溶形式存在,易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明,表达产物不能致死小白鼠,也... 详细信息

根据TMpred生物学软件对SLT-ⅡeA亚基的蛋白质结构分析结果,表达了猪水肿毒素(SLT-Ⅱe)A亚基。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达产物以可溶形式存在,易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明,表达产物不能致死小白鼠,也不具有Vero细胞毒性。体外细胞毒性中和试验表明,表达产物的兔抗血清能中和天然SLT-Ⅱe(中和度90.4℅)。在小鼠免疫保护力试验中,表达产物作为免疫原不能提供任何保护力。以表达产物为抗原建立检测SLT-Ⅱe抗体的间接ELISA方法,结果该方法对猪萎缩性鼻炎等9种常见细菌性疾病阳性血清的检测均为阴性,能特异性检测到人工感染猪水肿毒素8d仔猪的血清抗体IgG,对临床送检的1083份猪血清的检测阳性率为20.9℅。

关键词：猪水肿病猪水肿毒素生物学特性 ELISA

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温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

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华中农业大学学报 2007年第6期26卷 817-821页

作者：李树清杜凯胡永强陈声国陈志飞周艳琴赵俊龙上海出入境检验检疫局上海200135 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温... 详细信息

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温氏附红细胞体16S rRNA基因序列的特异性片段,检测温氏附红细胞体最低DNA量为0.178 fg。利用该方法对湖北省、江苏省和黑龙江省温氏附红细胞体病感染情况进行了流行病学调查,结果显示阳性感染率分别为10.3%、5.3%、45.8%,说明温氏附红细胞体在湖北省、江苏省和黑龙江省均存在,流行病学调查显示湖北省感染率较高、流行较广。

关键词：温氏附红细胞体 PCR 16SrRNA 应用

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苏云金芽胞杆菌无晶体突变株对小鼠和雏鸡的安全性

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安全与环境学报 2007年第5期7卷 12-15页

作者：刘梅胡思顺孙焕毕丁仁孙明华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304为受试菌株,对小鼠和雏鸡进行安全性测试,考察BMB304在鸡肠道中的存留情况,以探索利用苏云金芽胞杆菌S-层表面展示系统研制热稳定性禽用口服活菌疫苗的安全性和可行性。小鼠腹腔一次性注射1010CFUBMB... 详细信息

以苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304为受试菌株,对小鼠和雏鸡进行安全性测试,考察BMB304在鸡肠道中的存留情况,以探索利用苏云金芽胞杆菌S-层表面展示系统研制热稳定性禽用口服活菌疫苗的安全性和可行性。小鼠腹腔一次性注射1010CFUBMB304菌液1.0mL,观察14d,未发现有急性毒性反应。小鼠饮用含BMB304108CFU/mL、107CFU/mL和106CFU/mL的饮用水28d,各组小鼠精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组小鼠体重变化、脏器系数、血常规指标及血液生化指标与对照组无显著性差异。雏鸡24h内灌服1010CFUBMB304芽胞液1.0mL,14d内未出现急性毒性反应。饲喂雏鸡含BMB304芽胞108CFU/g、107CFU/g和106CFU/g饲料28d,雏鸡精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组的日增重与对照组差异不显著。饲喂雏鸡含BMB304芽胞106CFU/g饲料3d后,经测定,芽胞能在肠道中萌发并至少存留5d但不超过7d。研究表明,苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304对小鼠和雏鸡安全无毒,且能在鸡肠道内暂时定植,能被用于研制在细胞表面展示外源抗原并能常温长期保存的新型禽用口服疫苗。

关键词：家畜微生物学苏云金芽胞杆菌小鼠雏鸡安全性

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅲ A基因的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 830-833页

作者：汪招雄何启盖刘军发刘正飞陈焕春长江大学动物科学学院湖北荆州434023 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

应用PCR方法扩增猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinabacillus pleuropneumoniae,App)编码毒素A结构蛋白的完整基因,连接到载体pMD18-T中,经Not和Snab双酶切后连接到用同样酶切的表达载体pPIC9k上,转化GS115酵母感受态细胞,经甲醇诱导表达... 详细信息

应用PCR方法扩增猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinabacillus pleuropneumoniae,App)编码毒素A结构蛋白的完整基因,连接到载体pMD18-T中,经Not和Snab双酶切后连接到用同样酶切的表达载体pPIC9k上,转化GS115酵母感受态细胞,经甲醇诱导表达了分泌到胞外的Apx A蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白约为110 000,与预期相符。Dot-blot和ELISA检测结果表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。为进一步研究Apx A蛋白的结构和功能,研制App重组诊断抗原或亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅢA基因 Pichia pastoris 分泌表达

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几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较

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安徽农业科学 2007年第8期35卷 2285-2286页

作者：江涛龚大春陈声国聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 长江大学动物科学学院湖北荆州434025 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清。研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1∶4 096... 详细信息

用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清。研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1∶4 096(IHA),与每次都使用抗原的传统免疫程序制备的抗体效价相当,但所用抗原剂量减半,该法优于另外2种免疫程序。

关键词：刚地弓形虫免疫方法抗体

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血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

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湖北农业科学 2007年第3期46卷 427-430页

作者：江涛何会时龚大春陈声国聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学动物医学院荆州市畜牧局湖北荆州434100 长江大学动物科学学院湖北荆州434025 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第... 详细信息

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第14d)和IHA(第20d);检出持续时间方面,LAT(54d)长于ELISA(44d)和IHA(19d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8)。试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测。

关键词：龚地弓形虫 rMIC3 ELISA LAT IHA

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西加毒素细胞毒性检测方法的建立

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华中农业大学学报 2007年第4期26卷 502-506页

作者：郑露朱海郭爱珍范放李金峰赵芳杨小夏洪小柳马淑棉司徒翠华深圳市出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心深圳518067 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070

小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细... 详细信息

小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细胞与毒素作用不同时间,西加毒素剂量(x)与光密度值(y)之间的线性关系呈现差异。在10 h、15 h及20 h等不同时间,其线性方程分别为y=-0.082 6x+0.923 0(R2=0.978 9)、y=-0.044 3x+0.601 5(R2=0.962 1)、y=-0.020 4x+0.323 7(R2=0.928 1)。以10 h的检测效率最高及检测结果最准确,因此将其定为最佳检测时间。细胞病变观察也证实了以上结果。

关键词：西加毒素(P-CTX-1) 细胞毒性试验四甲基偶氮唑蓝(MTT)

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副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国兽医科学 2007年第11期37卷 964-968页

作者：石碧崔耀文贾凡金卉万云蔡旭旺方刚陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 武汉水产科学研究所湖北武汉430065

为建立副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学诊断方法,通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件,提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖(CPS),并以之为抗原分别建立了间接血凝试验(IHA)和间接ELISA两种抗体检测方法,对其特异性、敏感性和符合率进行... 详细信息

为建立副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学诊断方法,通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件,提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖(CPS),并以之为抗原分别建立了间接血凝试验(IHA)和间接ELISA两种抗体检测方法,对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究.结果表明,两种检测方法的特异性良好,但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍,二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79.7%、55.2%和65.3%.用这两种方法检测了320份临床送检猪血清,IHA和ELISA的阳性率分别为40%和59%.结果证实,这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查.

关键词：副猪嗜血杆菌荚膜多糖间接血凝试验间接ELISA

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禽流感病毒A/duck/Hubei/W1/2004(H9N2)的基因组序列分析及其分子进化

禽流感病毒A/duck/Hubei/W1/2004(H9N2)的基因组序列分析及其分子...

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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：徐晓娟徐高原周红波喻正军宋云峰金梅林陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

合成8对引物,通过 RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)扩增了禽流感病毒 A/duck/Hubei/W1/2004(H9N2)(Dk/Hub/W1/04)全长的8个基因片段,所得的 cDNA(complementary DNA) 进行了序列分析,结果显示,PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M 和 NS 基因的大小依次为2341bp、2341bp、2233bp、 1742bp、1565bp、1457bp、1207bp 和890bp,以上序列在 GeneBank 的登陆号为：DQ465397～DQ465404。将该毒株与我国前期一些 H9N2代表性毒株的基因序列进行了同源性比较,结果表明,其8个基因与我国河北分离的 A/chicken/Hebei/31/2000(H9N2)毒株的同源性为99．0%～99．9%,与香港地区的毒株 A/Duck/ HongKong/Y280/97(H9N2)(Dk/HK/Y280/97)的同源性为97．8%～99．3%,与我国最早分离到的 H9N2的禽流感毒株 A/Chicken/Beijing/1/94(H9N2)(Ck/Beij/1/94)的同源为94．5%～98．2%。分子进化分析表明,Dk/ Hub/W1/04毒株的8个基因片段都来源于 Ck/Beij/1/94毒株,其中 HA 和 NA 基因与 Dk/HK/Y280/97毒株形成两个平行的亚群同时进化,而6个内部基因是由来源于 Ck/Beij/1/94的 Dk/HK/Y280/97毒株进一步进化而来。进一步对该毒株 HA 蛋白的预期氨基酸序列进行了分析,发现其的裂解位点为 R-S-S-R(Arg- Ser-Ser-Arg)模式,受体结合位点的226位为谷氨酸(Gln,Q),这些特征与 Ck/Beij/1/94毒株的一致。此外,Dk/Hub/W1/04毒株6个内部基因与湖北地区分离到的高致病性 H5N1禽流感病毒 A/chicken/Hubei/ 327/21304(H5N1)的同源性为88．0%～99．1%,进化关系也较远。总之,以上结果表明,Dk/Hub/W1/04是一株遗传进化上相对稳定的、保持了禽源特征的 H9N2亚型流感病毒毒株。

关键词：禽流感病毒基因组序列分析 A/duck/Hubei/W1/2004 分子进化

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以NP和M2为靶序列的RNA干扰分子抑制流感病毒在细胞和小鼠体内的复制

以NP和M2为靶序列的RNA干扰分子抑制流感病毒在细胞和小鼠体内的...

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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：周红波全梅林喻正军徐晓娟彭亚平陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

本研究选用流感病毒中高度保守的 NP 和 M2基因作为 RNA 干扰的靶基因,设计了5对 siRNA(pS- NP749,pS-NP1383,pS-M48,pS-M754,pS-M949),通过载体介导,研究了这些 siRNA 对基因表达的影响

关键词：流感病毒 RNA 靶序列

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