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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：吴庆华黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学武汉430070

[目的]本研究系统比较T-2毒素在主要的食品动物(猪、鸡、鲤和草鱼)和大鼠的肝细胞、肝微粒体肝胞液中的代谢,代谢物将通过精确、快速、灵敏的HPLC-MS-IT-TOF检测.[方法]动物肝微粒体、0.05M Tris-HCl和NADPH生成系统.体系在37℃(鱼28℃... 详细信息

[目的]本研究系统比较T-2毒素在主要的食品动物(猪、鸡、鲤和草鱼)和大鼠的肝细胞、肝微粒体肝胞液中的代谢,代谢物将通过精确、快速、灵敏的HPLC-MS-IT-TOF检测.[方法]动物肝微粒体、0.05M Tris-HCl和NADPH生成系统.体系在37℃(鱼28℃)下预孵育5 min后,加入T-2毒素开始孵育,时间持续120 min,沉淀蛋白终止反应.离心结束后,取上清液,并过0.22 μm滤膜.滤液中T-2毒素及其代谢物最终通过LC/MS-IT-TOF检测分析.[结果]T-2毒素还主要被代谢成了HT-2毒素、Newsolaniol(NEO)、3'-OH-T-2、3'-OH-HT-2、T-2 triol五种代谢物.在肝微粒体中,HT-2、NEO、3'-OH-T-2、3'-OH-HT-2毒素在大鼠、鸡和猪中均被发现.在草鱼没有发现3'-OH-HT-2毒素,而在鲤中,未发现HT-2毒素.此外,在鲤鱼和草鱼的肝微粒体中,羟基化代谢物占主要部分,而猪,鸡和大鼠中,则HT-2毒素为主要代谢物.在肝细胞中,NEO和HT-2毒素被发现.[结论]本研究首次揭示了T-2毒素在不同种属动物肝脏中的代谢特点.同时,本研究首次研究了T-2毒素在鲤肝脏中的代谢途径.水解代谢产物HT-2毒素是陆地动物猪、鸡、大鼠的共同主要代谢物.相比水解代谢,陆地动物猪、鸡、大鼠对T-2毒素的羟基化能力要低很多.但鱼类去刚好有相反的代谢趋势,我们发现猪、鸡、大鼠中常见的代谢物HT-2毒素,在草鱼和鲤鱼的肝脏中很少产生,但3'-OH-T-2毒素却占主导方式,这预示着,鱼类对T-2毒素的代谢与陆地动物存在较大差异.

关键词： T-2毒素肝脏代谢

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生物等效性研究进展

生物等效性研究进展

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第十一届全国数学药理学学术会议

作者：郑欢庆黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU) 农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学湖北武汉 430070

生物等效性的评价已越来越引起全世界特别是欧美等国的药品管理和监测部门的关注。在美国药品管理法规中说明，两种药物产品或制剂的生物利用度相等时，即这两种药物制剂的生物等效性相同。欧盟有关药品法规中将药物生物等效性定义为：... 详细信息

生物等效性的评价已越来越引起全世界特别是欧美等国的药品管理和监测部门的关注。在美国药品管理法规中说明，两种药物产品或制剂的生物利用度相等时，即这两种药物制剂的生物等效性相同。欧盟有关药品法规中将药物生物等效性定义为：在相同的实验条件下，两种药物制剂中的活性成分的生物利用度均值之差异经统计检验，差异不显著。本文对兽药生物等效性的研究情况进行了简要论述。

关键词：生物等效性药品管理兽药药动学药物安全

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甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速检测方法研究

甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：韩肖亚刘振利谢长清董国良袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合... 详细信息

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合成半抗原DVD-HS,又以甲氧苄啶（TMP）为原料合成半抗原TMPCOOH。DVD-HS和TMPCOOH分别与BSA、OVA等大分子蛋白偶联,制备完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-HS-DCC-OVA、TMPCOOH-DCC-BSA和TMPCOOH-DCC-OVA。以二甲氧苄啶（DVD）为半抗原,BSA和OVA连接,制备完全抗原DVD-GA-BSA和DVD-GA-OVA。将完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-GA-BSA和TMPCOOH-DCC-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,监测小鼠血清效价和特异性。通过单克隆技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生法制备单克隆抗体。以TMPCOOH-DCC-OVA为包被原、TMP为竞争物,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA方法。按1、2、4倍定量限（LOQ）向牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉和鸡肝脏样品中添加TMP标准溶液。样品经前处理后用制备的单克隆抗体进行ELISA检测,研制试剂盒产品。[结果]半抗原经质谱鉴定合成成功,人工抗原经紫外分光光度计鉴定成功。动物免疫后,经筛选,获得单克隆杂交瘤细胞株TMP/2Gl,该杂交瘤细胞株的染色体数平均为103.4。经鉴定亚型为IgGl。ELISA优化结果表明,包被原最佳浓度为100 g/L,单克隆抗体的最佳稀释度为1:16000;标准曲线回归方程为y=（A-D）/[1+（1000x/C）^B]+D,A=0.9244,B=6.5644,C=2.34793,D=0.09546,R=1.00000,IC值为0.232±0.007 g/L（n=5）,线性范围为0.0125～3.2 g/L,灵敏度为0.053 g/L。该抗体对其他五种甲氧苄啶类药物的IC50值分别为DVD （0.527μg/L）、ADP （1.479μg/L）、BQP （4.354μg/L）、OMP （0.965μg/L）、BMP （0.119μg/L）,交叉反应率分别为DVD（44%）、ADP（15.7%）、OMP（24%）、BQP（5.3%）、BDP（195%）,且与磺胺类药物无交叉反应。样品添加实验结果表明药物回收率为81.4%～107.7%,批内和批间变异系数均小于20%,结果表明药物说明该ELISA方法的准确性和重复性良好。通过与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对比考核,R2=0.994,相关性良好,由此可说明本试验建立的检测方法是真实可靠的。[结论]本研究通过分子模拟技术,设计出了一种新颖的半抗原,基于此半抗原,获得了一种可识别6种甲氧苄啶类药物的广谱性抗体,与现有的同类单克隆抗体相比较其灵敏度较高、广谱性较强,具有一定的学术意义。基于该抗体,本研究建立了牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉、鸡肝脏中甲氧苄啶类药物的多残留ELISA检测方法,该方法样品前处理简单、检测限较低、准确性和重复性较好,具有广阔的应用前景。

关键词：甲氧苄啶类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物可食性组织

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喹赛多及其两种代谢产物在大鼠体内消除规律研究

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中国兽药杂志 2017年第4期51卷 42-49页

作者：斯琴朝克图黄玲利袁宗辉湖北工程学院生命科学技术学院湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心湖北孝感432000 国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室国家兽药安全评价实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

通过喹赛多(Cyadox,CYX)在大鼠体内消除规律研究,了解其对食品安全的影响,并为今后的药理学和毒理学研究提供较为详细的数据基础,研究建立了喹赛多及其两种主要代谢产物脱二氧喹赛多(BDCYX)和喹噁啉-2-羧酸(QCA)的提取和HPLC检测方法,... 详细信息

通过喹赛多(Cyadox,CYX)在大鼠体内消除规律研究,了解其对食品安全的影响,并为今后的药理学和毒理学研究提供较为详细的数据基础,研究建立了喹赛多及其两种主要代谢产物脱二氧喹赛多(BDCYX)和喹噁啉-2-羧酸(QCA)的提取和HPLC检测方法,并以大鼠作为研究载体,按推荐剂量连续混饲给药7 d后,研究喹赛多及其两种代谢物在血浆、肌肉、肝脏中消除规律;一次性灌胃给药后研究喹赛多及其两种代谢物在排泄物中的消除规律特点。结果表明,CYX和BDCYX在0~24 h和24~48 h时间段的粪便中可大量检出,在血浆、肌肉、肝脏和尿液中未检出;QCA在6 h的肌肉中有少量残留,在肝脏中一直到72 h还有一定量的残留,在血浆和粪便中未发现其存在。本研究结果为今后喹赛多在体内处置研究提供了可直接借鉴的技术手段和理论基础。

关键词：喹赛多脱二氧喹赛多喹噁啉-2-羧酸消除规律

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喹嗯啉类药物的遗传毒理学研究进展

喹嗯啉类药物的遗传毒理学研究进展

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：王旭 IHSAN Awais 袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院武汉 430070

喹噁啉类化合物(Quinoxalines)是人工合成的具有喹噁啉-1.4-二氧化物基本化学结构的动物抗菌促生长药物，具有良好的抑制革兰氏阴性菌作用，促进蛋白吸收、合成和促生长效果，20世纪70年代以来在全世界范围内曾被广泛应用。喹噁啉类化... 详细信息

喹噁啉类化合物(Quinoxalines)是人工合成的具有喹噁啉-1.4-二氧化物基本化学结构的动物抗菌促生长药物，具有良好的抑制革兰氏阴性菌作用，促进蛋白吸收、合成和促生长效果，20世纪70年代以来在全世界范围内曾被广泛应用。喹噁啉类化合物的主要品种有卡巴氧(Carbadox)、喹乙醇(Olaquindox)、痢菌净(Mequindox)喹烯酮(Quinocetone)等。本文仅对喹噁啉类药物的遗传毒理学研究逐一作简要综述。

关键词：喹噁啉类化合物遗传毒理学抗菌药物革兰氏阴性菌卡巴氧

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玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及其在动物组织与饲料中的ELISA快速检测方法研究

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及其在动物组织与饲料中的ELISA快...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：董国良刘振利谢长清韩肖亚袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种玉米赤霉烯酮的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织和动物饲料中此类毒素的筛选检测。[方法]本研究以玉米赤霉烯酮为原料连接羧甲基羟胺... 详细信息

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种玉米赤霉烯酮的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织和动物饲料中此类毒素的筛选检测。[方法]本研究以玉米赤霉烯酮为原料连接羧甲基羟胺（CMO）,合成半抗原ZEN-CMO,分别与大分子蛋白KLH、BSA、HSA和OVA进行偶联,制备完全抗原ZEN-CMO-KLH、ZEN-CMO-BSA、ZEN-CMO-HSA和ZEN-CMO-OVA。以玉米赤霉烯酮为原料合成半抗原7-NH-ZEN,通过戊二醛（GA）法与BSA连接,制备完全抗原7-NH-ZEN-GA-BSA。将人工抗原ZEN-CMO-BSA/HSA/KLH和7-NH-ZEN-GA-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,监测小鼠血清效价和特异性。通过单克隆技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生法制备单克隆抗体。以ZEN-CMO-OVA为包被原、ZEN为竞争物,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA方法。按1、2、4倍定量限（LOQ）向玉米、猪饲料、猪肉、猪肝脏、猪肾脏和牛奶样品中添加ZEN标准溶液。样品经前处理后用制备的单克隆抗体进行ELISA检测,研制试剂盒产品。[结果]半抗原经质谱鉴定合成成功,人工抗原经紫外分光光度计鉴定成功。动物免疫后,经筛选,获得单克隆杂交瘤细胞株ZEN/6C2,该杂交瘤细胞株的染色体数平均为100.7,经鉴定亚型为IgG。ELISA优化结果表明,包被原最佳浓度为1μg mL,单克隆抗体的最佳稀释度为1:64000;标准曲线回归方程为y=（A-D）/[1+（x/C）]+D,A=0.97351,B=7.47822,C=2.03041,D=0.07020,R=0.99977,IC值为114.0±5.0ng L（n=5）,线性范围10～6250ng L。标准曲线的板内和板间变异系数均小于15%,灵敏度为11.3ng L。该抗体对α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的交叉反应率分别为89.5%、39.3%、99.2%、55.5%和44.3%。样品添加实验结果表明药物回收率为62.9%～113.6%,批内和批间变异系数均小于15%,结果表明药物说明该ELISA方法的准确性和重复性良好。通过与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对比考核,该ELISA方法与LC-MS/MS方法相关性良好,相关系数为0.995,表明该ELISA方法的检测结果切实可靠。[结论]本研究制备了一种能够同时识别玉米赤霉烯酮及其5种代谢产物的广谱单克隆抗体,与国内外同类抗体相比灵敏度较高,广谱性好;基于该抗体建立了玉米、饲料、动物可食性组织及牛奶中玉米赤霉烯酮及其5种代谢物的ELISA检测方法,填补了该方法在动物可食性组织和牛奶中玉米赤霉烯酮类霉菌毒素检测的空白,为玉米赤霉烯酮类霉菌毒素多残留酶联免疫检测产品的研发奠定了基础,具有较高的学术价值和广阔的应用前景。

关键词：玉米赤霉烯酮类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物组织饲料

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猪可食性组织中四环素类残留检测-液相色谱-串联质谱法

猪可食性组织中四环素类残留检测-液相色谱-串联质谱法

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：余欢陶燕飞陈冬梅王玉莲袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学兽药研究所

【目的】四环素类药物(Tetracyclines,TCs)是一类碱性广谱、快速抑菌剂,能有效抵抗革兰氏阳性菌和阴性菌及立克次氏体、支原体属、螺旋体等。用于控制动物感染疾病而提高增重率。但使用不当会导致其在动物可食性组织中的残留,对人类健... 详细信息

【目的】四环素类药物(Tetracyclines,TCs)是一类碱性广谱、快速抑菌剂,能有效抵抗革兰氏阳性菌和阴性菌及立克次氏体、支原体属、螺旋体等。用于控制动物感染疾病而提高增重率。但使用不当会导致其在动物可食性组织中的残留,对人类健康造成危害。欧盟和我国农业部规定猪肌肉中四环素、土霉素和金霉素的最大残留均为100μg/kg,肝脏为300μg/kg,肾脏为600μg/kg。四环素类药物稳定性差,长时间的样品前处理会使四环素类药物的回收率大大降低。本文将快速溶剂萃取法与串联质谱检测法相结合,建立猪可食性组织中7种四环素类药物残留的定量确证方法,方法集快速溶剂萃取法的快捷及质谱分析法的准确于一体,提高样品前处理的回收率,为残留监控提供有力的技术支撑。【方法】采用快速溶剂萃取法,以甲醇和三氯乙酸为提取溶剂提取动物组织中的7种四环素类药物,提取温度为60℃,压力为65 Bar,固相萃取净化,乙腈和甲酸水溶液洗脱。液相色谱-串联质谱检测。色谱柱:ZORBAX SB-C18,5μm,4.6 mm×250 mm;柱温:35℃:流动相:C:乙腈:D:0.1%甲酸水溶液。梯度洗脱程序:0～8.0 min,13%C～65%C:8～15.0 min,65%C～65%C:15.0～15.1min,65%C～13%C;15.1～20min,13%C～13%C。流速:0.2 mL/min:柱温:40℃:进样体积:10μL。【结果】该方法对猪肌肉、肝脏和肾脏中的7种四环素类药物的检测限均为0.2μg/kg,定量限均为0.5μg/kg。组织样品在0.5～2.0μg/kg的添加浓度范围内,平均回收率在78.8～105.2%之间,变异系数在5.7～10.8%之间。【结论】本方法前处理时间短,消耗溶剂少,提取效率高,分析简便,检测限低,符合残留分析的要求。

关键词：四环素快速溶剂萃取法猪组织液相色谱-串联质谱残留分析

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喹赛多毒理学研究

喹赛多毒理学研究

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会

作者：王旭黄伶俐王玉莲方桂杰袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

喹赛多为华中农业大学兽药研究所在国内首次合成。文章就近年来喹赛多的急性毒性、亚慢性毒性、遗传毒性、繁殖与致畸、长期毒性、光敏毒性等毒理学研究进行综述。

关键词：兽药喹赛多毒理学动物试验

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吩噻嗪类单克隆抗体的制备及其在动物饲料中的ELISA快速检测方法研究

吩噻嗪类单克隆抗体的制备及其在动物饲料中的ELISA快速检测方法...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会

作者：王涓王玉莲袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学中国武汉430070

[目的]吩噻嗪类药物属于作用于中枢神经系统的药物，它们与相应受体结合产生作用，能够使动物镇静、嗜睡，或对周围的环境冷漠。兽医临床上，常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用，以减少应激反应，降低死亡率。... 详细信息

[目的]吩噻嗪类药物属于作用于中枢神经系统的药物，它们与相应受体结合产生作用，能够使动物镇静、嗜睡，或对周围的环境冷漠。兽医临床上，常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用，以减少应激反应，降低死亡率。若长期摄入吩噻嗪类药物，会导致对心血管系统、循环系统、神经系统等产生副作用，还可引起远期毒性作用，以及诱导致畸、致癌、致突变作用;且该类药物可通过胎盘屏障和血脑屏障，进入乳汁，对婴儿或幼畜产生呼吸抑制作用。因此，这类药物在动物可食性组织中的残留可严重威胁消费者和动物的健康。故加强对这类药物在动物饲料中的快速检测方法研究十分重要。

关键词：吩噻嗪类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物饲料

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空肠弯曲杆菌大环内酯类耐药产生机制和适应性分析

空肠弯曲杆菌大环内酯类耐药产生机制和适应性分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郝海红戴梦红王玉莲彭大鹏刘振利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院

【目的】分析空肠弯曲杆菌对大环丙酯类耐药性的产生机制和相关适应性。【方法】将两株来自不同地区的空肠弯曲杆菌菌株(*** ATCC 33291和实验室分离菌株H1)用固定浓度的泰乐菌素进行体外长期诱导,以获得耐药菌。对所获得的耐药菌进行... 详细信息

【目的】分析空肠弯曲杆菌对大环丙酯类耐药性的产生机制和相关适应性。【方法】将两株来自不同地区的空肠弯曲杆菌菌株(*** ATCC 33291和实验室分离菌株H1)用固定浓度的泰乐菌素进行体外长期诱导,以获得耐药菌。对所获得的耐药菌进行体外长期进化试验,以获得进化菌。PCR扩增和测序用于分析耐药菌和进化菌对大环丙酯类药物的耐药相关突变。生长曲线和配对竞争生长试验用于反映和评价敏感菌、耐药菌以及进化菌分别在单纯的和混合的生长环境下的生长力和相对适应性。【结果】两株母源敏感菌在固定浓度的泰乐菌素的长期诱导条件下,逐渐获得了对大环内酯类药物的高水平耐药,而且这种耐药性表现出很强的稳定性。测序结果发现这些稳定的高水平耐药菌株在其23S rRNA的三个重复子上都含有A2074C的点突变。由配对竞争试验获得的相对适应性结果显示含有此突变点的耐药菌在没有药物选择压力下表现出一定的适应性代价,当耐药菌和敏感菌共同孵育的时候,耐药菌的竞争力相对敏感菌弱,在长期孵育过程中,耐药菌会逐渐被敏感菌所取代。经过长期进化实验.这些耐药菌株的适应性代价并没有获得补偿。【结论】虽然空肠弯曲杆菌在长期药物作用环境下可以表现出对大环丙酯类药物的高水平耐药性,但是这些耐药菌株在没有药物选择压力下,会逐渐被敏感菌取代。

关键词：空肠弯曲杆菌大环内酯类耐药性耐药突变相对适应性

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